对Grimelius嗜银染色方法的改良

对Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色方法的改良田玉旺,丁华野,邢惠清,邓永江,黄晓南,李景仁（北京军区总医院病理科北京１００７００北京卫戍区２９２医院病理科）在显示内分泌细胞中的嗜银颗粒时,Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ组织化学显色是最常用的方法之一,它对诊断胰腺癌及阑...     

神经细胞尼氏体染色方法改良

组织细胞的染色无论在病理学诊断还是在科学研究与教学工作中,都具有重要的意义和使用价值。为了更好的研究神经组织,方便医学诊断、科研和教学工作,对3种常见尼氏体染色方法包括硫堇、甲苯胺蓝、吉姆萨染色法做了一些改良。改进的尼氏体染色法能够使脑组织切片更清晰美观,更有利于科研工作者对神经组织及尼氏体的研究。     

教学用细菌染色方法的改良

常用细菌染色有革兰氏染色,抗酸染色及检测细菌特殊结构的特殊染色法,本文对改良了的染色法进行比较和进一步改进,实验结果证明有操作简单,染色效果好等优点。     

大肠杆菌周质和外膜蛋白的定位

大肠杆菌周质和外膜蛋白发挥功能必须首先到达其特定亚细胞分区.大肠杆菌通过一系列与蛋白质分泌有关的蛋白（Sec蛋白）将周质和外膜蛋白转运至内膜.在切除了信号肽后,与周质蛋白的定位不同的是,外膜蛋白的最终定位还需要其他因子的协助.外膜蛋白的定位近来认为是以周质作为中介的.     

一种改良的肌细胞骨架染色方法

为了观察肌细胞骨架,对传统考马斯亮蓝染色法进行改良,并与免疫荧光染色法进行了比较。培养的血管平滑肌细胞先用多聚甲醛预固定后再进行考马斯亮蓝染色,可使细胞骨架非常清晰的显色,解决了传统考马斯亮蓝染色易使肌细胞变形、脱片的问题,其效果与免疫荧光染色相近。因此,多聚甲醛预固定．考马斯亮蓝染色法是一种适于肌细胞骨架染色的简便方法。     

抗肿瘤蛋白AAL与靶蛋白MRG15的共定位研究

一种从食用真菌Agrocybe aegerita中提取的凝集素AAL具有显著的抗肿瘤效果。该蛋白的基因序列已经通过RT-PCR得到。T7噬菌体展示库筛选发现该蛋白可以在体外和细胞核内的细胞周期调控蛋白mortality factor related gene on chro-mosome 15(MRG15)发生相互作用。本实验目的是证实AAL和MRG15在细胞核内的共定位,为AAL与MRG15的体内的互作提供证据。构建质粒,将aal与mrg15分别连接到pEGFP-C1和pDsRed-C1上,共转染Hela细胞。将pEGFP-C1和pD-sRed-C1空载体共转染Hela细胞作为对照。利用激光共聚焦显微镜研究AAL和MRG15在细胞内的共定位。AAL和MRG15均定位在细胞核内,荧光图片的重叠表明AAL和MRG15在核内共定位。而对照组中的EGFP和DS-RED在细胞内呈弥散分布。这些为AAL和MRG15在细胞核内的相互作用提供了证据。     

Holzer氏神经胶质纤维染色方法的改良

Ｈｏｌｚｅｒ氏神经胶质纤维染色方法的改良北京军区总医院病理科田玉旺,丁华野北京卫戍区２９２医院病理科李景仁在神经系统疾病的诊断中,观察神经胶质纤维的变化是鉴别诊断神经胶质细胞瘤和其它肿瘤的可靠依据。其中Ｈｏｌｚｅｒ氏磷钼酸结晶紫染色是常用的方法,但在...     

微生物实验中常用细菌染色方法的改良

细菌染色方法是微生物实验中观察细菌形态结构以及掌握细菌代谢、繁殖等情况的常用普及技术。微生物实验中常用的细菌染色法包括其革兰染色法、抗酸染色法等。为进一步提高实验中细菌形态的观测质量,本文就对两种常用细菌染色法进行了改良,据实验结果显示,其改进后方法操作更加简单,更有效起到细菌染色作用及观测作用。     

一个改良的猫脑定位方法

迄今普遍使用的猫脑立体定位图谱(Jasper等,1954;Snider等,1961;布瑞希等,1973),都是以两外耳道中点的连线(耳间线)和眶下缘做为水平面的参考点。这种定位方法要用耳棒固定颅骨,必然刺破鼓膜损坏中耳结构,引起剧烈的疼痛,不适用于针麻原理的实验研究。而且它还需要特定的脑立体定位仪,价值昂贵,不利于普遍推广应用。鉴于上述原因,改用另外一种猫脑立体定位方法,也能基本上满足针麻原理实验工作的要求。现介绍如下。     

改良的蛋白质电泳考马斯亮蓝染色方法研究

旨在建立简便、经济、灵敏以及质谱兼容的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳染色法,在胶体考染(Blue Silver)配方(0.12%的考马斯亮蓝G-250,10%的磷酸,10%的硫酸铵,和20%的甲醇)的基础上,通过优化凝胶固定时间与染色液中各物质用量,得到改良的染色液配方(0.1%的考马斯亮蓝G-250或R-250,5%的磷酸,5%的硫酸铵,10%的甲醇)及简便的操作步骤。试验对比结果显示,改良方法一与胶体考染相比仍保持了较高的染色灵敏度以及较好的质谱兼容性,且有机试剂使用量更少,染色深度与蛋白质量的线性关系也更好。     

包封膜蛋白的仿生细胞膜

本文概述了脂质囊泡的组成成分和制作方法以及用于膜蛋白方面研究的相关技术,包括膜蛋白整合到囊泡的方法、复合体系的表征等。脂质囊泡可以为膜蛋白提供类似体内的环境,包括疏水区和内外亲水环境,因其组分单一,可以方便地进行结构、功能、信号转导等方面的研究,因此可以模拟细胞膜作为研究膜蛋白的有力工具,目前大多是以脂质体形态作为仿生囊泡体系进行这方面研究。     

三阴性乳腺癌细胞膜表面EGFR和c-Met的单分子水平共定位研究

目的:在纳米水平直观验证表皮生长因子受体(EGFR)和肝细胞生长因子受体(c-Met)是否可以结合形成异源二聚体。方法:采用链霉亲和素-生物素技术,利用2种不同大小的纳米金颗粒(10和30 nm)分别结合核酸适配体对EGFR和c-Met进行共标记和共定位;采用环境扫描电镜对2种膜蛋白进行纳米尺度下的超高分辨成像观察,并开展统计分析。结果:三阴性乳腺癌细胞膜表面EGFR单体、二聚体、多聚体的占比分别为48.60%、29.83%、21.57%,cMet单体、二聚体、多聚体的占比分别为38.24%、27.66%、34.10%;EGFR、c-Met可以聚合形成异源二聚体和多聚体,分别占二聚体和多聚体总数的13.71%和24.42%。结论:EGFR和c-Met可以通过形成不同类型聚体的形式在膜上发挥作用,提示联合靶向EGFR和c-Met将成为针对三阴性乳腺癌的一种新的潜在治疗方法。     

天花粉蛋白可以插入含有天然细胞膜非胞质侧组分的磷脂膜

天花粉蛋白发挥细胞毒性需要跨过脂膜双分子层进入细胞质,但是这一过程的机制尚不清楚。在内吞过程中,膜的拓扑方向始终保持不变,天花粉蛋白首先接触磷脂膜双分子层的非胞质一侧。利用混合磷脂制备的磷脂单分子层和磷脂双分子膜来模拟天然细胞膜的非胞质侧,检验了天花粉蛋白与该混合磷脂膜问的相互作用。结果表明,在37℃、酸性pH下,天花粉蛋白对含有天然细胞膜非胞质侧组分的磷脂膜有较强的插膜能力;但在低温,如25℃、中性pH下,天花粉蛋白的插膜能力明显减弱。天花粉蛋白可以较深地插入混合磷脂膜双分子层中,使其色氨酸内源荧光被磷脂疏水尾链上的自旋基团淬灭。天花粉蛋白的插膜行为可以对磷脂膜产生瞬间的扰动,引起包裹的荧光染料泄漏。增加天花粉蛋白的浓度,可以促进天花粉蛋白与脂膜的相互作用。     

蛋白染色技术的新进展

新的配方和技术的改良,可以帮助科研人员克服传统的考马斯亮兰在蛋白胶染色过程中使用有毒溶液、实验耗时、重复性差、灵敏度低等缺点。     

不同条件下对改良PTAH染色效果的比较

不同条件下对改良ＰＴＡＨ染色效果的比较胥维勇，杨红，李科，杨群（四川省人民医院病理科成都６１００７２）我们采用ＰＴＡＨ染色改良法（胃蛋白酶消化处理代替酸性高锰酸钾氧化和草酸漂白还原作用），目的在于更加清晰地显示横纹肌纤维的细微结构，并在室温、加热、微...     

石蜡切片行免疫荧光染色后再行PAS或HE染色确定NPR-A蛋白在肾脏的定位

目的 介绍一种新方法来明确NPR-A蛋白在大鼠肾组织的定位.方法 采用肾脏石蜡切片先行NPR-A免疫荧光染色,然后再行PAS或HE染色.结果 NPR-A免疫阳性物在大鼠肾组织主要沉积于皮质的近端小管、外髓的髓袢升支粗段以及内髓集合管,直小血管、肾小球、远曲小管和细段也有一定量的表达,而皮质及外髓集合管仅有少量的表达.结论 研究采用石蜡切片先行免疫荧光染色后再行PAS或HE染色,在不用或少用特异性抗体的情况下,成功的解决了NPR-A蛋白在大鼠肾组织表达的分布位置及细胞定位的难题.     

红细胞膜蛋白的SDS凝胶电泳分析

高等动物的红血细胞是没有细胞核的高度分化的细胞。由于取材方便,分离和纯化膜的手续简便,所以被广泛采用作为膜生物学研究的材料。 在细胞膜的结构成分中,蛋白质占有重要地位。膜蛋白不仅包括多种特异的酶类和受体,而且还包含某些遗传标记物(如组织相容抗原)。它的组分的差异在某种程度上反映了细     

红细胞膜蛋白的SDS凝胶电泳分析

高等动物的红血细胞是没有细咆核的高度 分化的细胞。由于取材方便,分离和纯化膜的 手续简便,所以被广泛采用作为膜生物学研究 的材料^[2]     

Sema4C及其相互作用蛋白GIPC的亚细胞定位及荧光共定位研究

目的：观察脑信号蛋白Sema4C及其相互作用蛋白GIPC的亚细胞定位及两者的荧光共定位情况,为明确Sema4C和GIPC在亚细胞水平的相互作用提供佐证。方法：将Sema4C的基因编码区全长、胞外段和胞内段分别构建到pEGFPNl和pEGFPCI表达载体中,将GIPC编码区基因构建到pDsRed-C1表达载体中,分别转染HEK293细胞,观察亚细胞定位;将pEGFPNl-Sema4C和pDsRed-GIPC分别共转染HEl（293和COS7细胞,观察两者的荧光共定位情况。结果：酶切鉴定及测序结果表明重组载体构建正确,Sema4C蛋白全长和胞外段呈跨膜分布,而胞内段在全细胞中呈弥散样分布;GIPC在胞浆内呈斑块状聚集分布;pEGFPNl-Sema4C和pDsRed-GIPC存在荧光共定位区域。结论：Sema4C主要在胞膜和胞浆内表达,GIPC主要在胞浆内呈斑块样聚集分布;Sema4C和GIPC之间存在荧光共定位。     

植物细胞壁组织化学定位染色方法和技术的比较研究

利用光学和荧光显微镜比较研究几种植物细胞壁组织化学定位染色方法和技术,结果表明：（1）硫酸消化法和硫酸氢黄连素-苯胺兰对染法研究凯氏带,对取材时间和部位要求高,建议两种方法配合使用,可相互印证是否具凯氏带;（2）苏丹7B染色法,蓝色激发光下不染色和硫酸氢黄连素-苯胺兰对染研究细胞壁栓质层3种方法中,不染色蓝色激发光下结果比苏丹7B染色法敏感显色,但苏丹7B染色法在普通光学显微镜下观察较为便捷;（3）木质化细胞壁染色方法中硫酸氢黄连素-苯胺兰对染法比间苯三酚-盐酸染色法易显色观察;（4）甲苯胺兰快速染色细胞壁取代常规苏丹Ⅲ/Ⅳ法,细胞边界和层次更清楚。