骨髓间充质干细胞在脱细胞真皮基质再生过程中的初步研究

较大的腹壁缺损需要应用补片修复来缓解腹横筋膜的张力,人工合成补片的应用一定程度上实现了无张力修补的目的,但它在腹壁外科应用中有诸多的并发症,诸如复发率高,腹腔黏连,肠穿孔导致腹膜炎,侵袭性肠瘘等影响患者术后的正常生活,而脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)作为一种新型的生物材料应用在腹壁外科中能解决上述人工合成补片所带来的并发症发挥强大作用且能与周围组织较好的融合,最后改建成宿主自身组织已并在多学科领域中广泛应用;骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)能参与组织自我修复,并能分化成为多种功能细胞,分泌各种生长因子,在ADM内源性转归过程中可发挥作用。本文就对骨髓间充质干细胞在ADM生物补片应用于临床疝修补术中转归机制的研究做一综述。     

应用脱细胞真皮基质联合肌瓣修复咽喉缺损的护理

喉癌是耳鼻喉科常见的恶性肿瘤之一,目前仍以手术治疗为主。喉部恶性肿瘤切除后导致的各种缺损,常用的修复材料有颈部肌皮瓣、胸骨舌骨肌筋膜、颈阔肌筋膜、甲状软骨外膜等,不同的材质各有优缺点。近年来,随着细胞生物学和组织工程技术的发展,一种新兴的创伤修复材料——异体脱细胞真皮基质（ADM）逐渐兴起,     

深度烧伤创面异体脱细胞真皮基质与自体刃厚皮复合移植的临床观察

目的：探讨深度创面修复的有效方法。方法：30例患者随机分为两组,治疗组采用异体脱细胞真皮基质和自体刃厚皮片移植,对照组单纯采用自体刃厚皮片移植。最后采用温哥华瘢痕量表对患者术后1个月、6个月、12个月进行评分。结果：术后1个月,两组间温哥华评分无统计学差异。术后6个月、12个月,治疗组的温哥华评分低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：异体脱细胞真皮基质和自体刃厚皮移植是深度烧伤创面修复的一种有效方法。     

深度烧伤创面异体脱细胞真皮基质与自体刃厚皮复合移植 的临床观察

目的:探讨深度创面修复的有效方法。方法:30例患者随机分为两组,治疗组采用异体脱细胞真皮基质和自体刃厚皮片移植,对照组单纯采用自体刃厚皮片移植。最后采用温哥华瘢痕量表对患者术后1个月、6个月、12个月进行评分。结果:术后1个月,两组间温哥华评分无统计学差异。术后6个月、12个月,治疗组的温哥华评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:异体脱细胞真皮基质和自体刃厚皮移植是深度烧伤创面修复的一种有效方法。     

钛镍记忆合金牵张器复合脱细胞真皮基质增高犬牙槽嵴的初步研究

目的用成年杂种犬建立钛镍记忆合金牵张器复合脱细胞真皮基质增高犬牙槽嵴动物模型,为下一步利用钛镍记忆合金牵张器行下颌后牙牙槽嵴增高术奠定基础。方法健康成年雄性杂种犬4只。全麻下拔除双侧下颌4个前磨牙和第一磨牙,1个月后拍摄双侧后牙区X线光片,观察拔牙窝愈合情况。采用4种类型的牵张器随机在4只犬的下颌两侧行牵张手术并观察牵张后1周和1月牙槽嵴增高的情况。结果拔牙后1个月,牙槽嵴黏膜愈合良好。X线片示下颌神经管清晰可见,其上方牙槽窝内有较低密度骨质存在。放置4种牵张器牵张术后1周、1月后牙槽嵴增高的高度分别为3.24 mm、3.76 mm、4.58 mm、5.09 mm;3.15 mm、3.67 mm、4.64 mm、5.01mm,术后一周X线可见后有明显的牵张间隙,1月时牵张区有新骨形成,骨密度增高。结论犬耐受力强,后牙区下颌骨体积大,手术易操作,是理想的牙槽嵴萎缩动物模型。拔牙后1个月,拔牙创愈合良好,可以进行牵张手术。D组＂S＂形牵张器牵张后的高度比较理想,能满足后期种植体的植入。     

异种脱细胞真皮基质联合丝素蛋白辅料对幼儿Ⅱ度烫伤的临床疗效研究

目的分析异种脱细胞真皮基质联合丝素蛋白辅料对幼儿Ⅱ度烫伤的治疗效果。 方法随机选择湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院104例Ⅱ度烫伤患儿,采用随机数字表法分为对照组（丝蛋白敷料覆盖）和试验组（异种脱细胞真皮基质联合丝蛋白敷料覆盖）,每组52例。实验结果中计量资料用 ±s表示,组间比较采用两样本t检验,治疗前后比较采用配对t检验;计量资料采用百分比表示,比较采用χ²检验,疼痛程度采用Z检验。 结果试验组患儿换药次数（2.87±0.98）?次、完全溶痂时间（8.26±3.18）d、温哥华评分（4.25±0.87）分,对照组分别为（5.64±1.02）次、（12.38± 3.02）d、（8.12±1.04）分,差异均有统计学意义（t = 14.121,6.775,20.582,P均< 0.001）。试验组患儿浅Ⅱ度创面感染率0.00%、愈合时间（8.53±1.49）d,对照组患儿分别为17.31%、（10.61±2.05） d,差异均有统计学意义（χ² = 9.853,P = 0.002,t = 5.918,P < 0.001）。试验组患儿深Ⅱ度创面感染率5.77%、愈合时间（12.90±1.64）d,对照组患儿分别为34.62%、（15.45±1.49）d,差异均有统计学意义（χ² = 13.425,P < 0.001,t = 8.299,P < 0.001）。治疗后比较,试验组患儿创面周围炎症评分（1.91±0.48）分、创面渗出物评分（2.86±0.45）?分,对照组患儿分别为（1.33±0.37）分、（2.09±0.53）分,差异有统计学意义（t = 6.901,7.986,P均?< 0.001）。试验组患儿疼痛程度与对照组比较,差异有统计学意义（Z = 41.657,P < 0.001）。 结论采用异种脱细胞真皮基质联合丝蛋白敷料覆盖治疗Ⅱ度烫伤患儿,可减少术后感染,缩短痊愈时间,降低疼痛程度,疗效优势明显。     

脱细胞真皮基质治疗对糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者神经病变和对足部功能的影响

目的:探究脱细胞真皮基质治疗对糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者神经病变的缓解作用和对足部功能的影响。方法:选择本院2017.5-2020.5收治的80例糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者平均分为观察组和对照组2组,其中对照组患者给与常规干预结合下肢动脉腔内治疗,观察组则在对照组的基础上实施脱细胞真皮基质治疗。分析两组患者治疗前后TCSS评分、神经传导速度、足部功能、治疗效果、创面感染发生率、治疗费用以及并发症发生率的差异。结果:治疗后观察组患者TCSS评分和足部功能评分均较对照组低,神经传导速度较对照组快,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗总有效率、患者创面感染发生率和并发症发生率分别为100.00%、2.50%和2.50%,对照组患者则分别为80.00%、17.50%和55.00%,且对照组住院费用较观察组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脱细胞真皮基质治疗对糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者神经病变具有确切的缓解作用,尤其对足部功能效果显著,值得临床广泛推广使用。     

大鼠骨髓基质细胞的培养及生物学特性鉴定

目的:分离、培养大鼠MSCs,对其生物学特性进行鉴定.方法:取大鼠长骨中的骨髓组织,以贴壁法培养分离大鼠MSCs,经多次传代得到较纯的MSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用免疫细胞化学方法对细胞的表面抗原标志进行检测.取3代MSCs,B-ME诱导6小时候后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的表型特征.结果:倒置相差显微镜观察发现,接种后24h,细胞开始贴壁.培养3代以后,细胞呈梭形或多角形,折光性好,核为圆形、居中.免疫细胞化学检测细胞表面抗原显示:CD34-、CD45-、CD29+、CD44+、CD90+.诱导后细胞发出突起,逐渐生长延伸并彼此相连,形态学上具有神经细胞的明显特征.免疫细胞化学显示诱导后细胞NSE(神经元特异性烯醇化酶)阳性.结论:所采用的细胞分离培养方法简便可行,所获得的细胞其表型特征与文献报道一致,且具有向神经细胞分化的潜能.     

不同方法制备大鼠肝脏脱细胞支架及其免疫原性研究

目的:肝脏脱细胞支架(decellularized liver bioscaffold,DLB)在组织工程研究中具有良好前景,但对DLB的免疫原性尚未见探讨.本研究利用不同方案制备大鼠DLB,检测支架成分和体内重塑反应,为制备出低免疫原性的DLB提供改进依据.方法:选取文献报道的三种方案(分别以SDS,Triton X-100和NP-40为主要洗脱成分),制备F344大鼠DLB,进行HE和Masson染色,检测DLB中DNA、氨基葡聚糖(GAG)以及羟脯氨酸(HYP)含量;再将DLB埋植于C57BL/6小鼠的背部皮下,于术后第3、7和14天取出后进行形态学观察和组织学评分.结果:三种方案均成功制备出符合脱细胞标准的大鼠DLB;形态学结果提示TritonX-100和NP-40方案较SDS方案能更好地保护肝脏超微结构;成分检测结果发现NP-40方案去除DNA的能力显著强于SDS和Triton X-100方案(P＜0.05),而对GAG含量的洗脱作用最弱(P＜0.05);异种体内埋置实验提示NP-40方案制备的DLB引起的免疫反应强度明显弱于SDS和Triton X-100方案,体内重塑结局评分显著高于SDS和Triton X-100方案.结论:与SDS和TritonX-100方案相比,NP-40方案能更有效地去除肝脏DNA,较好地保留GAG,诱导移植受体对DLB的良性重塑反应,为进一步的体内研究提供更优化的支架.     

抗菌肽RIKL的分子设计及生物学活性分析

天然抗菌肽具有较强的杀菌能力,但高生物相容性抗菌肽的构建一直阻碍着该领域的发展.为了提高抗菌肽的选择特异性,通过分子动力学分析探讨了抗菌肽的结构特性,并检测其生物学活性.首先以(RXKY)2(YRY)2 (X代表Ile,Y代表Leu)为模板设计新型抗菌肽分子RIKL.通过圆二色谱(circular dichroism,...     

Effects of porcine acellular dermal matrix treatment on wound healing and scar formation: Role of Jag1 expression in epidermal stem cells

Skin wound healing involves Notch/Jagged1 signaling. However, little is known how Jag1 expression level in epidermal stem cells (ESCs) contributes to wound healing and scar formation. We applied multiple cellular and molecular techniques to examine how Jag1 expression in ESCs modulates ESCs differentiation to myofibroblasts (MFB) in vitro, interpret how Jag1 expression in ESCs is involved in wound healing and scar formation in mice, and evaluate the effects of porcine acellular dermal matrix (ADM) treatment on wound healing and scar formation. We found that Jag1, Notch1 and Hes1 expression was up-regulated in the wound tissue during the period of wound healing. Furthermore, Jag1 expression level in the ESCs was positively associated with the level of differentiation to MFB. ESC-specific knockout of Jag1 delayed wound healing and promoted scar formation in vivo. In addition, we reported that porcine ADM treatment after skin incision could accelerate wound closure and reduce scar formation in vivo. This effect was associated with decreased expression of MFB markers, including α-SMA Col-1 and Col-III in wound tissues. Finally, we confirmed that porcine ADM treatment could increase Jag1, Notch1 and Hesl expression in wound tissues. Taken together, our results suggested that ESC-specific Jag1 expression levels are critical for wound healing and scar formation, and porcine ADM treatment would be beneficial in promoting wound healing and preventing scar formation by enhancing Notch/Jagged1 signaling pathway in ESCs.     

家蝇天然抗菌肽的分离纯化与活性分析

目的:纯化得到有抗菌活性的家蝇天然抗菌肽。方法:以革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)的混合菌液,在未灭活的情况下对家蝇幼虫实施带菌针刺以诱导抗菌肽的大量表达。采用固相萃取(SPE),得到三个对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有强烈抑制作用的组分Sp1、Sp3和Sp8。用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对活性最强的Sp1进行了纯化,液体生长抑制法证明其中的组分Ⅲ具有最强活性。毛细管电泳(CE)显示该组分由两种物质组成。结果和结论:家蝇血淋巴中存在大量有抗菌活性的物质。该研究利用SPE和RP-HPLC与CE联用的方法,得到了有较强抗菌活性和较宽抗菌谱的粗提物,并获得一个推测由两种阳离子型抗菌肽组成的成分,为后期研究打下了基础。     

猪1型圆环病毒全基因组克隆及其感染性初步鉴定

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是由Tis-cher等[1]于1974年在PK-15细胞中发现,当时认为是一种细胞污染物,后被证实为一种新的病毒。病毒粒子为20面体对称,无囊膜,以滚环方式进行复制,可在PK-15细胞上生长但不引起细胞病变。其基因组是一种环状、单股副链DNA,与鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)、鹦鹉喙羽病毒(psittacine beak and feather disease circovirus,PBF-DAV)和人的TT病毒(transfusion transmittedvirus,TTV)同属圆环病毒科。猪圆环病毒有两种基因型即:PCV1和PCV2。前者广泛存在于猪源肾细胞中,在猪的组织…     

猪脑谷氨酸脱羧酶的分离纯化以及生物学活性鉴定

L-谷氨酸脱羧酶是γ-氨基丁酸合成的关键限速酶,广泛的存在于脊椎动物神经细胞以及β-胰腺细胞,是胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)病人以及僵硬综合症(SMS)病人血清的关键抗原。运用sephamryl S-200以及DEAEsepharose可以从猪脑中分离纯化出谷氨酸脱羧酶。纯化的GAD在变性条件下电泳,经考马斯亮蓝R250染色以及Western-Blot鉴定主要有两条带,分子量分别为67kD和44kD。根据L-谷氨酸脱羧酶能够分解谷氨酸产生γ-氨基丁酸和CO2的特性,通过测定产物γ-氨基丁酸推断酶活。以上实验结果表明从猪脑中分离纯化到的是具有生物学活性以及免疫原性的谷氨酸脱羧酶,可进一步改良为IDDM检测试剂盒,用于IDDM的预防和预测。     

复合抗菌肽PL在毕赤酵母中的分泌表达及其活性研究

为了获得抗菌活性较强的抗菌肽,将几种抗菌肽串联起来在毕赤酵母中表达,并比较其与单独抗菌肽的抑菌活性。以GenBank中的Protegrin-1(PG-1)、ScorpionDefensin(SD)、Metalnikowin-2A和SheepMyeloidAntibacterialPeptide(SMAP-29)(序列号分别为AAB27599,AAAB27538、P80409和P49928)成熟肽段作为模板序列,根据巴斯德毕赤氏酵母(P.pastoris)偏好密码子,设计并人工合成复合抗菌肽pl基因,同时用SOE法获得ScorpionDefensin的基因,分别克隆到pPICZαA载体中,转化P.pastoris受体菌X-33,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,复合抗菌肽PL及SD均获得表达。体外抑菌试验检测复合抗菌肽PL与单独的蝎子防御素SD的热稳定性、酸稳定性、最低抑菌浓度等,结果显示复合抗菌肽PL及SD具有很强的热酸稳定性,而针对不同的细菌,复合抗菌肽则表现出了强于单独的SD的活性,特别是对大肠杆菌。上述结果说明了该复合抗菌肽具有很好的开发前景。     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特性分析

将猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）CH-1a株GP5基因插入到伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）Bartha-K61株TK基因中,获得了一株TK^-／gE^-表型的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRV—GP5。经生长动力学、表达动力学和间接免疫荧光证实PRRSV GP5在重组病毒中获得了表达,表达蛋白的抗原性与亲本病毒相似,rPRV-GP5在不同的细胞上毒价和细胞病变与Bartha—K61比较无显著差异。4只PRV抗体阴性的绵羊,每只接种10^6.0。PFU的rPRV-GP5可以完全抵抗10^3LD50伪狂犬病强毒S株的攻击。10头PRV、PRRSV抗体阴性的仔猪滴鼻接种rPRV-GP5 10^7.0 PFU／头并在接种后63d攻击PRRSV CH-1a株10^5.0 TCID50／头,攻毒后3d和5d出现了PRRSV荧光抗体和ELISA抗体,在政毒后14d检测到了PRRSV中和抗体,Bartha—K61活疫苗组和对照组至实验结束时仍未检测到PRRSV中和抗体。这说明rPRV-GP5免疫产生了针对PRRSV的回忆性免疫应答。     

Cu/PAA的制备及其抗菌性能研究

采用两步阳极氧化法制备出孔径为75nm的多孔阳极氧化铝(PAA75),并使用交流电沉积技术在PAA75孔道内装载纳米Cu。采用场发射扫描电镜(FESEM)观察样品微观形貌,进一步采用X射线衍射(XRD)、X射线光电子能谱分析(XPS)对材料化学组成及晶型进行了表征和分析。选用大肠杆菌(E.coli ATCC 8099)和金黄色葡萄球菌(S.aureus ATCC6538)测试Cu/PAA的抗菌性能。研究结果表明,本方法制备的Cu/PAA中Cu主要以Cu0存在,并且Al和Cu所占原子比为17.77∶0.71。体外抗菌测试表明,Cu(10s)/PAA对E.coli的1d、2d和3d抑菌率分别为82%±11%、78%±7%和45%±4%,对S.aureus的1d、2d和3d抑菌率分别为89%±4%、75%±8%和56%±11%。     

Preparation of Some New Pyrazolo[1,5-a]pyrimidines and Evaluation of Their Antioxidant,Antibacterial (MIC and ZOI) Activities,and Cytotoxic Effect on MCF-7 Cell Lines

This study aims to synthesize some novel pyrazolo[1,5-a]pyrimidine derivatives, and investigate their biological activities. These compounds exhibited good to high antioxidant activities [2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging capabilities]. Among them, Ethyl 5-(2-ethoxy-2-oxoethyl)-7-hydroxy-2-methylpyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxylate ( 3h ) showed the highest antioxidant activity [Half-maximal Inhibitory Concentration (IC₅₀)=15.34 μM] compared to ascorbic acid (IC₅₀=13.53 μM) as a standard compound. Their antibacterial activities were investigated against two Gram-positive bacteria (Bacillus subtilis, and Staphylococcus aureus) and two Gram-negative bacteria (Pseudomonas aeruginosa, and Escherichia coli). The results showed that Ethyl 7-hydroxy-5-phenylpyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxylate ( 3i ) has the best antibacterial activity against Gram-positive B. subtilis [Zone of Inhibition (ZOI)=23.0±1.4 mm, Minimum Inhibitory Concentration (MIC)=312 μM]. Also, the cytotoxicity of these compounds was assessed against breast cancer cell lines [human breast adenocarcinoma (MCF-7)], which 7-Hydroxy-2-methyl-5-phenylpyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile ( 3f ) displayed the most cytotoxicity (IC₅₀=55.97 μg/mL), in contrast with Lapatinib (IC₅₀=79.38 μg/mL) as a known drug.     

家蝇抗菌肽对细菌细胞表面特性影响及其作用机理的研究

利用微生物对十六烷吸附的方法(MATS方法)、微电泳方法与测定细菌质膜上β-半乳糖苷酶活性的方法,探讨了家蝇抗菌肽对大肠杆菌等6种细菌细胞表面特性及其细胞膜的作用机制。研究结果表明,抗菌肽使细菌表面电负性增强,对G 细菌细胞表面电荷的改变大于对G-的改变,使细菌细胞表面疏水性不同程度的下降。抗菌肽引起细菌细胞膜通透性迅速增加,不同细菌β-半乳糖苷酶释放的最大速度VP在3.86pmol/min～6.92pmol/min,相应的时间TP为0,由此推测抗菌肽对细胞膜的作用机制是“形成孔洞”。