海藻酸钠包埋法制备固定化菠萝蛋白酶

以海藻酸钠为载体,包埋法固定菠萝蛋白酶,对固定化奈件进行优化,同时探讨固定化菠萝蛋白酶的部分酶学性能。结果表明：固定化菠萝蛋白酶的质量受海藻酸钠质量分数、固定化酶量、固定化时间以及CaCl2质量分数的影响,其最佳固定化条件为：海藻酸钠质量分数1．0％,CaCl2质量分数3％,固定化酶液量与海藻酸钠体积之比1：2,固定化时间60min,在此条件下,制备的固定化菠萝蛋白酶的比活力为211．8U／g（湿质量载体）,由此制得的固定化酶的最适pH为7．6,与游离酶相比,升高了0．8个pH单位,同时显示固定化菠萝蛋白酶能耐受较高的碱性环境,固定化酶最适温度与游离酶相同,均为50℃,固定化酶在较高温度范围内,仍能保持较高的相对活力。     

响应面法优化唐古特白刺种子总黄酮超声提取工艺

利用响应面法优化超声辅助提取唐古特白刺种子总黄酮的工艺。在单因素试验基础上筛选出乙醇浓度、超声时间、超声温度三个主要因素,并通过响应面分析得出最佳组合条件为:乙醇浓度66%,超声时间68min,超声温度42℃,在此最佳条件下实际测得总黄酮含量为1.20%,接近于模型预测值1.21%。试验结果表明,采用响应面法优化得到的工艺条件参数准确、可靠,具有实用价值。     

云南红豆杉内生真菌分生孢子的固定化研究

目的:建立TTC法测定红豆杉内生真菌分生孢子的固定化效果.方法:用海藻酸钠包埋云南红豆杉内生真菌12.3.2分生孢子制成固定化孢子.通过TTC法测定红豆杉内生真菌分生孢子的活力,并以此来考察海藻酸钠的浓度、CaCl2浓度、固定化时间以及温度对固定化效果的影响.结果:通过实验确定,当海藻酸钠浓度为4.0%,CaCl2浓度为2.6%,固定化时间为6h,包埋率为46%,温度为40℃时,内生真菌12.3.2活力最强,固定化效果最佳.结论:TTC法可以准确反应红豆杉内生真菌分生孢子的固定效果,固定的分生孢子具有更好的发酵特性.     

固定化植物乳杆菌的制备及其发酵条件优化

采用海藻酸钠包埋植物乳杆菌并通过测定固定化细胞发酵清液的抑菌效果,优化得到的固定化最佳工艺条件为:海藻酸钠浓度为3%,CaCl2浓度为1.5%,菌悬液体积为3.5 mL(4.0×108 cfu/mL).固定化细胞重复发酵多批次效果良好.固定化细胞发酵条件优化结果表明:最适pH为7.0,最适温度为36℃,培养基中添加0....     

响应面法优化合萌总黄酮提取工艺

目的:利用响应面法优化合萌中总黄酮的提取工艺条件。方法:通过单因素试验分别考察提取时间、乙醇体积分数、液固比、提取温度及提取次数对合萌总黄酮得率的影响,并选取提取时间、乙醇体积分数、液固比、提取温度为影响因子,应用响应面法优化提取工艺。结果:合萌总黄酮的最佳提取条件为:提取时间60 min,乙醇浓度65%,液固比(g∶m L)25∶1,提取温度90℃,在此条件下,合萌总黄酮得率为4.08 mg/g,接近模型预测值4.11 mg/g。结论:响应面法在一定程度上可以提高合萌总黄酮得率,表明响应面法用于合萌总黄酮提取工艺的优化具有可行性。     

基于响应面法的白蜡属花粉离体萌发培养基优化

基于Box-Behnken设计(Box-Behnken design,BBD)的响应面法,对绒毛白蜡(Fraxinus velutina)、新疆小叶白蜡(F.sogdiana)和美国白蜡(F.americana)3个树种花粉的离体萌发培养基成分进行了研究。以花粉萌发率为响应指标,建立了3种培养基成分(蔗糖、CaCl2和H3BO3)与花粉萌发率间的响应关系模型。在此基础上,通过无约束优化设计得到了3个树种花粉的最佳萌发条件。结果表明,蔗糖是影响花粉萌发的最主要因素,当蔗糖浓度一定时,CaCl2和H3BO3之间交互作用明显。同时还对响应面建模优化后得到的最佳萌发培养基进行了验证,结果表明:上述3种花粉的实际萌发率依次为58.33%、69.71%和59.42%,均与优化得到的理论响应值相吻合,同时也验证了基于BBD响应面模型进行花粉离体萌发条件优化方法的有效性。     

不同载体固定化胰蛋白酶的条件研究

试验分别选用壳聚糖、复合硅胶、阴离子交换树脂为载体制备固定化胰蛋白酶,通过正交试验优化确定不同载体的酶固定条件。研究表明,三种载体固定胰蛋白酶时的酶活回收率依次为81.9%、80.1%、44.8%。     

应用数学统计法优化副干酪乳杆菌HD1.7固定化细胞制备和产细菌素发酵

摘要：【目的】应用数学统计法对副干酪乳杆菌HD1.7的固定细胞制备和发酵条件进行优化,以提高细菌素产量。【方法】用26?2部分因子分析法筛选对细菌素产量影响显著的因子,发现海藻酸钠浓度、接种量和发酵时间对细菌素的产生影响显著。利用最陡爬坡法逼近最大响应区域。用Box-Behnken设计确定最佳海藻酸钠浓度、接种量和发酵时间,并进行分批重复发酵。【结果】固定化生产细菌素的最佳条件是海藻酸钠浓度2.8%、CaCl2浓度5%、固定化时间4 h、菌体包埋量1/20、发酵时间63 h和固定化细胞的接种量8.2%,在此基础上用固定化细胞进行分批重复发酵,每批细菌素的发酵周期为24 h,产量为游离发酵的70%,比游离细胞发酵周期缩短1/2。【结论】通过对固定化细胞制备和发酵条件的优化,固定化细胞在327 h的分批重复发酵中细菌素的总体产量比游离细胞提高了19%,发酵液中无明显细胞渗漏现象且实现了细胞的重复利用,为细菌素的进一步研究和最终提取奠定了基础。     

具有ACE抑制活性的霞水母酶解肽制备条件优化

目的:采用胰蛋白酶制备霞水母ACE抑制肽,并以响应面法优化酶解肽制备工艺,通过超滤分离获得具有ACE抑制作用的酶解肽活性部位。方法:单因素实验以ACE抑制率为指标,考察温度、酶解时间、pH、加酶量,进一步通过响应面法优化酶解工艺,以不同截留分子量的纤维膜进行分离。结果:胰蛋白酶水解霞水母制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度:49.6℃,加酶量为0.69%,pH为7.8,酶解时间2.0h,酶解产物的平均ACE抑制率为56.79%,与预测值57.20%的相对误差为0.41%,经过超滤分离获得分子量1k Da的酶解产物,ACE抑制活性最高,其IC50为66.58μg/ml。结论:确定霞水母酶解肽的制备工艺,其中分子量1kDa的部分为主要效应物质基础。     

海藻酸钠明胶协同固定化的研究

目的:研究不同因素对固定化微胶囊的影响以及不同物质向微胶囊扩散的规律。方法:采用海藻酸钠与明胶协同固定化制备微胶囊,考察了海藻酸钠、明胶浓度等因子对微胶囊直径与机械强度的影响,以及牛血清蛋白与葡萄糖向微胶囊扩散的状况,并利用非稳态传递模型计算了这两种物质在微胶囊中的有效扩散系数。结果:随着海藻酸钠质量浓度的升高,微胶囊的直径与机械强度逐渐增大。制备的最优条件是CaCl2浓度为10%,滴定速度为180滴/min,最优浸泡时间为30min。在此条件下,葡萄糖与牛血清蛋白的有效扩散系数分别为4.63×10-5cm2/min、1.01×10-7cm2/min。结论:海藻酸钠明胶协同固定化制备的微胶囊作为一种生物载体,非常适合细胞或酶的固定化。     

不同冻存条件对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响

为了获得活力高和再生能力强的甘蔗原生质体,该文对甘蔗原生质体的冻存液浓度、冻存温度和冻存部位进行了研究。结果表明:(1)不同的冻存液、不同的冻存温度和不同的取材部位原生质体冻存后复苏对甘蔗原生质体的活力影响有显著差异性,三个冻存液组合比较,在组合2(70%培养基+20%血清+10%DMSO),冻存30 d后复苏活力最强,高达72%;冻存90 d内复苏,-196℃液氮和-80℃冰箱冻存,甘蔗原生质体的活力差异不显著,活力均在75%以上,但90 d冻存后复苏,-196℃液氮冻存后复苏比-80℃冰箱冻存冻存后复苏原生质活力强;不同取材部位比较,幼叶冻存30 d后复苏所得原生质体活力较高(达79. 2%),茎尖冻存30 d后复苏所得原生质体活力仅为42.7%。(2)不同的冻存液和不同的冻存温度,细胞第一次启动分裂和形成细胞团的时间差异不显著,一般培养5～6 d,细胞壁基本形成完整,培养6 d后,细胞启动分裂,培养15 d后形成细胞团。不同的材料部位相比较,茎尖酶解所得原生质体再生能力最强,较幼叶酶解原生质体,形成细胞壁的时间早3 d,第一次分裂时间早2 d。     

深畦栽培对干旱胁迫下葡萄叶幕微气候和光合作用的影响

试验以‘京亚’和‘红地球’葡萄品种2年生苗木为材料,在田间遮雨棚内考察了自然干旱胁迫下深畦栽植和平畦栽植葡萄根际土壤湿度、叶幕微气候因子、光合作用参数变化特征,探讨根际土壤湿度与叶幕气候互作对葡萄光合作用的影响。结果显示:(1)在干旱逆境下,葡萄根际土壤湿度和叶幕微气候因子交互作用能通过影响水分条件来影响葡萄的光合作用;土壤湿度阀值是葡萄进行光合作用时水分利用最有效的土壤湿度点值,土壤湿度阀值存在“阀值漂移”现象,与叶幕空气湿度呈明显负相关关系,维持较高的叶幕空气湿度有利于实现在较低的土壤湿度下达到更高的光合效率。(2)在干旱逆境下,与平畦栽植相比,深畦栽植在改善葡萄根际土壤水分和叶幕微气候方面具有明显的优势,在该模式下葡萄具有更强的保水能力和更高的水分利用效率,从而具有更强的光合效率。(3)采用深畦栽植模式时,根际土壤相对含水量30%~50%是显著影响葡萄光合作用的土壤湿度区间;根际土壤相对含水量分别在43.32%~50.00%和40.19%~50.00%是‘京亚’和‘红地球’光合作用适宜的土壤湿度范围,在43.32%和40.19%时分别为2种葡萄光合作用水分利用效率达到最高的最适土壤湿度。研究发现,干旱逆境条件下,葡萄根际土壤湿度和叶幕微气候因子交互作用能改善葡萄的光合作用效率;深畦栽植葡萄光合作用对土壤湿度的需求较低,在相对较低的土壤湿度即可达到相对较高的光合能力;深畦栽植模式可以协调葡萄光合作用和水分消耗之间的关系,具有较高的水分利用效率和光合能力,是干旱地区进行葡萄抗旱节水生产的理想模式。     

腔隙性脑梗死伴脑白质病变患者血清miR-146a和NSE水平与MoCA评分的关系研究

摘要 目的：研究腔隙性脑梗死（LI）伴脑白质病变（WML）患者血清miR-146a和神经元特异性烯纯化酶（NSE）水平与蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评分的关系。方法：纳入我院从2017年3月～2019年3月收治的LI伴WML患者108例进行研究,记作LI伴WML组。另取同期收治的单纯WML患者与单纯LI患者各100例,分别记作WML组与LI组,再取同期于我院进行体检的健康人员100例作为对照组。比较四组人员的血清miR-146a和NSE水平、MoCA评分,并作相关性分析。结果：LI伴WML组、WML组、LI组血清miR-146a相对表达量均低于对照组,而LI伴WML组血清miR-146a相对表达量又显著低于WML组、LI组（均P＜0.05）;LI伴WML组、WML组、LI组血清NSE水平均显著高于对照组,且LI伴WML组血清NSE水平均显著高于WML组、LI组（均P＜0.05）。LI伴WML组MoCA总分显著低于WML组与LI组,且WML组与LI组MoCA总分显著低于对照组（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析可得：LI伴WML组患者血清miR-146a相对表达量与MoCA总分呈正相关关系（P＜0.05）,而血清NSE水平与MoCA总分呈负相关关系（P＜0.05）。结论：LI伴WML患者的血清miR-146a水平存在明显低表达,而NSE水平存在明显高表达,并与MoCA评分相关,两者可能在认知功能损伤的发生、发展过程中起着至关重要的作用。     

灰树花秸秆栽培基质配方的优化

木屑一直是灰树花主要的栽培基质,但木质资源日趋匮乏。本文采用单纯格子法筛选替代木屑基质的原材料及高产配方,以玉米芯、玉米秸秆、大豆秸秆、水稻秸秆为栽培基质,以产量为考核指标,建立各组分配比与产量之间的回归模型,优化栽培配方及考察配方中各组分的互作效应。结果表明:玉米芯可以替代木屑栽培灰树花,大豆秸秆、水稻秸秆和玉米秸秆可以与玉米芯进行合适配比,也可以替代木屑基质。优化的高产配方为75%玉米芯,23%麦麸,2%轻质碳酸钙,每袋产量平均达133.3 g,比对照配方平均产量(97.25 g)高出36.05 g,提高了37.07%。     

辣椒茎、叶对酸化土壤交换性能及土壤酶活性的影响

采用辣椒秸秆废弃物与酸化土壤共培养的方法, 设计了不同添加量的辣椒茎、叶与酸化土壤充分混合、共培养, 测定了土壤交换性离子及土壤酶活性的变化, 探讨辣椒茎、叶对酸化土壤交换性能及土壤酶活性的影响。结果表明, 辣椒茎、叶可以改善酸化土壤pH, 降低酸化土壤交换性酸含量; 添加辣椒茎、叶可提高土壤NH4+-N含量, 影响土壤NO3--N转化; 添加辣椒茎、叶可提高土壤交换性盐基含量、CEC及盐基饱和度, 尤其以添加辣椒叶5%的效果最好; 辣椒茎、叶可以提高土壤脲酶活性, 但培养60 d后各处理土壤过氧化氢酶、蔗糖酶、酸性磷酸酶活性无显著性差异; 添加辣椒茎、叶能提高土壤酶的几何平均数, 改善酸化土壤质量, 其对酸化土壤质量的改变与辣椒茎、叶的添加量有关。研究结论可为开拓辣椒秸秆利用途径、改善土壤酸度, 提高土壤肥力等方面提供理论依据。     

S-亚胺还原酶和葡萄糖脱氢酶共表达系统的构建及手性胺的合成

旨在构建S-亚胺还原酶(S-IRED)和葡萄糖脱氢酶(GDH)在大肠杆菌中的一菌双酶共表达系统,实现辅酶NADPH的再生,高效合成手性仲胺。利用无缝克隆的手段设计构建一种单质粒双启动子共表达系统,以全细胞为催化剂催化手性仲胺S-2-甲基吡咯烷(S-2MP)的合成,并研究温度、pH及有机溶剂对双酶反应的影响。成功构建了S-IRED和GDH的重组共表达质粒,实现了S-IRED与GDH在大肠杆菌中的胞内共表达,以亚胺2-甲基吡咯啉(2MPN)为模式底物,以工程菌全细胞催化手性仲胺S-2MP的合成,在低辅酶添加时催化手性胺的产率和光学纯度均高于95%。该双酶共表达体系的最适温度和pH分别为37℃和pH 8,10%以下的甲醇对双酶反应有正向促进作用。大肠杆菌胞内双酶共表达系统的构建实现了辅酶NADPH的原位再生,降低了亚胺还原酶催化合成手性胺的成本,为手性胺的规模制备奠定了基础。     

Comparative analysis of different approaches to investigate cell kinetics

The potential of different methods to investigate proliferative activity of cell populations was analysed for non-Hodgkin's lymphomas. Cells in S phase and all cycling cells were determined on cell suspensions obtained from fresh lymph node material by [3H]-thymidine autoradiography [( 3H]TdR LI), a monoclonal antibody to bromodeoxyuridine (BrdU LI), and the monoclonal antibody Ki67. A good correlation was observed between the values of [3H]TdR LI and BrdU LI (rs = 0.90; P less than 0.01), [3H]TdR LI and S phase (rs = 0.62; P less than 0.01) and [3H]TdR LI and Ki67 (rs = 0.64; P less than 0.01) in individual lymphomas. Using the median values obtained from the different approaches as cut-off points to define slowly and rapidly proliferating tumours, the best agreement was observed between [3H]TdR LI and BrdU LI (91%) and poorer agreements, even though statistically significant, were observed between [3H]TdR LI and S phase (73%) or Ki67 (76%). In conclusion, the kinetic information derived from different approaches was more or less concordant and newly proposed approaches should be directly and carefully verified for their prognostic relevance before using them as alternatives to conventional methods.     

树鼩PSEN1全长编码序列的克隆及分子特征分析

目的 获取树鼩早老素蛋白-1(PSEN1)的全长编码序列并进行分子特征分析。方法 以树鼩脑组织总RNA为材料,通过RT-PCR、RACE-PCR扩增和序列拼接获得PSEN1基因全长编码序列,进而通过DNAMAN、MEGA等生物信息学软件对其序列和分子特征进行分析。qRT-PCR和Western Blot进一步分析PSEN1在树鼩各个组织的表达模式。结果 克隆鉴定了树鼩PSEN1基因,其cDNA的开放阅读框全长1128 bp,编码375个氨基酸。通过系统发育谱系树、氨基酸序列对比分析,发现树鼩PSEN1与小鼠、大鼠等相比更接近人类和非人灵长类动物。qRT-PCR和Western Blot的结果表明,树鼩PSEN1在脑组织的表达量明显高于其他脏器组织。结论 通过克隆树鼩PSEN1基因序列并进行分析,为今后进一步深入研究该基因功能和建立相关疾病动物模型提供理论基础。     

A Comparison of Visual Assessment and Automated Digital Image Analysis of Ki67 Labeling Index in Breast Cancer

Background

Ki67 labeling index (LI) is critical for treatment options and prognosis evaluation in breast cancer. Visual assessment (VA) is widely used to assess Ki67 LI, but has some limitations. In this study, we compared the consistency between VA and automated digital image analysis (DIA) of Ki67 LI in breast cancer, and to evaluate the application value of DIA in Ki67 LI assessment.

Methods

Ki67 immunostained slides of 155 cases of primary invasive breast cancer were eyeballing assessed by five breast pathologists and automated digital image analyzed by one breast pathologist respectively. Two score methods, hot-spot score and average score, were used to choose score areas. The intra-class correlation coefficient (ICC) was used to analyze the consistency between VA and DIA, and Wilcoxon signed-rank test was used to compare the median of paired-difference between VA and DIA values.

Results

(1) A perfect agreement was demonstrated between VA and DIA of Ki67 LI by ICC analysis (P<0.0001) in the whole cohort. A perfect agreement between VA and DIA of Ki67 LI was also showed in G2-G3, ER positive/HER2 negative cases. Average score and hot-spot score methods both demonstrated a perfect concordance between VA and DIA of Ki67 LI. (2) All cases were classified into three groups by VA values (≤10%, 11%-30% and >30% Ki67 LI). The concordance was relatively lower in intermediate Ki67 LI group (11%-30%) compared with high (>30%) Ki67 LI groups according to both methods. (3) All cases were classified into three groups by paired-difference (d) between VA values of hot-spot score and average score (d<5, 5≤d<10, d≥10) to evaluate the correlation between Ki67 staining distribution (heterogeneous or homogenous) and reproducibility of assessment. A perfect agreement was all demonstrated in three groups, and a slightly better Ki67 LI agreement between VA and DIA was indicated in homogenous staining slides than in heterogeneous staining ones. (4) VA values were relatively smaller than DIA values (average score: median of paired-difference -3.72; hot-spot score: median of paired-difference -9.12).

Conclusions

An excellent agreement between VA and DIA of Ki67 LI in breast cancer was demonstrated in the whole mixed cohort, suggesting that VA and DIA both could be used to assess Ki67 LI in clinical practice. Average score and hot-spot score methods both demonstrated a perfect concordance between VA and DIA of Ki67 LI. The almost perfect agreement between VA and DIA was observed in high Ki67 LI cases, displaying a homogenous staining pattern. The consistency between VA and DIA was relatively low in intermediate Ki67 LI group. The heterogeneity of tumors may slightly affect the concordance between VA and DIA of Ki67 LI. Assessment of VA provides lower Ki67 values than DIA, the biological importance of these values are not known at the moment.     

Comparative Analysis of Different Approaches to Investigate Cell Kinetics

Abstract. The potential of different methods to investigate proliferative activity of cell populations was analysed for non-Hodgkin's lymphomas. Cells in S phase and all cycling cells were determined on cell suspensions obtained from fresh lymph node material by [³H]-thymidine autoradiography ([³H]TdR LI), a monoclonal antibody to bromodeoxyuridine (BrdU LI), and the monoclonal antibody Ki67. A good correlation was observed between the values of [³H]TdR LI and BrdU LI ( r _s= 0.90; P < 0.01), [³H]TdR LI and S phase ( r _s= 0.62; P < 0.01) and [³H]TdR LI and Ki67 ( r _s= 0.64; P < 0.01) in individual lymphomas. Using the median values obtained from the different approaches as cut-off points to define slowly and rapidly proliferating tumours, the best agreement was observed between [³H]TdR LI and BrdU LI (91%) and poorer agreements, even though statistically significant, were observed between [³H]TdR LI and S phase (73%) or Ki67 (76%). In conclusion, the kinetic information derived from different approaches was more or less concordant and newly proposed approaches should be directly and carefully verified for their prognostic relevance before using them as alternatives to conventional methods.