利用DNS法快速分析及优化柚皮苷的酶解过程

【目的】建立采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法快速测定柚皮苷水解率的方法,并利用该方法对柚苷酶催化水解柚皮苷生成柚皮素的反应过程进行优化研究。【方法】利用棘孢曲霉JMUdb058发酵得到的柚苷酶催化水解柚皮苷,采用DNS法对柚皮苷酶解过程中还原糖的生成量进行分析,经过换算得到柚皮苷的水解率,并在此基础上通过单因素实验优化柚皮苷的酶解过程。【结果】在柚皮苷的水解过程中,还原糖的生成量与柚皮苷的水解量及柚皮素的生成量均呈现出良好的线性关系,因此可利用DNS法测定体系中还原糖的生成量,并通过换算得到柚皮素的生成量。利用该方法优化柚皮苷的酶解过程得到柚苷酶转化柚皮苷的最适温度为50°C、pH为5.0、酶用量为8 U/mL、底物浓度为0.2 g/100 mL。在此条件下,柚皮苷酶解150 min后可达到平衡,此时其水解率为85%。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法测得Km为     

苦杏仁苷抗肿瘤机制的研究进展

近年来肿瘤的发病率越来越高,虽然采取了综合疗法,但晚期恶性肿瘤死亡率仍处于较高水平。随着中草药研究的深入,研究人员发现多种中草药具有良好的抗肿瘤作用。苦杏仁苷主要存在于苦杏仁中,除了具有抗氧化、抗菌、抗炎、免疫调节等作用外,还具有抗肿瘤的特性。本文总结了苦杏仁苷的结构特征、抗肿瘤机制及研究进展,为探索其抗肿瘤的临床应用奠定了理论基础。苦杏仁苷可通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡、细胞毒作用、调节机体免疫功能等在肺癌、膀胱癌、肾细胞癌等实体肿瘤中发挥抗肿瘤作用。进一步深入研究苦杏仁苷的药理机制,在发挥其抗肿瘤作用的同时减少毒副作用,尽快实现苦杏仁苷的临床应用。     

蚯蚓外源酶与内源酶酶解产物分析

本试验采用了枯草杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398枯草杆菌蛋白酶和自溶制备蚯蚓肽,通过前期单因素试验,设计正交试验L9(34),以氨基氮数,多肽浓度为衡量指标,对最佳酶解条件进行筛选研究,并分析了酶解液氨基酸组成和相对分子量的分布。结果表明:AS1.398枯草杆菌蛋白酶最佳酶解条为pH 6.5、酶浓度1%、温度50℃、反应时间8 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的每100 mL水解液氨基氮数可以达到16.55 mmol,多肽浓度达9.22 mg/mL;自溶酶解蚯蚓的最佳条件pH 7.0、底物浓度1∶2、温度50℃、反应时间6 h,在此条件下,酶解蚯蚓蛋白的每100 mL水解液氨基氮数可以达到21.55 mmol,多肽浓度达11.65 mg/mL;二者酶解产物分子量大部分是在5000以下的多肽、小肽及氨基酸的混合物,其中分子量在300以下占了80%,氨基酸组成平衡,含量丰富,可用来制取新型氨基酸微量元素及小肽添加剂。通过控制酶解条件,蚯蚓可以利用自身的酶源自溶来代替外源酶,从而降低成本。     

魔芋粉酶解产物与低聚果糖对双歧杆菌的促生长作用比较研究

由枯草芽胞杆菌以摩芋粉为底物经发酵培养获得的β-甘露聚糖酶酶活力达10U／ml,用该酶液水解魔芋粉制备含有低聚糖的魔芋粉酶解产物。在无碳源的GAM基础培养基中,添加不同量的魔芋粉酶解产物对双歧杆菌具有明显的促生长作用,其促生长作用与低聚果糖相当,均以2％的浓度增殖效果最明显,与不加低聚糖的对照组相比,活菌数可以提高几倍到十几倍。     

一种快速、高效分离微生物转化产物5-氟尿苷的方法

使用一种有效的柱色谱方法分离微生物转化产物5-氟尿苷。该方法采用干燥柱真空层析和三种不同的溶剂系统,使获得的5-氟尿苷的纯度达98%,收率为92%。该方法适用于从酶反应混合物中分离核苷类似物。     

β-木糖苷酶及其在纤维素乙醇生产中的应用研究进展

将木质纤维素类生物质生物转化生产液体燃料,如纤维素乙醇和大宗化学品,对缓解当前人类社会面临的能源和资源危机以及保护环境具有重要意义.半纤维素是木质纤维素类生物质的主要组成成分之一,它的生物降解转化对实现木质纤维素生物炼制意义重大.由于半纤维素糖种类的多样性和半纤维素结构的复杂性,需要一个复杂的半纤维素酶系才能完成对半纤...     

武汉东湖光合色素与叶绿素a代谢产物的HPLC研究

用高效液相色谱（HPLC）法研究了武汉东湖周年及围隔实验水柱颗粒物色素的组成及变化。共检测到约20种色素,类胡萝卜素含量较高的有硅藻的标志色素岩藻黄素,隐藻的异黄素,蓝绿藻的黄体素,玉米黄素及胡萝卜素。东湖叶绿素a的代谢产物主要为脱植基叶绿素a(全湖年均约占叶绿素a的5%）,而非脱镁叶绿素a或脱镁叶绿酸a。围隔实验结果表明：叶绿素a与总浮游植物（r=0.84)。叶绿素b与绿藻（r=0.77)。岩藻黄素与硅藻（r=0.68),异黄素与隐藻生物量（r=0.83)之间具显著的相关性。表明用HPLC分析色素快速,简捷,是研究浮游植物群落组成及动态变化的有力辅助工具。     

HPLC法测定葛花中鸢尾苷的含量

目的：测定8个产地葛花中鸢尾苷的含量,建立葛花中鸢尾苷含量测定的HPLC方法。方法：采用GRACEC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.8mL/min,紫外检测波长为265nm;柱温为室温。结果：鸢尾苷的峰面积（Y）与浓度（X）在11.8～236.4μg/mL范围内具有良好线性关系,Y=34920X-1156.5,r=0.9995（n=7）;平均加样回收率为103.66%,RSD〈2%（n=9）;测得8批不同产地的葛花药材中鸢尾苷含量在37.00～113.1mg/g。结论：建立了高效液相色谱法测定葛花中鸢尾苷含量的方法,该法准确、可靠,可用于葛花中主要成分鸢尾苷的含量测定;不同产地葛花中均检测到鸢尾苷,但其含量有一定区别。     

大豆蛋白复合酶解产物在促微生物生长和发酵中的初步应用研究

为探讨大豆蛋白复合酶解产物在促微生物生长和发酵中的可行性,利用2709碱性蛋白酶和中性纤维素酶复合酶解大豆蛋白,酶解产物经干燥、粉碎后添加到培养基中,通过接种微生物观察其生长状况和发酵情况表征效果。研究发现,大豆蛋白复合酶解产物可以促进微生物生长和发酵产酶,试验结论为微生物培养提供了新的代谢资源。     

α-半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞结构功能的影响

目的　观察α 半乳糖苷酶对猕猴类人B抗原的酶解效果 ,探讨α 半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞结构、功能的影响。方法　采用热吸收放散试验从 30只华南猕猴中选取类人ABO血型抗原较强的 2只A型、3只B型猕猴做为实验对象 ,以基因重组的α 半乳糖苷酶体外酶解猕猴类人B型血抗原 ,并回输到A型猕猴体内 ,测定红细胞脆性、自身溶血率、胆固醇、高铁血红蛋白、乙酰胆碱脂酶、ATP等红细胞的结构功能指标。结果　经α 半乳糖苷酶酶解后 ,猕猴红细胞胞膜完整、携氧能力正常 ,酶解后的“通用”型血回输给受体猕猴无任何输血反应发生。结论　α 半乳糖苷酶酶解对于猕猴红细胞的形态、结构、功能无不良影响 ,且在实验动物体内是安全的。     

蒸汽爆破对油菜秸秆降解产物的影响

采用DNS法、离子色谱法和气质联用(GC-MS)技术对油菜秸秆蒸汽爆破降解产物进行了分析。结果表明,经蒸汽爆破处理后的油菜秸秆酶解产糖量有明显的提高,为未处理样品直接酶解含量的3.4倍,各种水溶性糖化合物的含量也大大提高,其中葡萄糖和木糖含量分别为未处理样品直接酶解含量的3.5倍和4.7倍之多。水提液乙酸乙酯萃取物中分别检测到脂肪酸类、芳香类和呋喃类物质40、12和1种。通过扫描电镜观察处理后油菜秸秆的表面形貌结构,发现处理后的秸秆表面结构松散,比表面积增大,酶对纤维素的可及性增加。     

Simultaneous Determination of Bulky Imides and Their Hydrolyzed Products by D-Hydantoinase with Cyclic-imide-hydrolyzing Activity using HPLC

Applied Biochemistry and Microbiology - A novel HPLC method for simultaneous detecting bulky imides and their hydrolyzed products by D-hydantoinase was established. Phthalimide (PI) and...     

天然产物的生物转化

本文按反应类型综述了近五年来天然产物生物转化的研究进展,并对生物技术干预下的生物转化作了简要介绍.     

HPLC法同时测定千斤拔属植物7种黄酮的含量

目的:测定千斤拔属7种植物中的7种黄酮类的含量,为千斤拔类药材质量控制提供依据。方法:色谱条件为Hedera C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm):流速1.2 mL/min,流动相为0.5%HAc水和乙腈梯度洗脱,柱温35℃,检测波长263 nm。结果:七种黄酮类成分在90 min内达到现行分离,线性关系良好(,R2>0.9995),日内、日间精密度、稳定性和重复性的RSD≤3.0%。该法成功的应用于千斤拔药材7种黄酮的评均回收率分别为96.94%～105.29%(RSD≤2.98%)结论:本方法准确、快速、重现性好,不同品种的千斤拔药材质量存在差异,可以为研究千斤拔药材的质量标准提供依据。     

HPLC法测定卷柏及其炮制品中穗花杉双黄酮的含量

采用HPLC方法测定卷柏及炮制品中穗花杉双黄酮的含量。方法:Shim-pack VP-ODS柱(4.6 mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸水(65∶35);流速:0.8 mL/min;检测波长:337 nm;柱温:25℃。实验结果表明,卷柏生品中穗花杉双黄酮的含量为0.84%,焦卷柏为1.07%,卷柏炭为0.53%。不同的炮制方法对穗花杉双黄酮的含量产生不同的影响。     

HPLC同时测定雪胆属植物中3种活性成分的含量

建立了高效液相色谱法同时测定雪胆属植物中雪胆乙素、竹节参皂苷Ⅳa和雪胆甲素含量的方法,可用于11种雪胆属植物中3种活性成分的同时测定。采用InertSustain C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~20 min,5%~20%B;20~60 min,20%~30%B;60~80 min,30%~64%B);流速1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长203 nm。经方法学考察,本方法具有准确快速、精密度高、重复性好的特点,雪胆乙素、竹节参皂苷Ⅳa和雪胆甲素分别在0.075~3.000μg、0.810~32.400μg和0.620~24.800μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系(r≥0.999 5)。定量分析测得11种雪胆属植物中雪胆乙素含量在0.479~1.904 mg/g范围内,彭县雪胆中含量最高;竹节参皂苷Ⅳa含量在1.098~18.58 mg/g范围内,峨眉雪胆中含量最高;雪胆甲素含量在3.079~17.56 mg/g范围内,十一叶雪胆中含量最高。本方法可为雪胆属优质药用资源开发及综合利用提供参考。     

大鼠血浆中洛伐他汀的HPLC测定及药动学研究

目的:探索采用高效液相色谱法测定大鼠血浆中洛伐他汀浓度的方法。方法:血浆样品采用环已烷-二氯甲烷(3.5:1,V/V)提取,HPLC条件为色谱柱采用XTerra(?)MSC18柱(150×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-水(63L37,V/V),柱温35℃,检测波长为238nm。结果:大鼠血浆中洛伐他汀在0.01～5μg/mL线性范围内线性关系良好,最低检测浓度为0.01～g/mL,方法的提取回收率为81%～95%,日内、日间RSD均小于9.55%;药代动力学结果表明洛伐他汀在雌雄大鼠体内的Tp、Cmax和AUC均有显著性差异(p<0.05)。结论:建立的HPLC方法简便、灵敏度高,重现性好,药动学研究表明洛伐他汀在大鼠体内存在性别差异。     

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic requirements for eukaryotic protein degradation was initially established in Saccharomyces cerevisiae. Classical analyses of protein degradation have relied on biochemical pulse-chase and cycloheximide-chase methodologies. While these techniques provide sensitive means for observing protein degradation, they are laborious, time-consuming, and low-throughput. These approaches are not amenable to rapid or large-scale screening for mutations that prevent protein degradation. Here, a yeast growth-based assay for the facile identification of genetic requirements for protein degradation is described. In this assay, a reporter enzyme required for growth under specific selective conditions is fused to an unstable protein. Cells lacking the endogenous reporter enzyme but expressing the fusion protein can grow under selective conditions only when the fusion protein is stabilized (i.e. when protein degradation is compromised). In the growth assay described here, serial dilutions of wild-type and mutant yeast cells harboring a plasmid encoding a fusion protein are spotted onto selective and non-selective medium. Growth under selective conditions is consistent with degradation impairment by a given mutation. Increased protein abundance should be biochemically confirmed. A method for the rapid extraction of yeast proteins in a form suitable for electrophoresis and western blotting is also demonstrated. A growth-based readout for protein stability, combined with a simple protocol for protein extraction for biochemical analysis, facilitates rapid identification of genetic requirements for protein degradation. These techniques can be adapted to monitor degradation of a variety of short-lived proteins. In the example presented, the His3 enzyme, which is required for histidine biosynthesis, was fused to Deg1-Sec62. Deg1-Sec62 is targeted for degradation after it aberrantly engages the endoplasmic reticulum translocon. Cells harboring Deg1-Sec62-His3 were able to grow under selective conditions when the protein was stabilized.     

Formation and Degradation of Styrene Oxide Stereoisomers by Different Microorganisms

The formation of optically pure styrene oxides by oxidation of styrene and the isomerisation of styrene oxide to phenylacetaldehyde was investigated with different microorganisms.     

高效液相色谱法同时测定楠竹叶提取物中的4种黄酮

采用高效液相色谱法同时测定楠竹叶提取物中的4种主要黄酮成分：荭草苷、牡荆苷、牡荆苷-4′-O-葡萄糖苷、牡荆苷-2′-O-鼠李糖苷。通过实验,得到了同时测定4种主要黄酮成分的最佳条件。采用Kromasil-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm,Akzol Nobel,Sweden)进行测定,最佳检测条件为：以四氢呋喃∶乙腈∶甲醇∶0.5%醋酸水溶液=10.3∶1∶0.7∶88为色谱流动相等度洗脱;检测波长360 nm;柱温25℃,流速：1.0 mL·min^-1。荭草苷、牡荆苷、牡荆苷-4′-O-葡萄糖苷和牡荆苷-2′-O-鼠李糖苷的平均回收率分别为98.5%、98.1%、99.1%和98.7%,相对标准偏差分别为0.8%、0.7%、0.8%和0.6%(n=5)。该方法分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高、重复性好,可用于楠竹叶成分的检测分析。