三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较

目的采用活体成像技术比较三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移情况,为研究肿瘤转移提供理想的动物模型以及活体分析方法。方法以荧光素酶（luciferase,Luc）作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1、66c14和4TO7中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆并扩大培养。标记细胞稀释成1×107cells/mL,取0.1 mL进行乳腺原位及尾静脉接种BALB/c小鼠,制作小鼠乳腺原位和尾静脉移植瘤模型,比较三株细胞在小鼠体内生长及转移情况。结果获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆,将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠乳腺原位接种后7 d,均有肿瘤生长,接种后28 d,4T1细胞乳腺原位移植瘤最大,66c14细胞瘤体次之,4TO7细胞瘤体最小;接种后35 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小较一致,但4T1和66c14原位移植瘤均发生转移,其中4T1细胞较66c14细胞转移严重,而4TO7细胞未见转移;接种后42 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小无明显差别,而4T1和66c14细胞随天数的增加,移植瘤转移程度逐渐严重,4T1较66c14细胞转移更严重,呈广泛性转移,4TO7细胞仍未见转移。将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠尾静脉接种后7 d,小动物活体成像发现小鼠肺部均能检测到荧光,其中4T1细胞接种的小鼠肺部荧光信号最强,且小鼠陆续死亡;4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号次之;66c14细胞接种小鼠肺部荧光信号最弱。尾静脉接种后14 d,4TO7和66c14细胞随着观察天数的增加,转移程度逐渐严重,4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号较66c14细胞强且小鼠陆续死亡。结论乳腺原位自发转移模型较尾静脉转移模型更真实反应了肿瘤细胞在体的转移特性,且能完整地呈现肿瘤转移的全过程,可作为研究肿瘤转移的最理想模型。     

小鼠Lewis肺癌不同部位皮下移植瘤模型的比较

目的探究不同部位肺癌皮下移植瘤存在的差异,为肺癌研究者提供提供基础依据。方法将稳定表达虫萤光素酶的小鼠Lewis肺腺癌细胞(ll2-luc-m38)分别注射于C57 BL/6小鼠的右腋皮下、右腹股沟皮下、脚垫皮下,定期利用小动物活体成像系统观察小鼠皮下移植瘤成瘤情况及转移情况,观察不同部位荷瘤小鼠的生存时间和死亡率,肿瘤组织取材,采用石蜡包埋、切片、HE染色做出病理学诊断。并将小鼠处死后立即进行肺部组织固定、观察转移灶。对皮下移植瘤行切除术观察小鼠术后生存情况和转移情况。结果腋下组和腹股沟组成瘤时间较早,成瘤率为100%,脚垫组成瘤时间较晚,成瘤率为33%;腹股沟组和腋下组瘤体积增长迅速,其中腹股沟组瘤体积增长最快;接种后第21天腋下组70%的小鼠出现了肺转移,转移灶数目较多;腹股沟组50%小鼠出现肺转移,且转移灶数目较少;脚垫组小鼠未观察到肺转移灶。脚垫组小鼠死亡率最高。腹股沟组和腋下组小鼠可行皮下移植瘤切除术,术后存活率为100%。结论小鼠lewis肺癌皮下移植瘤模型中,腹股沟组和腋下组成瘤率高,可耐受移植瘤切除术,手术死亡风险低,便于监测,操作简单且可重复性高,其中腋下组转移性更好。     

甘青虎耳草乙酸乙酯提取物对小鼠肝癌细胞及原位移植瘤的抑制作用

目的探讨甘青虎耳草乙酸乙酯提取物(Et OAc extract from Saxifraga taugutica,EST)对小鼠肝癌细胞及原位移植瘤的抑制作用。方法体外实验用不同浓度EST处理H22细胞48 h后,AO/EB双荧光染色,激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用核酸电泳和流式细胞术检测H22细胞的凋亡情况。建立小鼠肝癌原位移植瘤模型进行体内实验,对比EST低、中、高剂量组对荷瘤小鼠抑瘤率、T淋巴细胞增殖能力以及肝病理变化的影响。结果 EST处理后H22细胞出现凋亡形态学变化,且与浓度正相关;核酸电泳呈凋亡特征性梯状带;流式细胞分析,500μg/m L处理组凋亡率达31%;体内试验显示,EST低、中、高剂量的抑瘤率分别为33.0%、46.7%、64.3%;显著提高小鼠的胸腺指数、T淋巴细胞增殖能力(P 0.05);组织学观察证明EST各剂量组癌细胞有不同程度的生长抑制,形态固缩、向周围组织浸润减少。结论 EST可增强小鼠免疫功能和诱导肿瘤细胞凋亡,具明显的抗肿瘤作用,与剂量正相关。     

番茄红素对骨肉瘤大鼠后肢移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响

目的探讨番茄红素对骨肉瘤大鼠后肢移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响。方法将30日龄1级Wistar大鼠20只,于大鼠后肢股骨远端的骨髓腔中注射骨肉瘤细胞,建立大鼠后肢移植瘤及移植瘤动物模型,并分为对照组和实验组。两组均常规喂养,实验组按100mg／kg食物添加番茄红素,观察番茄红素对大鼠健康状况、体重变化及移植瘤变化的影响,并用TUNEI。方法检测其对移植瘤细胞凋亡的影响。结果番茄红素对大鼠健康状况及体重变化无明显影响（P〉0．05）;对移植瘤的生长有抑制作用,肿瘤抑制率为74．5％（P〈0．05）;对移植瘤细胞的凋亡有促进作用（P〈0．05）。结论番茄红素可能通过促进肿瘤细胞凋亡等途径对骨肉瘤产生抑制作用,成为骨肉瘤化学预防及治疗的辅助手段。     

东方田鼠与昆明小鼠乳腺癌细胞表面特征比较

目的　通过对封闭群东方田鼠 (Microtusfortis)和昆明小鼠乳腺癌细胞扫描电镜特征的观察 ,旨在了解两者之间的差异。方法　将乳腺癌肿块与经产正常东方田鼠乳腺以及昆明小鼠自发性乳腺癌肿块作常规扫描电镜。结果　正常东方田鼠乳腺的腺管结构规则 ,可见分散的乳腺细胞 ,乳腺细胞表面有许多皱褶和不规则的小丘状突起 ,状如桑椹 ,无明显可见的微绒毛 ;东方田鼠乳腺癌的腺管结构不规则 ,细胞表面密布微绒毛 ,微绒毛长而不规则 ,末端成松叶状 ;昆明小鼠乳腺癌的组织中散布有大量带有微绒毛的癌细胞 ,其微绒毛特点为密而短 ,末端为圆纯状。结论　东方田鼠与昆明小鼠乳腺癌细胞表面呈现不同的微绒毛特征     

人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型的建立及生物学特性研究

目的-建立人乳腺癌MDA-MB-231细胞株裸小鼠模型,研究其生物学特性,观察MDA-MB-231乳腺癌细胞在移植前后的形态学变化。方法-将人乳腺癌细胞MDA-MB-231接种于裸鼠腋窝处皮下,每3天测量肿瘤大小,第30天处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理切片。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养HE染色。结果-肿瘤生长较快,成功率为72%,病理检查符合人乳腺癌细胞特征。肿瘤组织细胞及培养细胞形态学未见显著差异。结论-人乳腺癌细胞株MDA-MB-231裸小鼠模型建立方法较简便,细胞形态无明显差异,且保持了人乳腺癌的生物学特性。     

EGCG对Tca8113细胞移植瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用研究

为了探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对Tca8113鳞状细胞癌细胞移植裸鼠肿瘤的抑制作用及其机制。本研究选取采用Tca8113鳞状细胞癌细胞建立的裸鼠肿瘤模型48只,采用随机数字表法分为空白组(等量生理盐水灌胃)、低剂量组(ECGC 10 mg/kg灌胃)、中剂量组(ECGC 20 mg/kg灌胃)、高剂量组(ECGC 40 mg/kg灌胃)各12只,连续灌胃治疗16 d,测量各组小鼠肿瘤重量及体积、计算抑瘤率,采用流式细胞仪技术测定各组瘤体组织中细胞生长周期的分布,采用免疫组化染色技术测定各组肿瘤组织中Caspase8、Caspase3、Ki-67蛋白的表达。研究显示,低剂量组、中剂量组和高剂量组的瘤体质量和体积均显著的小于空白组(p0.05),且随着EGCG剂量的加大,裸鼠移植瘤体积和质量逐渐减小,而抑瘤率显著增加(p0.05);低剂量组、中剂量组和高剂量组的G0/G1期细胞比例显著高于空白组(p0.05),而S期及G2/M期细胞比例显著降低(p0.05);随着EGCG剂量的增加,各组G0/G1期细胞比例显著增加,而S期及G2/M期细胞比例显著降低(p0.05);低剂量组、中剂量组和高剂量组的肿瘤组织中Caspase8和Caspase3表达显著高于空白组(p0.05),而Ki-67蛋白表达显著低于空白组(p0.05);随着EGCG剂量的增加,各组肿瘤组织中Caspase8和Caspase3蛋白表达显著增加,而Ki-67显著降低(p0.05)。EGCG对Tca8113鳞状细胞癌细胞移植裸鼠肿瘤生长具有明显的抑制作用,其机制可能是通过调节细胞周期及Caspase8、Caspase3和Ki-67蛋白的表达来实现。     

动物组织及细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ提取及解结活性的比较研究

 本文用改进的方法从一些动物组织中抽提了DNA拓扑异构酶Ⅱ,并用电镜、电泳方法对该酶解结活性进行了鉴定。酶活力测定结果表明该酶在不同组织中分布不尽相同,增殖较旺盛的组织具有相对较高的酶活性。pH值、温度、一些激动剂、抑制剂及组织的状态均对酶活力有影响。     

维生素E促进小鼠H-22移植瘤的作用及机制

[目的]利用H-22荷瘤小鼠研究维生素E(vitamin E,VE)对肿瘤发生发展的作用及机制。[方法]建立H-22小鼠荷瘤模型,计算肿瘤指数与肝脏指数,利用试剂盒检测血糖、血清低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、总胆固醇(total cholesterol,TC)以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)水平,利用苏木素-伊红染色与Real-time PCR检测VE对肿瘤发展和转移的作用及分子机制。[结果]肿瘤-VE组LDL水平、肿瘤组和肿瘤-VE组TC、AKP水平显著高于对照组(LDL,P <0.05; TC,P <0.01; AKP,P <0.001)。肿瘤组织中肿瘤-VE组小鼠p27K ip1、Stat3以及Cxcl12基因表达水平显著高于肿瘤组(p27^Kip1和Stat3,P <0.05,Cxcl12,P <0.01)。肝脏组织中肿瘤-VE组Jak2、Pigf及Cxcl12基因表达水平显著高于肿瘤组(P <0.05),且肿瘤组Jak2、Pigf及Cxcl12基...     

NDV7793对肺腺癌皮下移植瘤小鼠肿瘤组织CEACAM1表达的影响

为研究NDV7793对肺腺癌皮下移植瘤小鼠肿瘤组织CEACAM1蛋白表达的影响,我们取72只健康C57BL/6小鼠,建模后随机分为3组(每组24只):PBS阴性对照组、顺铂阳性对照组和NDV7793给药组。观察各组小鼠的生存期及肿瘤生长情况;通过流式及免疫组化检测各组小鼠肿瘤组织CEACAM1表达水平。发现NDV7793给药组生存期显著长于PBS阴性对照组及顺铂阳性对照组,NDV7793给药组较顺铂阳性对照组抑瘤率更高,顺铂阳性对照组较PBS阴性对照组及NDV7793给药组小鼠肿瘤组织CEACAM1的表达水平更强,且NDV7793给药组较PBS阴性对照组小鼠肿瘤组织CEACAM1的表达水平更弱。提示NDV7793对肺腺癌皮下移植瘤小鼠的疗效比顺铂更佳,不仅延长小鼠生存期及抑制肿瘤生长,而且抑制肿瘤组织CEACAM1蛋白表达。     

混合乳酸菌对小鼠肠上皮细胞的粘附及抑菌机制

目的 研究混合乳酸菌粘附及抑菌机制。方法 测定混合菌株粘附相关能力及抑菌方式,初步研究菌株粘附相关的表面活性成分。结果 混合菌株的表面疏水性、自聚合能力较高,对ICE-6细胞的粘附性亦较高。可抑制G+菌（金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、艰难梭菌）和G‒菌（大肠埃希菌、沙门菌、假单胞菌）粘附ICE-6细胞,抑制方式效果为排除>竞争>替代;热处理对菌株粘附性影响明显高于胃蛋白酶、胰蛋白酶、LiCl和NaIO4等处理,表面蛋白（80~140 kDa）可使LiCl处理菌株的粘附率提升45%。结论 混合乳酸菌主要通过排除方式抑制外源菌的粘附,表面蛋白影响混合乳酸菌的粘附能力。     

癌基因及癌发育基因在裸小鼠人肝癌移植瘤中表达

本文采用Northern blot,斑点杂交,western Immunoblot,凝集素亲和电泳及聚丙烯酰胺梯度电泳方法分别检测裸小鼠肝癌移植瘤中C-ras基因簇(N-ras,H-ras及K-ras),甲种胎儿蛋白以及γ谷氨酰转肽酶(GGT)基因及其产物的表达。结果提示C-ras基因簇均有不同程度的表达,其中N-ras基因表达水平要比H-ras高8倍,比K-ras高20倍左右,同样AFP及GGT基因均有较高水平的表达。经ras-p21单克隆抗体检测,发现肝癌组织抽提液中p21呈现阳性反应;AFP亚型分析提示AFP分子变异体属肝癌特异性分子亚型;GGT同Ⅰ酶酶谱分析表明组织中仅合成肝癌特异性GGT同Ⅰ酶酶谱(Ⅰ’,Ⅱ’)。上述结果充分表明癌基因及癌发育基因的高表达可能与癌细胞去分化性,分裂旺盛程度及细胞恶性度相关。最后文内还对裸小鼠人肝癌移植瘤中二类基因的相关性作一定的讨论。     

不同品系小鼠的体外受精、胚胎冷冻及移植的比较研究

目的　探讨不同品系小鼠的体外受精、胚胎和精子的低温保存效果。方法　本实验分别在中国科学院上海实验动物中心 (SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心 (CARD)对 13个品系小鼠 (C57BL 6J、BALB c、C3H HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA 2、CD 1、BDF1、B6C3F1)的体外受精 (IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究。结果　各品系小鼠新鲜精子的IVF率 15 1%～ 87 9% ,冻融精子的IVF率 8%～ 80 % ;冷冻胚胎的复苏率4 2 6 %～ 83 9% ;冻融胚胎移植后的产仔率在 17 8%～ 5 1 8%。结论　遗传背景不同的小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植的产仔率差异有显著性。但同一品系两个实验室间的新鲜精子的IVF率、冷冻胚胎的复苏率及移植产仔率差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;冻融精子的体外受精率CARD明显高于SLAC(P <0 0 1)。     

荧光素酶标的人肝癌细胞裸鼠异种移植瘤模型的生物发光成像和PET-CT成像比较

目的利用荧光素酶基因标记的人肝癌细胞株BEL-7402建立裸鼠肝原位移植模型,及小鼠肝原位移植模型的生物发光和小动物PET-CT成像的比较。方法构建表达荧光素酶基因的真核表达载体并将其转入人肝癌细胞BEL-7402,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆并扩大培养。BALB/cA-nu裸鼠肝门静脉接种5×105个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像和小动物PET-CT成像系统观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达Luc的人肝癌细胞株,将其接种到裸鼠体内,活体荧光成像系统观察发现能够成瘤,小动物PET-CT影像观察发现小鼠肝脏边缘对18 F-FDG有高摄取区域。结论利用荧光素酶基因标记的人肝癌细胞BEL-7402成功建立了原位肝癌裸鼠模型,小动物活体成像结合小动物PET-CT技术为原位肿瘤模型的建立提供了一种新的可靠的技术,为进一步研究肝癌生长转移机制和药物开发提供了新的有用工具。     

氟化钠对小鼠睾丸组织的损伤及细胞凋亡的影响

目的研究氟中毒对小鼠睾丸组织的影响。方法给小鼠饮用含0 mg/L、10 mg/L、25 mg/L、50 mg/L氟化钠水,HE染色观察睾丸组织形态病理学变化,用TUNEL法检测小鼠睾丸组织细胞凋亡。结果氟中毒能诱导小鼠睾丸TUNEL阳性细胞,且凋亡细胞率较对照组明显增高。结论氟中毒可诱导小鼠睾丸组织细胞凋亡明显,凋亡发生部位与病理改变明显的部位相吻合,氟中毒小鼠睾丸组织细胞凋亡机制参与睾丸损害过程。     

体外培养条件下小鼠及人骨髓基质细胞的比较

本文比较了小鼠及人脊髓ＣＦＵ－Ｆ及ＣＦＵ－Ｆ集落间细胞生长的特点。结果表明人骨髓ＣＦＵ－Ｆ中成纤维细胞的百分比明显高于小鼠,经２次传代培养即可获得纯的骨髓成纤维细胞。小鼠骨髓基质细胞中内皮细胞和巨噬细胞的比例及总数明显高于人。在ＧＭ－ＣＳＦ的刺激作用下。小鼠骨髓内皮细胞可大量增殖,ＣＦＵ－Ｆ的生长受到抑制     

杏茎脆散型愈伤组织的获取及细胞悬浮培养的建立

对获取两个杏（ＰｒｕｎｕｓａｒｍｅｎｉａｃａＬ．）品种‘Ｃａｎｉｎｏ’和‘Ｌｕｉｚｅｔ’茎脆散型愈伤组织及建立其细胞悬浮培养进行了研究。结果表明,增加继代培养次数,提高培养基中Ｃａ￣（＋＋）的加入量,选用未木质化的外植体,配以含有较高浓度的２,４－Ｄ和激动素的培养基,能迅速获得１００％的脆散型愈伤组织,成功地建立其细胞悬浮培养系统。