蓖麻蚕(Philosamia cynthiaricini)后丝腺体甘氨酸转移核糖核酸的全核苷酸顺序

按照Sanger等建立的前标记指纹图谱法,并采用稍加改进的电泳装置,测定了蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)后丝腺体甘氨酸转移核糖核酸(tRNA~(Gly))的全核苷酸顺序。它由74个核苷酸组成,反密码子为GCC。每分子tRNA~(Gly)含T、ψ、D和m~1A各一分子,3.2分子m~5C和约0.4分子Um。与家蚕(Bombyx mori)tRNA_1~(Gly)(反密码子为GCC)比较,蓖麻蚕tRNA~(Gly)仅在某些部位上修饰程度较低。除此以外,两者顺序非常相似。文中讨论了真核生物tRNA~(Gly)的结构特征和均一性。     

携带线粒体tRNA~(Thr) 15943T>C协同12S rRNA 1555A>G突变的非综合征性耳聋致病机理的初步研究

该研究通过构建携带线粒体tRNA~(Thr )15943TC协同12S rRNA 1555AG突变(双突变组)的永生化淋巴母细胞系,同时建立仅含12S rRNA 1555AG突变(单突变组)和正常对照组永生化淋巴母细胞系,探究线粒体tRNA~(Thr )15943TC协同12S rRNA 1555AG突变与耳聋发病的关系,以了解线粒体突变致聋的分子机制。对该家系的临床资料进行分析的结果表明,当包括使用氨基糖苷类抗生素(aminoglycoside antibiotic,AmAn)的药物性耳聋家系成员时,此家系耳聋外显率为26%;当排除用药的耳聋成员时,此家系耳聋外显率是10%;相比之下,已报道的14个m.1555AG的耳聋家系的平均外显率在用药和未用药的情况下分别仅为13%和6%。利用Northern blot和Western blot分别检测三组细胞中线粒体tRNA和多肽的表达量,结果表明相比于正常对照组,tRNA~(Thr)在双突变组中的表达量显著降低,而在单突变组中的表达量无显著变化,tRNA~(Trp)、tRNA~(Ala) 、tRNA~(Tyr) 、tRNA~(Cys)和tRNA~(Pro)的稳态水平在三组细胞中没有显著性差异;CO2、CO3和A6在双突变组中的表达量显著降低,而在单突变组中的表达量无显著性差异;其他蛋白多肽在三组细胞中的表达量没有显著差异,说明m.15943TC突变降低了tRNA~(Thr)的稳态水平,致使线粒体部分多肽表达水平下降,从而影响了线粒体呼吸链复合体的功能和稳定性进而导致了线粒体代谢障碍,提示线粒体tRNA~(Thr) 15943TC可能与m.1555AG突变引起的耳聋相关。     

蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricint)后丝腺体甘氨酸转移核糖核酸的全核苷酸顺序

按照Sanger等建立的前标记指纹图谱法,并采用稍加改进的电泳装置,测定了蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)后丝腺体甘氨酸转移核糖核酸(tRNA~(Gly))的全核苷酸顺序。它由74个核苷酸组成,反密码子为GCC。每分子tRNA~(Gly)含T、ψ、D和m~1A各一分子,3.2分子m~5C和约0.4分子Um。与家蚕(Bombyx mori)tRNA_1~(Gly)(反密码子为GCC)比较,蓖麻蚕tRNA~(Gly)仅在某些部位上修饰程度较低。除此以外,两者顺序非常相似。文中讨论了真核生物tRNA~(Gly)的结构特征和均一性。     

精胺对牛肝tRNA~(lle)氨基酰化的刺激作用

本实验用纯化的牛肝异亮氨酸tRNA(tRNA~(Ile))和异亮氨酰tRNA合成酶(IleRS),研究了精胺对Ile-tRNA复合物形成及IleRS活性的作用。结果表明:精胺能特异地促使牛肝tRNA~(Ile)氨基酰化反应;对IleRS活性无影响;能明显地增加形成Ile-tRNA复合物反应的Vmax和tRNA~(Ile)的Km值。     

大肠杆菌tRNASec关键核苷酸位点

在原核生物中,硒蛋白合成需要tRNA~(Sec) (SelC)与硒代半胱氨酸合成(Sec synthase, SelA)、硒代半胱氨酸特异性延伸因子(Sec-specificelongationfactor,SelB)之间相互作用。【目的】基于大肠杆菌掺硒机器,寻找tRNA~(Sec)骨架上关键核苷酸位点,为解决硒蛋白目前面临的掺硒效率较低、产量低的问题提供新思路。【方法】以大鼠细胞质型硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase1,TrxR1)为掺硒模式蛋白为定点突变tRNA~(Sec),转化至BL21 (DE3) gor-获得阳性重组菌株(携带pET-TRSter/pSUABC’),用于表达大鼠硒蛋白TrxR1,然后使用2￠,5￠ADP-Sepharose亲和层析和凝胶过滤两步法分离纯化TrxR1,最后利用经典硒依赖型DTNB还原反应测定TrxR1的酶活,分析关键核苷酸位点,评价掺硒效率。【结果】在存在SECIS元件的前提下,当SelA、SelB、tRNA~(Sec)共表达时,与野生型相比,携带突变型tRNA~(Sec)所共表达的TrxR1酶活力呈现不同程度的降低,其中E.colitRNA~(Sec)的G18、G19这两个位点的所有的TrxR1酶活远低于野生型(10%);然而,a26和b7的酶活相对较高。【结论】E. coli tRNA~(Sec)骨架上G18和G19位点对于维持tRNA稳定性和灵活性发挥了关键作用,位点突变引起tRNA结构变化会影响tRNA~(Sec)与掺硒元件的互作,因此有望通过改造tRNA核苷酸位点来提高硒蛋白的掺硒效率。     

鲤鱼线粒体tRNA~(Cys)基因和轻链复制起始区的结构分析

我们测定了鲤鱼线粒体半胱氮酸tRNA 基因和轻链(L 链)复制起始区的核苷酸序列,绘制了半胱氨酸tRNA 三叶草形的二级结构以及L 链复制区的茎环结构。通过五种脊椎动物tRNA~(cya)基因的核苷酸序列分析发现,鲤鱼线粒体tRNA~(cya)基因有许多不同于细胞质tRNA~(cya)基因的不寻常的结构特点。鲤鱼线粒体L 链复制起始区含有36个碱基,复制起始区茎环结构中的茎含有11对碱基,而环则是由14个碱基组成。同其它10种脊椎动物L-链复制起始区的核苷酸序列比较发现,鲤鱼茎环结构中的茎序列是非常保守的,而环的序列及环的长度则变化较大。茎环结构可能在轻链复制中起着重要的作用。     

中华蟾蜍肝苯丙氨酸tRNA的纯化及其生物活性

本文介绍一种改进的酚抽法制备蟾蜍肝总tRNA和BD纤维素柱纯化tRNA~(pbe)的简便方法。270g蟾蜍肝可制备466mg总tRNA。总tRNA的产率是未改进的酚抽法的8—11倍。总tRNA经两根BD纤维素柱纯化所得tRNA~(pbe)的酰化活力达1,354pmoles苯丙氨酸/A_(260)tRNA,它的荧光光谱测定表明,这个tRNA分子存在Y碱基。     

线粒体tRNALeu(UUR)基因A3243G突变型糖尿病患者的家系分析及随访

目的:探讨线粒体糖尿病家系中的基因突变位点及临床转归。方法:收集1例线粒体糖尿病患者家系的临床资料,采用PCR、DNA直接测序法对家系成员进行线粒体基因突变高发区域t RNA~(Leu(UUR))检测,以了解mtDNA3243位点突变情况,并随访8年进一步了解研究对象的临床转归情况及胰岛功能变化。结果:6例家系成员中有5例携带mtDNA3243A→G位点的突变,其中4例为糖尿病患者且伴发不同程度的双侧听力受损(神经性耳聋),1例父系患者后代未检测出突变位点。随访过程中,先证者死亡,余3例糖尿病患者除常规治疗外,长期口服辅酶Q10,血糖控制较为稳定、尚未出现严重并发症但双侧听力严重下降,胰岛分泌功能明显下降,1例携带者已出现糖耐量受损。结论:线粒体tRNA~(Leu(UUR))点突变与糖尿病具有显著相关性。     

酵母tRNA~(Ala)3'端第四个核苷酸在tRNA-氨酰基tRNA合成酶识别中的作用

用逐步高碘酸氧化法除去酵母tRNA~(Ala) 3'端的pACCA;最终产物用tRNA_O~(Ala)表示;用T_4 RNA连接酶使tRNA_C~(Ala)接上pAp、pGp、pCp、pCCCA和pUCCA;经磷酸单酯酶处理、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,测得tRNA_(CA)~(Ala)、tRNA_(CG)~(Ala)、tRNA_(CC)~(Ala)、tRNA_(CCCCA)~(Ala)和tRNA_(CUCCA)~(Ala)接受丙氨酸的活力,分别是80%、36%、12%、6%和8.8%(以tRNA~(Ala)的活力为100%计)。tRNA_(CA)~(Ala)、tRNA_(CG)~(Ala)和tRNA_(CC)~(Ala)首先被混合氨酰基tRNA合成酶制剂中的转核苷酸酶,在CTP和ATP存在的情况下,加上了CCA末端。实验证明,酵母tRNA~(Ala)3'端第四个核苷酸对于合成酶-tRNA的识别是重要的,但又非绝对必需的。     

酵母tRNA~(Ala)3’端第四个核苷酸在tRNA-氨酰基tRNA合成酶识别中的作用

用逐步高碘酸氧化法除去酵母tRNA~(Ala)3′端的pACCA;最终产物用tRNA_O~(Ala)表示;用T_4RNA连接酶使tRNA_O~(Ala)接上pAp、pGp、pCp、pCCCA和pUCCA;经磷酸单酯酶处理、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,测得tRNA_(OA)~(Ala)、tRNA_(CG)~(Ala)、tRNA_(CO)~(Ala)、tRNA_(CCCCA)~(Ala)和tRNA_(CUCCA)~(Ala)接受丙氨酸的活力,分别是80%、36%、12%、6%和8.8%(以tRNA~(Ala)的活力为100%计)。tRNA_(CA)~(Ala)、tRNA_(CG)~(Ala)和tRNA_(CC)~(Ala)首先被混合氨酸基tRNA合成酰制剂中的转核苷酸酶,在CTP和ATP存在的情况下,加上了CCA末端。实验证明,酵母tRNA~(Ala)3′端第四个核苷酸对于合成酶-tRNA的识别是重要的,但又非绝对必需的。     

油菜叶绿体16S rRNA基因前导顺序的一级结构

质粒pBN119的3.2kb BamHI片段的PvuⅡ-BglⅡ片段全顺序长为840bp,其中含油菜叶绿体16S rRNA基因5′端的140bp。通过寻找GTTC顺序,发现在395至468位核苷酸之间是tRNA~(Val)基因;在73至118位核苷酸之间是一个蛋白阅读框。和已发表的玉米叶绿体16S rRNA前导顺序进行比较,同样存在三个相应的大肠杆菌RNA聚合酶的结合位点。和大肠杆菌的启动子及相应基因作比较,表明叶绿体基因组具有很明显的原核性,但其tRNA~(Val)基因没有CCA3′顺序。在16S rRNA基因、tRNA~(Val)基因及蛋白阅读框的5′端附近均能找到一个比较稳定的茎环结构。我们推测这些茎环结构可能和位于反问重复顺序上的某些基因的转录调节有关。     

小角中子散射研究铯对溶液中tRNA~(Phe)构象的影响

用小角中子散射技术研究生物大分子的构象,图样清晰,可同时获得结构参数和热力学参数。 tRNA~(phe)在pH7.0的CsCl-TMA溶液中会形成Cs-tRNA~(phe),由于溶液中的电荷颗粒的作用使tRNA~(phe)的构象可能发生变化,本文研究不同浓度CsCl-TMA溶液中Cs对tRNA~(phe)在溶液中构象有无变化。 制备各浓度的CsCl-TMA—D_2O-tRNA~(phe)和以H_2O代D_2O的上述溶液样品。在小角中子散射装置D_(11)上测定Cs-tRNA~(qhe)的结构参数和热力学参数。 实验结果是不同浓度的CsCl-TMA-D_2O溶液中的Cs-tRNA~(phe)迥旋半径Rg的数值无大变化,中子散射密度增量(ds/dc)~2即I(o)/C的数值大致相同,颗粒的微分体积V_2值随盐浓度增加稍有加大,体积参数φ(?)的绝对值随盐浓度稍加.从以上结构参数Rg和热力学参数dρ/dc,V_2和φ′s等值分析发现Cs-tRNA~(phe)在Cs的作用下在溶液中构象无大变化。##原图像不清晰     

链霉菌调控因子bldA的作用机制研究进展

链霉菌是一类具有特殊的形态分化和次生代谢的放线菌。bldA编码链霉菌中唯一能有效识别亮氨酸密码子UUA的tRNA~(Leu),是链霉菌次生代谢途径的必需基因,目前对于其全局调控功能已有详细报道。bldA突变或缺失会导致链霉菌不能完成气生菌丝分化和抗生素合成,这种调控主要是在翻译水平上完成。UUA密码子缺少有效的tRNA翻译,导致mRNA翻译受影响。bldA自身也受到其下游靶基因的负反馈调控。此外,bldA还有很多尚不明确的调控机制,回答这些问题能帮助我们更好地理解抗生素合成途径,为构建有应用前景的菌株奠定理论基础。     

Isolation and Purification of Carp Mitochondrial DNA and Structural Analysis of Its tRNA~(Cys) Gene and the Light Strand Origin

A new method is presented with which we isolated milochondrial DNA from fresh carp liver usingdifferential centrifugation and DNase treatment that gave high yield of purified product with an easyand economical procedure. Highly distinct bands were displayed in agarose gel electrophoresls ofthe product digested with restrictlon enzymes, which were successfully used in constructingrestriction map and molecular clone of mitochondrial genes. With DNAs thus obtained, we havecloned cysteine tRNA gene (tRNA~(Cys) gene) of carp mitochondria, determined the nucleotide sequenceof it and the light strand origin, and depicted the cloverleaf secondary structure of tDNA~(Cya) and thelight strand origin. Analysis of nucleotide sequences of tRNA~(Cy) genes of 5 vertebrates has revealedunusual features of carp mitochondrial tRNA~(Cy) gene as compared with their cytoplasmic counter-parts, Altogether 36 bases were found in the light strand origin of carp mitochondriaf: 11 pairs in thestem; and 14 bases in the loop. As compared with those of other 11 vertebrate species, the sequenceof the stem is very conservative while both sequence and length of the loop are quite variable. Thestructure of the stem-loop may play an important role in light strand replication.     

Leu1p参与调节V-ATP酶的活性

RAVE(regulator of the H+-ATPase of the vacuolar and endosomal membrane)由Rav1p、Rav2p和Skp1p3个亚基组成,是V-ATP酶活性调节机制中一个关键的多亚基复合物调节因子;Leu1p能够与RAVE相互作用。通过融合PCR、同源重组分别构建了酿酒酵母BY4742的Rav1、Rav2、Leu1和Vma2缺陷型菌株。进一步研究重组菌株对p H及Ca Cl2的耐受能力发现:Leu1缺陷型菌株(3-异丙基苹果酸异构酶(Leu1p)缺失)的生长状况与Rav1、Rav2缺陷型菌株的生长状况基本一致,表明RAVE对V-ATP酶的活性调节极有可能需要通过与Leu1p结合才能实现。笔者所在实验室为进一步研究RAVE与Leu1p的相互关系及其对V-ATP酶的活性调节提供了重要依据。     

鲤鱼线粒体tRNA~(phe)基因结构的特异性

鲤鱼线粒体tRNA~(phe)基因的核酸序列已被测定。在鲸、人、爪蟾、牛、小鼠、鸡和鲤鱼中对此基因序列比较发现在D茎存在一个奇怪的保守结构,然而D茎在其余种类的已经测定的脊椎动物线粒体tRNA基因和细胞质tRNA基因中是极不保守的。这一保守结构包含有13bp碱基,我们将此保守区前7个碱基与真核生物RNA PolⅢ识别的A区相比较,发现在此不同物种的两种序列存在部分的同源性。考虑到tRNA~(phe)基因在线粒体基因组上位于置换环区和线粒体rRNA基因编码区之间这一特殊区域内,我们推测这一奇怪的保守结构可能存在其它更为有意义的功能。     

诱导型一氧化氮合酶基因多态性与2型糖尿病关系研究

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因Ser608Leu位点基因多态性与2型糖尿病的相关性。方法:采用测序法测定261例2型糖尿病患者和128例正常对照者iNOS基因Ser608Leu位点基因多态性。结果:两组间iNOS基因Ser608Leu位点基因型及等位基因频率构成存在差异。结论:iNOS基因Ser608Leu位点多态性与2型糖尿病有关。     

中华绒螯蟹幼蟹对亮氨酸和异亮氨酸的需要量

以初始体重为(0.900.02) g的中华绒螯蟹幼蟹为试验对象, 采用酪蛋白、明胶、进口鱼粉和晶体氨基酸为蛋白源, 配制成12组试验饲料, 研究中华绒螯蟹幼蟹对亮氨酸(Leu)和异亮氨酸(Ile)的需要量。饲料中Leu水平为0.87%、1.26%、1.64%、2.03%、2.39%和2.81% (分别记为Leu-1Leu-6组), Ile水平为0.69%、1.21%、1.70%、2.19%、2.70%和3.21% (分别记为Ile-1Ile-6组)。试验周期为60d。结果表明: (1)饲料中Leu含量为2.39%时, 幼蟹特定生长率和全蟹粗蛋白含量达到最大值, 而各组之间的成活率和全蟹水分、粗脂肪以及灰分无显著差异(P 0.05)。当饲料Leu含量大于2.39%时, 河蟹肌肉Leu含量、肌肉必需氨基酸总量和肌肉氨基酸总量均显著高于其他各试验组(P 0.05)。(2)饲料中Ile含量为2.19%时, 幼蟹特定生长率和全蟹粗蛋白含量达到最大值, 而各试验组之间的成活率和全蟹水分、粗脂肪以及灰分差异不显著(P 0.05)。河蟹肌肉Ile含量、必需氨基酸总量和氨基酸总量随饲料中Ile含量增加呈先升高后降低的趋势, 最大值均出现在Ile-5组(2.70% Ile), 但Ile-4组(2.19% Ile)与Ile-5组差异不显著(P 0.05)。根据特定生长率与饲料Leu或Ile水平的折线模型, 确定中华绒螯蟹幼蟹饲料亮氨酸和异亮氨酸的适宜需要量分别为饲料干物质的2.36%和2.25%, 即饲料蛋白的5.88%和5.72%。       

DL-α-白氨酸与稀土硝酸盐固体配合物的合成及性质

用白氨酸分别和三种稀土硝酸盐在有机溶剂中首次合成了三种相应的1:2型固体配合物,经化学分析和元素分析确定了其组成为RE(Leu)_2(NO_3)_3·2H_2O(RE=Ce,Nd,Sm;Leu=DL-α-Leucine)。并通过X—粉晶衍射、红外光谱、TG—DTG和电导等对其性质进行了讨论。