布鲁菌致病特点和疫苗的研究新进展

布鲁菌能够干扰宿主细胞发挥固有和适应性免疫应答,这是布鲁菌突出的致病特点。布鲁菌通过减少、修饰或隐藏病原相关分子模式,经由脂筏进入巨噬细胞后形成布氏小体,实现胞内生存复制,从而导致机体的持续性感染。深入了解布鲁菌逃避机体免疫应答的机制有助于研制新型有效的疫苗,如DNA疫苗、重组蛋白疫苗等。     

per基因突变对布鲁菌稳定性的影响

目的:构建过骨胺酸合成酶基因(per)敲除的布鲁菌,研究per基因对布鲁菌株稳定性的影响。方法:构建p MD19-T:kan敲除载体,电击转化至流产布鲁菌,体内同源重组敲除per基因,分析per基因敲除对布鲁菌遗传特征和稳定性的影响。结果:构建了per基因敲除的流产布鲁菌株,per缺失突变布鲁菌连续传代培养后,测序分析未发现回复突变,品红及硫堇培养鉴定符合布鲁菌特征。结论:布鲁菌基因组per基因的缺失突变不影响布鲁菌的遗传稳定性,为研制布鲁菌per基因减毒突变疫苗提供了依据。     

布鲁菌104M∶Omp19过表达株的构建与免疫保护性评价

目的:利用表达载体p NSGro E2His构建104M∶Omp19过表达株,以增强现有布鲁菌疫苗104M株免疫保护效果。方法:以布鲁菌疫苗104M株基因组为模板,通过PCR扩增得到Omp19基因;将经过Bam HⅠ和XbaⅠ双酶切的Omp19基因连接到经同样双酶切处理的p NSGro E2His载体上,构建Omp19-p NSGro E2His过表达质粒;将构建的过表达质粒转化布鲁菌104M株感受态细胞,利用氯霉素抗性筛选构建成功的104M∶Omp19过表达株;通过皮下免疫BALB/c小鼠,从激发的抗体水平、细胞因子水平以及对抗布鲁菌A19株攻毒后的保护作用等方面评价104M∶Omp19过表达株的免疫保护效力。结果:PCR及Western印迹验证表明获得了104M∶Omp19过表达突变株;免疫评价实验显示104M∶Omp19在抗体水平、细胞因子水平与攻毒保护性方面均优于104M,低剂量免疫即可达到较好的保护效果。结论:布鲁菌疫苗104M株过表达Omp19抗原后,免疫保护效果显著增强,可作为一种新的布鲁菌疫苗候选菌株进行后续研究。     

重组伪狂犬病毒疫苗研制现状

伪狂犬病毒引起的伪狂犬病是一种常见的动物传染病。伪狂犬病毒可诱导感染的宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,可通过分子生物学技术改造为理想的疫苗载体,从而表达寄生虫、细菌和病毒的多种蛋白。这些病原体包括刚地弓形虫、日本血吸虫、马尔他布鲁菌、猪园环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、日本脑炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪流感病毒、狂犬病毒和犬瘟热病毒等,本文拟就这方面的研制现状进行综述。     

牛布鲁菌S19噬菌体裂解物主动免疫诱导的血清IgG保护豚鼠并可被动免疫保护小鼠

正布鲁菌病是全球范围内一种对经济有重大影响的人畜共患病。作者2015年曾报道过使用布鲁菌噬菌体"ΦLd"制备抗牛布鲁菌S19的噬菌体裂解物的方法。此项研究中,在使用裂解物固定剂量(两倍小鼠100%的保护剂量)的情况下,用豚鼠直接攻毒和小鼠被动保护试验(PMPT)评估了不含佐剂和以铝凝胶为佐剂的两种裂解物的预防功效。与S19疫苗相比,低剂量(1.0μg蛋白质和120μg碳水化     

布鲁菌毒力因子研究进展

布鲁菌是一种兼性细胞内寄生菌,能够严重地导致人畜共患布鲁菌病。本文就影响布鲁菌致病能力的毒力因子进行综述。     

微生物介导的新城疫病毒疫苗的研制现状

新城疫病毒引起的新城疫是一种禽类急性接触性传染病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一。HN/F蛋白是2种有效的疫苗候选分子,乳酸乳球菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、根癌农杆菌、鸡痘病毒、牛痘病毒、鸽痘病毒、禽红白血病病毒、禽副粘病毒3型、传染性法氏囊病病毒和传染性气管炎病毒等微生物经过改造后可成为理想的疫苗载体。本文综述了重组乳酸乳球菌(rLL-HN)、重组鼠伤寒沙门菌(rSt-F和rSt-HN)、重组单增李斯特菌(rLm-F)、重组根癌农杆菌(rAt-F)、重组鸡痘病毒(rFPV-HN、rFPV-F-gB和rFPV-F-HN-gB)、重组牛痘病毒(rVV-F)、重组鸽痘病毒(rPPV-F)、重组禽红白血病病毒(rAEV-HN)、重组禽副粘病毒3型(rAPMV-F)、重组传染性法氏囊病病毒(rIBDV-HN)和重组传染性气管炎病毒(rIBV-HN)等疫苗的构建及其免疫机制的研制现状。     

布鲁菌病的生物安全及防控

布鲁菌病(brucellosis)是布鲁菌入侵机体引起的传染-变态反应性人兽共患传染病,易被忽视。该病严重威胁人类健康,影响畜牧业、旅游业的发展,阻碍正常国际贸易,还会造成食品安全隐患。布鲁菌可通过消化道、呼吸道及皮肤黏膜破损处等途径传播至人。人群对布鲁菌的易感性无年龄和性别差异,可通过直接或间接接触感染。从事布鲁氏菌研究的实验室操作人员有发生实验室获得性感染的风险,但可通过有效的生物安全防护措施避免感染的发生。布鲁菌病是一种可防可控的疾病,必须早期诊断和正确治疗,防止疾病慢性化。本文对布鲁菌病的生物安全及其防控原则进行介绍。     

毕赤酵母糖基化对布鲁菌P39抗原诱导巨噬细胞吞噬的影响

P39蛋白是通过蛋白组学从布鲁菌中鉴定出的具有较高免疫原性的优势抗原蛋白之一。本研究对布鲁菌的优势抗原蛋白P39基因在毕赤酵母中进行表达,并对其进行纯化及Western blot鉴定,利用核磁共振接合PNGaseF糖苷酶进行蛋白糖基化鉴定,并研究其与巨噬细胞相互作用的速度。结果表明,P39蛋白在毕赤酵母GS115中呈分泌表达,表达量可达5.05 g/L。核磁共振结果表明,重组P39蛋白被糖基化修饰。修饰后的蛋白被巨噬细胞捕获效应明显强于原核蛋白,说明糖基化修饰可能影响目标蛋白与细胞相互作用的效率,为进一步研究糖基化对P39蛋白的影响及布鲁菌糖基化疫苗候选抗原的研究提供参考。     

布鲁菌噬菌体的生物学特性研究进展

布鲁菌属(Brucellae)细菌在核酸水平上非常相似,随着不同环境中布鲁菌新种及变异菌的出现,噬菌体分型实验在布鲁菌种的分型鉴定中依然发挥着不可替代的作用,本文从布鲁菌噬菌体的生长特征和宿主范围方面进行综述。     

非编码小RNA BSR0602在布鲁菌环境适应能力中的调控作用

BSR0602是位于布鲁菌染色体上的非编码小RNA,在前期研究中我们发现,BSR0602与布鲁菌的胞内生存能力相关.为了进一步研究BSR0602对布鲁菌胞内环境适应能力的调控作用,采用双向电泳技术对布鲁菌野生株16M和BSR0602过表达株的全菌蛋白质谱进行比较分析.结果显示,BSR0602过表达后,布鲁菌转运代谢蛋白和压力适应蛋白的表达发生变化. qRT-PCR和HIS表位标记实验结果进一步证实,BSR0602在转录和翻译水平均影响氧压力适应蛋白SodA的表达.相关表型实验结果显示,BSR0602过表达株对氧压力更为敏感,证实了BSR0602在布鲁菌适应氧压力中的作用.结果表明,非编码小RNA BSR0602作为布鲁菌的转录后调控因子,可通过调控压力适应蛋白的表达来影响布鲁菌的压力适应能力和胞内生存.     

61例布鲁杆菌病患者流行病学特征、临床表现及疗效分析

<正>布鲁杆菌病(又称布鲁菌病,简称布病)是由布鲁菌感染引起的一种人畜共患疾病,是我国《传染病防治法》规定的乙类传染病。患病的羊、牛等疫畜是布病的主要传染源,布鲁菌可以通过破损的皮肤黏膜、消化道和呼吸道等途径传播。急性期病例以发热、乏力、多汗、肌肉、关节疼痛和肝、脾、淋巴结肿大为主要表现,慢性期病例多表现为关节损害等[1-2],由于该病病情复杂,临床表现多样化,症状不典型[3],因此很难诊断,容易被临床医生忽视     

禽波氏杆菌外膜蛋白的提取及其免疫原性的检测

为研究禽波氏杆菌OMP的免疫原性,试验采用超声波破碎、TritonX-100处理技术提取了禽波氏杆菌OMP,采用Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量,进行了SDS-PAGE检测,然后制备油乳剂OMP免疫抗原,对1日龄雏鸡分别以0.3mL(OMP90μg)、0.5mL(OMP150μg)、0.8mL(OMP240μg)的剂量颈部皮下接种。结果:禽波氏杆菌OMP含量为300μg/mL;禽波氏杆菌OMP最佳免疫剂量为0.5mL/只;通过免疫抗体与攻毒保护相关性测试,抗体效价在1:28以上能抵抗致死量禽波氏杆菌的攻击。据间接ELISA法检测的抗体水平可知,抗体的持续时间足以保护雏鸡避过易感日龄,试验发现OMP具有良好的免疫原性。本试验结果将为禽波氏杆菌OMP单克隆抗体的制备、快速诊断试剂盒的研制、亚单位疫苗的开发奠定良好的基础。     

替加环素与米诺环素治疗布鲁菌病的进展

布鲁菌病是由布鲁菌引起的人畜共患传染性疾病，由带菌动物通过多种途径传染给易感人群，可侵犯人体各器官系统。目前推荐的抗布鲁菌治疗方案为多西环素、利福平、喹诺酮类、氨基糖类等抗菌药物组合的二联或者三联抗菌方案，但治疗无效率和疾病复发率仍较高。替加环素和米诺环素作为四环素类药物，经体外实验证明均可有效抑制布鲁菌，且50%最小抑菌浓度（50% minimal inhibitory concentration，MIC50） 和 90%最小抑菌浓度（90% minimal inhibitory concentration，MIC90）均较低。临床研究亦证实，包含替加环素和米诺环素的联合抗菌方案具有较低的治疗无效率和疾病复发率。因此，替加环素和米诺环素可作为治疗布鲁菌病的候选用药。本文就布鲁菌病传统治疗方案以及替加环素和米诺环素的抗菌效果进行综述。     

微生物介导的恶性疟原虫PfMSP-1疫苗的研制现状

恶性疟原虫引起的恶性疟是一种严重危害人类健康的寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一。PfMSP-1抗原是一种有效的疫苗候选分子,鼠伤寒沙门菌、卡介苗、酵母菌、根癌农杆菌、嗜热四膜菌、腺病毒、牛痘病毒和杆状病毒等微生物经过改造后均可成为有希望的疫苗载体。本文综述了重组鼠伤寒沙门菌（rSt-PfMSP-1和rSt-PfMSP-119）、重组BCG疫苗（rBCG-PfMSP-1c和rBCG-PfMSP-119）、重组酵母菌（rPp-PfMSP-1）、重组根癌农杆菌（rAt-PfMSP-142、rAt-PfMSP4/5和rAt-Pf38）、重组嗜热四膜菌（rTt-PfMSP-119）、重组腺病毒（rAd5-PfMSP-142和rChAd63-PfMSP-1）、重组牛痘病毒（rVV-PfMSP-1和rVV-PfHGFSP）以及重组杆状病毒（rBDES-PfMSP-119）的构建及其免疫机制的研制现状。     

疫苗

920931生物技术在研制动物皮苗中的应用〔英〕/Redm。-nd,M J.…了Genet。Eng.Bioteehnol。-1991,11(1)一14一21〔译自DBA,1991,10 (15),91一08572〕 本文综述了应用生物技术生产动物疫苗。讨论的题目有:工程疫苗(即经修饰的减毒重组活疫苗或重组的载体活疫苗如痘苗病毒载体或鼠伤寒沙门菌载体),亚单位重组疫苗(原核系统如大肠杆菌表达的蛋白)、和真核系统(如酿酒酵母菌表达的乙型肝炎病毒、CHO细胞表达的单纯疙疹病毒、携带首落银纹夜蛾核型多角体病毒载体的草地夜蛾昆虫细胞表达的流感病毒或人轮状病毒)表达的蛋白;合成肤疫苗;疫苗配…     

057实验室获得性布鲁菌病:西班牙全国性调查

布鲁菌病是一种地区性人畜共患病,也是兽医及肉类加工厂工人中最常见的职业性疾病。在一些发达国家,也是微生物实验室最重要的职业获得性感染,因此又称为实验室获得性布鲁菌病（labmatoryacquired Brucellosis,LAB）。     

布鲁菌与巨噬细胞相互作用的研究进展

布鲁菌是兼性胞内寄生菌,其最主要的致病机制是长期在宿主单核巨噬细胞内存活和繁殖。它可以调控其自身的运输来避免溶酶体的降解,并在宿主细胞内广泛的复制但又不限制细胞基础功能或诱导程序性死亡,这是造成布鲁菌与宿主交互作用发生、发展的重要原因。     

迟缓爱德华菌抗独特型单克隆抗体的制备及鉴定

迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)是肠杆菌科爱德华菌属的一种条件致病菌,可引起败血病,危害鲆、鲤等经济养殖鱼类。但是,经过20余年的研究,虽有各种灭活疫苗和组分疫苗的试验,却无针对该菌病的商品化疫苗的使用报道。抗独特型抗体疫苗技术已成功用于肿瘤、细菌、病毒、寄生虫的防治,具有安全、易大规模生产等优点。鉴于药物防治鱼菌病的局限性,作者在制备了抗迟缓爱德华菌单克隆抗体的基础上,制备抗该菌的抗独特型单克隆抗体,用该菌抗独特型抗体免疫牙鲆, 为预防该菌病提供一种安全有效的新方法。       

支气管败血波氏杆菌外膜蛋白的提取及其免疫效果的检测

本研究以小鼠为实验动物模型,研究支气管败血波氏杆菌的外膜蛋白(OMP)和其中的有效保护抗原成分(OMP68)的免疫原性及免疫保护作用.本研究利用改进的Wooldridge的方法提取了支气管败血波氏杆菌P11和P13的OMP,利用SDS-PAGE比较了2株之间差异,采用Western-blotting进行了分析并确定了P13菌株OMP(P13-OMP)中的有效保护性抗原成分,采用电洗脱方法获的分子量为68 kD的P13-OMP有效保护抗原成分(OMP68),然后制备了油乳剂P13的全菌、P13-OMP和OMP68免疫抗原.抗体动态变化:将清洁级小鼠70只随机分成7组,10只/组,用油乳剂P13的全茵和不同剂量的P13-OMP和OMP68免疫抗原分别免疫,采用间接ELISA检测免疫小鼠的相应抗体水平并分析抗体动态变化;主动免疫保护试验:将清洁级小鼠80只随机分成8组,10只/组,分别采用制备的油乳剂P13-OMP(OMP25 μg/只)、OMP68(25 μg/只)和P13菌体免疫抗原在免疫10 d后,分别用100 LD50的P11和P13腹腔攻毒,然后统计保护率并分析免疫原所提供的免疫保护力.免疫P13-OMP和OMP68油乳剂抗原后,7 d时,抗体水平开始逐渐上升,42 d时,抗体水平分别达到215.3和214.8,然后逐渐下降,70 d时,抗体水平分别达到29.1和210.2.主动免疫时,P11和P13攻毒的P13-OMP免疫组分别均得到9/10和9/10的保护,OMP68免疫组分别均得到9/10和10/10的保护,而P13全菌免疫组分别得到4/10和6/10保护,对照组全部死亡.P13-OMP和OMP68抗原均具有良好的免疫原性和免疫保护作用,为支气管败血波氏杆菌OMP亚单位疫苗的研制奠定了良好的理论基础.