基于高遗传转化率及低幼苗玻璃化率的黑果枸杞叶片组合培养体系

【目的】建立高效稳定的黑果枸杞遗传转化体系,有效降低其再生幼苗玻璃化率,促进其基因功能研究和提高遗传改良效率。【方法】以黑果枸杞叶片作为外植体,利用农杆菌(LBA4404、EHA105)介导的遗传转化法,通过调整基础培养基类型并添加相应浓度的植物激素,筛选出最适愈伤组织诱导培养基、分化和选择培养基、生根诱导培养基,将黑果枸杞遗传转化率提高到65%以上,同时降低幼苗玻璃化率至10%以下。【结果】(1)黑果枸杞叶片高效组合培养体系中最佳农杆菌侵染浓度(OD₆₀₀)为0.6,侵染时间为25 min,在此条件下侵染叶片抗性愈伤诱导率达78.2%～96%;(2)黑果枸杞遗传转化中最适分化和选择培养基为：MS+肌醇50 mg/L+烟酸0.25 mg/L+维生素B₆ 0.25 mg/L+铁盐母液1 mL/L+甘氨酸1.0 mg/L+维生素B₁ 0.05 mg/L+6-BA 0.25 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+卡那霉素30 mg/L+特美汀300 mg/L (pH=6.0);最适生根诱导培养基为：WPM+IBA 0.2...     

抗茎枯病芦笋品种离体培养的研究北大核心CSCD

选用芦笋(Asparagus officinalis)茎枯病高抗品种格兰蒂为材料,研究各种生长素及细胞分裂素对其茎尖诱导的愈伤组织、不定芽增殖和生根的效果。实验结果表明,最适芦笋茎尖诱导愈伤组织的培养基为:MS+6-BA0.3 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L+蔗糖25 g/L+琼脂7 g/L,pH 5.8;最适愈伤组织增殖诱导、分化不定芽的培养基为:MS+NAA 0.3 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,pH 5.8;最适生根培养基为:1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1 mg/L PP333+0.3 mg/L 6-BA+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,pH 5.8。     

剑叶龙血树组织培养与快速繁殖的研究

用剑叶龙血树的腋芽、顶芽或茎段作外植体,构建了剑叶龙血树组织培养再生体系。试验结果如下:剑叶龙血树腋芽、顶芽或茎段诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率达95%;选择MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L琼脂培养基有利于芽的分化和增殖,在1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA0.4mg/L+活性炭的培养基中诱导生根效果最好。     

NAA与6-BA对黑金丝柚木组织培养的影响

通过对黑金丝柚木Tecton grandis带潜伏芽茎段的组织培养,研究不同浓度配比6-BA和NAA对组培苗生长的影响。结果表明,黑金丝柚木不定芽分化最佳培养基为MS+0.3 mg·L~(-1) 6-BA+0.6 mg·L~(-1) NAA+30g·L~(-1)蔗糖+12 g·L~(-1)琼脂;生根适宜培养基为MS+0.8 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+12 g·L~(-1)琼脂;继代培养的最佳培养基为MS+0.5 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+12 g·L~(-1)琼脂。     

西伯利亚百合鳞片组织培养与快速繁殖

以西伯利亚百合鳞茎作为外植体试材,进行组织培养.结果表明,在改良MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖80 g/L的培养基上,分化率可达90.0％;在改良MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖60 g/L的培养基上增殖生长最好,增殖倍数为9.32;最佳生根培养基为改良MS+NAA 0.2 mg/L,生根率可达97.78％;最佳移栽基质为水苔,成活率达100％.     

美洲黑杨(中嘉8号)离体叶片再生研究

用中嘉8号杨[Populus deltoids(I-63×I-69)]试管苗叶片作外植体,在添加不同生长素和细胞分裂素浓度配比的1/2(N)MS培养基上,筛选出叶片直接分化不定芽的最适培养基1/2(N)MS 0.2 mg/L BA 0.02 mg/LNAA 25 g/L蔗糖 7 g/L琼脂,不定芽分化率为85%。同时发现,一定浓度的KT对生根具有促进作用,最适生根培养基为MS 0.08 mg/L KT 0.02 mg/L NAA 25 g/L蔗糖 8 g/L琼脂,生根率为82.2%。     

抗茎枯病芦笋品种离体培养的研究

选用芦笋（Asparagus officinalis）茎枯病高抗品种格兰蒂为材料,研究各种生长素及细胞分裂素对其茎尖诱导的愈伤组织、不定芽增殖和生根的效果。实验结果表明,最适芦笋茎尖诱导愈伤组织的培养基为：MS＋6-BA0.3 mg/L＋2,4-D 1.5 mg/L＋蔗糖25 g/L＋琼脂7 g/L,pH 5.8;最适愈伤组织增殖诱导、分化不定芽的培养基为：MS＋NAA 0.3 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂7 g/L,pH 5.8;最适生根培养基为：1/2 MS＋0.5 mg/L IBA＋1 mg/L PP333＋0.3 mg/L 6-BA＋蔗糖30 g/L＋琼脂7 g/L,pH 5.8。     

三倍体毛白杨组织脱分化培养与植株体再生

采用毛白杨三倍体幼叶作为外植体进行组织培养,以MS为基本培养基获得了再生植株。从NAA和IAA与6-BA间进行的18个正交试验中,选择出适宜脱分化培养基MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L,对三倍体毛白杨愈伤组织诱导率为87.6%。5种生长素与6-BA配比的再分化培养基中,12MS+IAA 0.1mg/L+6-BA 0.1mg/L对不定芽的分化诱导率可达到68.5%;MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.01mg/L的培养基可使单芽直接增殖出7.4个芽。在MS+IBA 1.0mg/L的生根培养基上,试管苗的生根率可达85.7%。     

不同植物生长调节剂对铁皮石斛(Dendrobium candidum)再生的影响

本实验以铁皮石斛无菌苗茎段为外植体,通过添加不同浓度的植物生长调节剂,诱导铁皮石斛愈伤组织形成与分化,建立铁皮石斛组织培养再生体系。结果表明,外植体接种5 d后,在改良MS培养基上添加2 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA,可达到100%的愈伤诱导率。将愈伤组织接种在MS培养基上,添加0.1 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,不定芽诱导率为90.8%。适合铁皮石斛芽增殖培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。PBU浓度为0.5 mg/L,NAA浓度为0.05 mg/L时,芽苗生长情况良好,最适合用于不定芽伸长。铁皮石斛最适生根的培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L IBA,生根率可高达94.1%。本研究成功建立了铁皮石斛高效再生体系。     

文心兰花梗茎段植株再生培养的影响因子研究

应用正交试验设计法研究基本培养基、植物生长调节剂种类及浓度对文心兰花梗茎段芽再生丛生芽诱导、增殖和生根培养的影响。筛选出最佳基本培养基为1/2 MS;最佳诱导培养基为1/2 MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L;最佳增殖培养基为1/2 MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.05 mg/L+NAA 0.3 mg/L+香蕉泥100 g/L+蔗糖20 g/L。     

转抗虫基因欧美黑杨离体快繁技术研究

以抗虫欧美黑杨的叶,带腋芽茎段为外植体进行离体快繁技术研究。最佳接种时间为8月份,新芽生长迅速。基本培养基为MS,较适初培养基为MS＋6－BA0.5mg/L（以下单位同）＋NAA0.01mg/,附加30g/L,蔗糖,7g/L琼脂。愈伤组织诱导并同时分化出新芽培养基为MS＋6－BA1.5 NAA0.3,附加40g/L蔗糖,6g/L琼脂。继代增殖培养基为MS 6-BA1.0 NAA0.1 GA2.0,附加30g/L蔗糖,5g/L琼脂。生根培养基为MS＋IBA2．0。     

黑果枸杞的组织培养

1植物名称黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.). 2材料类别带腋芽的嫩茎段. 3培养条件诱导分化培养基:(1)MS 6-BA 1.0mg·L-1(单位下同) NAA 0.2,(2)MS 6-BA 0.5 NAA0.2;芽增殖培养基:(3)MS 6-BA 0.5 NAA 0.1(4)MS 6-BA 0.5 NA 0.2;生根培养基为:(5)1/2MS NAA 0.1.以上诱导分化及增殖培养基均加2.5%蔗糖和0.8%琼脂,生根培养基的蔗糖和琼脂量减半,pH 5.8～6.0.培养温度为23～25℃,光照时间10～12 h·d-1,光照度为2000 1x.     

牛角瓜离体快繁技术

该文选用牛角瓜茎段为外植体,通过组织培养方法探索牛角瓜组织培养和种苗快繁技术。结果表明:最佳外植体表面消毒方法是以0.1%HgCl_2处理7 min,外植体存活率为32.3%;初代培养基为MS+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂3.5 g·L~(-1),培养20 d后形成3～4 cm高的再生芽。增殖培养前期筛选的较为适宜的增殖培养基为MS+6-BA 1.5 mg·L~(-1)+NAA 0.05 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂3.5 g·L~(-1),增殖系数4.6。但在后续的培养过程中发现,牛角瓜组培苗易玻璃化,且随着世代更迭,玻璃化程度加重,到了第四代几乎全部玻璃化。因此在上述增殖培养的基础上,以AgNO_3作为玻璃化抑制剂,筛选出最终的增殖培养基为MS+6-BA1.5 mg·L~(-1)+NAA 0.05 mg·L~(-1)+AgNO_31.0 g·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂3.5 g·L~(-1)。用此增殖培养基,培养25 d,苗高5～8 cm,增殖系数5.8,玻璃化率低于10%,且连续培养多代,玻璃化率维持在10%以下。生根壮苗培养基为1/2MS+NAA 1.0 mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂3.6 g·L~(-1),培养14 d,生根率98%;将生根苗移栽于70%遮阴度的大棚中,30 d后,苗高20 cm左右,成活率85%。利用该方法可对牛角瓜优良种苗进行规模化生产。     

百里香组织培养过程中玻璃化问题的研究

以百里香茎切段为外植体进行组织培养和快速繁殖试验研究,分化率很高,可达100%;但培养过程中玻璃化现象较为严重,解决这一问题的途径,主要是在增殖倍数较高的培养基MS+KT 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L的基础上,加入0.3 mg/L的GA3,增加蔗糖浓度为50 g/L,琼脂8 g/L,可有效控制玻璃化苗的比例和玻璃苗的逆转。     

六角果鸢尾离体快繁技术体系的构建

为构建六角果鸢尾(Iris hexagona)的离体快繁体系,以其幼嫩根状茎为外植体,研究了培养基和植物生长调节剂对不定芽诱导、增殖和植株生根的影响。结果表明,根状茎用0.1%Hg Cl2消毒13 min的效果较佳;不定芽诱导最适培养基为MS+6-BA 1.5 mg L–1+NAA 0.5 mg L–1+蔗糖30 g L–1+琼脂7.5 g L–1,不定芽增殖的适宜培养基为MS+6-BA 0.5 mg L–1+NAA0.2 mg L–1+KT 0.3 mg L–1+蔗糖30 g L–1+琼脂7.5 g L–1;在MS+IBA 1.5 mg L–1+蔗糖30 g L–1+琼脂7.5 g L–1培养基上不定芽生根率可达100%;腐殖土和珍珠岩+泥炭土+蛭石(1∶2∶1)均可作为组培苗移栽的适宜基质,移栽成活率可达100%。     

向日葵离体再生体系的建立

为了建立高效的向日葵离体再生体系,从基因差异、外植体取材、生长素和细胞分裂素浓度、附加物的添加等方面出发,对向日葵愈伤诱导、分化、生根等过程进行了系统优化。结果表明：杂交材料相对于自交材料更容易实现再生;最佳外植体是生长4 d的子叶;最佳愈伤诱导培养基是MS培养基 (MS) +2.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤 (6-BA)+0.5 mg/L奈乙酸 (NAA)+1.0 mg/L激动素 (KT),诱导率最高可达100％;最佳分化培养基是MS+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+0.3 mg/L硝酸银 (AgNO3)+0.2 g/L活性炭 (AC),芽分化率可达71％;最佳生根培养基是1/2 MS+0.6 mg/L吲哆丁酸 (IBA),生根率最高为77％。方差分析表明,材料基因型、外植体生长时间、激素、AgNO3、AC对向日葵再生呈现显著性影响。     

田菁的组织培养（简报）

田菁种子在1/2MS NAA0.5mg/L琼脂的半固体培养基上诱导发芽;以种子苗的茎尖、叶、茎、子叶和下胚轴各切段为外植体,在1/2MS 6-BA 2.0mg/L NAA 0.25mg/L上可分化出丛生芽;在1/2MS NAA0.2mg/L生根培养基上,生根率达90%以上.上述培养基均添加25g/L蔗糖和7g/L琼脂,pH 5.8.     

中国石竹离体快繁与试管苗玻璃化研究

研究了培养基组成成分对中国石竹品种Diana F1 White组培程序中种子萌发、诱芽增殖、试管苗玻璃化及生根等重要环节的影响。结果表明:(1)种子适宜的萌发培养基为1/2MS,在此培养基中种子萌发率为83.33%,播种后30d时无菌苗高度达6.99cm,叶片数达26.7。(2)在芽诱导阶段玻璃化苗发生率最高可达53.85%。将光照强度提高至2000lx后,采用培养基MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+琼脂8.0g/L+蔗糖8.0g/L进行诱芽培养,玻璃化苗发生率降至3.33%,外植体出芽率达到90%,单个外植体出芽数达到7.2个。(3)适宜的生根培养基为1/2MS+1.0mg/LIBA+琼脂8g/L+蔗糖40g/L,培养30d时生根率为100%,平均根条数达到24.7条,平均根长度达到4.7cm。试管苗在消毒后的腐殖土中移栽,成活率达95%。该研究结果为DianaF1试管苗的快速繁殖提供科学依据。     

水杉组织培养研究

以水杉的带腋芽茎段和茎尖为外植体进行植物组织培养,探究外植体形成无菌苗体系的过程最佳激素配比及影响因素。在MS基本培养基中添加不同激素,制备不同培养配方,筛选水杉愈伤组织诱导与分化的最适培养基配方。诱导愈伤组织形成的最佳培养基配方为MS+2,4-D (2.0 mg/L)+NAA (3.0 mg/L)+6-BA (1.5 mg/L);适宜再分化的最佳培养基为MS+NAA (0.2 mg/L)+6-BA (1.5 mg/L);最佳生根培养基组合为1/2MS+NAA (3.0 mg/L)+IBA(0.1 mg/L),生根率为18.8%以上,培养15 d后平均根数可达到45条,平均根长达2.56 cm。     

铁线莲‘Gipsy Queen’组织培养与快速繁殖(简报)

以铁线莲‘Gipsy Queen’当年生嫩茎为外植体进行组织培养与快速繁殖。在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L+5.5 g/L卡拉胶的培养基中适合愈伤组织诱导,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+6.0 g/L卡拉胶适宜不定芽分化,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+KT 1.0 mg/L+6.5 g/L卡拉胶为最佳继代增殖培养基,1/2MS+NAA 0.2 mg/L适合生根,红土和腐殖土1∶1的基质适宜移栽,成活率达70%。