三种沼虾的COI基因序列变异及其分类地位探讨(英文)

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和日本沼虾(M.nipponense)经在我国得到广泛的养殖,产生巨大的经济效益.祁连沼虾(M. qilianensis)是自然分布在我国甘肃省的土著虾种,因其外部形态符合沼虾属的特征,而被前人归入沼虾属.为了从分子生物学的角度理解罗氏沼虾、日本沼虾与祁连沼虾的遗传差异,为合理开发和利用沼虾资源提供理论基础,作者对这3种沼虾的线粒体COI基因序列进行研究.从甘肃、浙江等地分别采集这三种沼虾的样本各10尾,共30尾,其中祁连沼虾是野生样本,而罗氏沼虾和日本沼虾都是养殖样本.通过PCR方法扩增线粒体COI基因,并测序.通过比对,获得一致序列649 bp.在30个样本中共检测到169个变异位点,占总变异的26.04%;共检测到7种单倍型.3种沼虾的核苷酸多态性分别为:罗氏沼虾0.411%、日本沼虾0.092%、祁连沼虾0.031%.野生的祁连沼虾遗传多样性远远低于养殖的罗氏沼虾和日本沼虾.三种沼虾单倍型之间的Kimura双参数遗传距离在19.87%～23.84%,三者之间的遗传距离较大,提示三者均为有效种.为进一步确定这三种沼虾在长臂虾科的分类地位, 我们从NCBI数据库中下载了长臂虾科的其它种类的COI序列进行系统发生分析.用NJ法构建的分子系统树显示:日本沼虾和罗氏沼虾与沼虾属的其它种类聚成一枝,而祁连沼虾与同亚科的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)和长角长臂虾(Palaemon debilis)较沼虾属另10种虾的遗传距离近,即祁连沼虾与白虾属及长臂虾属聚成另一枝.凶此,COI序列的结果不支持祁连沼虾归入沼虾属.但其分类地位应该综合多方面证据重新进行分析确定.     

三种沼虾的COI基因序列变异及其分类地位探讨

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和日本沼虾(M. nipponense)已经在我国得到广泛的养殖,产生巨大的经济效益。祁连沼虾（M. qilianensis）是自然分布在我国甘肃省的土著虾种,因其外部形态符合沼虾属的特征,而被前人归入沼虾属。为了从分子生物学的角度理解罗氏沼虾、日本沼虾与祁连沼虾的遗传差异,为合理开发和利用沼虾资源提供理论基础,作者对这3种沼虾的线粒体COI基因序列进行研究。从甘肃、浙江等地分别采集这三种沼虾的样本各10尾,共30尾,其中祁连沼虾是野生样本,而罗氏沼虾和日本沼虾都是养殖样本。通过PCR方法扩增线粒体COI基因,并测序。通过比对,获得一致序列649 bp。在30个样本中共检测到169个变异位点,占总变异的26.04%;共检测到7种单倍型。 3种沼虾的核苷酸多态性分别为：罗氏沼虾0.411%、日本沼虾0.092%、祁连沼虾0.031%。野生的祁连沼虾遗传多样性远远低于养殖的罗氏沼虾和日本沼虾。三种沼虾单倍型之间的Kimura双参数遗传距离在19.87%~23.84%,三者之间的遗传距离较大,提示三者均为有效种。为进一步确定这三种沼虾在长臂虾科的分类地位, 我们从NCBI数据库中下载了长臂虾科的其它种类的COI序列进行系统发生分析。用NJ法构建的分子系统树显示：日本沼虾和罗氏沼虾与沼虾属的其它种类聚成一枝,而祁连沼虾与同亚科的脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）和长角长臂虾（Palaemon debilis）较沼虾属另10种虾的遗传距离近,即祁连沼虾与白虾属及长臂虾属聚成另一枝。因此,COI序列的结果不支持祁连沼虾归入沼虾属。但其分类地位应该综合多方面证据重新进行分析确定。     

脊尾白虾繁殖生物学的初步观察

脊尾白虾Palaemon(Exopalaemon)carinicauda(白虾、青虾、晃虾、绒虾)在分类上属节肢动物门甲壳纲十足目游泳亚目真虾族长臂虾科长臂虾属白虾亚属,它生活于泥沙底之近岸浅海或河口附近。在我国沿海均有分布,其中北方沿海产量甚大,其产量仅次于中国毛虾、对虾     

罗氏沼虾池塘养殖技术

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)又名马来西亚大虾,隶属沼虾属,长臂虾科,十足目,甲壳纲,原产于印度、太平洋热带和南亚热带地区,具有生长快、个体大、易养殖、营养丰富、经济价值高等优点。四川省自然资源研究所与美国海星国际公司、广汉市水产站1989年共同开发罗氏沼虾获得初步成功,大面积养殖平均亩产达100kg左右,最高达亩产150kg。本文就罗氏沼虾池塘养殖技术作简要介绍。     

中国沼虾属的初步研究

我国淡水虾类资源丰富,种类繁多。长臂虾科Palaemonidae长臂虾亚科Palaemoninae中的沼虾属Macrobrachium是我国淡水中主要经济虾类的重要成员之一,也是一个种类分化复杂的类群,广泛分布于各种类型的水域中。我国喻兆琦(1931,1939)、刘瑞玉(1955,1957)、粱象秋(1980,1981)、张建森(1962,1978)等曾发表一些有关沼虾的研究报告。国外如Holthuis(1950)对印度-西太平洋区的长臂虾亚科进行了全面的修订总结。五十年代后,不少作者如Riek(1951),Johnson(1962,1963),Holthuis(1965),Yu     

青虾生长性状相关的微卫星标记筛选

青虾,学名日本沼虾(Macrobrachium nipponense),又称河虾.属于甲客纲(Crustacea),十足目(Decapoda),长臂虾科(Palaemonidae),沼虾属(Macrobrachium)[1].具有适应性强、分布广、食性杂、生长快、养殖经济效益高等特点,是我国淡水虾类的一个重要养殖品种[2].也是主要淡水名特优养殖品种之一.目前,我国养殖青虾出现了个体小型化、性早熟以及生长速率慢等种质退化现象,极大地影响了日本沼虾养殖业的效益,迫切需要对其进行遗传改良[3,4].     

长臂虾亚科的新种和新记录(甲壳纲:十足目)

最近,我们在整理长臂虾亚科的标本时,发现沼虾属2新种和拟瘦虾属一新记录——谭氏拟瘦虾 Lcandrites deschampsi (Nobili),拟瘦虾属的成员也是首次发现于中国。现记述如下。 额角发达,上下缘均具齿,在上缘齿间具一单行毛,下缘具一双行毛,覆盖在下缘的两边。头胸甲具触角刺和鳃甲刺。鳃甲刺后移,远离头胸甲的前缘,没有鳃甲沟。大颚无     

两种沼虾溶菌酶基因ORF的克隆和罗氏沼虾溶菌酶基因的组织表达(英文)

分别提取罗氏沼虾和日本沼虾血细胞总RNA,RT-PCR扩增获得特异性cDNA片段,纯化后克隆到T载体上。序列测定表明所克隆的两种沼虾溶菌酶基因的开放阅读框(ORF)为477bp,共编码158个氨基酸,包括溶菌酶成熟肽140个氨基酸残基和信号肽18个氨基酸残基。同源性分析表明,罗氏沼虾和日本沼虾溶菌酶基因的碱基序列及推测氨基酸序列高度同源,分别为99.4%和98.1%。两种沼虾溶菌酶基因的碱基序列和推测氨基酸序列与Gen-Bank上其他对虾溶菌酶的同源性达83.0%和80.0%以上。两种沼虾溶菌酶都具有c-型溶菌酶典型的两个酶活性位点(Glu51)和(Asp68),以及8个保守结构氨基酸残基Cys,且在101、106和107位上缺少Asp,因而推测本实验所克隆的两种沼虾溶菌酶基因属c-型溶菌酶基因的非钙结合亚型。以PCR法制备罗氏沼虾溶菌酶基因的生物素标记探针,斑点杂交检测感染弧菌后溶菌酶基因mRNA在各组织中的转录水平,结果表明受感染6h后在眼、肌肉、鳃、肝胰腺、肠管中的表达量均有升高,其中在肝胰腺中的表达量最高,约为对照组的560%。在不同感染时间里,肝胰腺中该基因表达量有较大的变化:感染后3h表达量最低,24h后表达量升至最高,大约为对照组的430%,48h时的表达量又有所下降,但仍明显高于对照组(约为330%)。受弧菌感染后罗氏沼虾溶菌酶基因转录的上调证明溶菌酶基因在非特异性免疫中的直接作用,同时表明肝胰腺可能在沼虾的免疫防御过程起重要作用。       

白洋淀的青虾

白洋淀的虾类有4种:(1)中华新米虾Neocarid-ina denticulata sinensis(Kemp),为一种淡水小型虾,生活于水草间,产量颇大,俗称草虾或火虾;(2)秀丽长臂虾 Palaemon(Exopalaemon)modestus(Heller),俗称白虾,生活于淀内河道中,产量亦多;(3)中华小长臂虾Palaemonetes sinensis Sollaud,俗称花腰虾,为小     

凌云沼虾(Macrobrachium lingyunense)

凌云沼虾(Macrobrachium lingyunense u,Cai & Clarke 2006)(封面图片)是一种典型的洞穴沼虾.眼睛极度退化,步足等外部形态特征及其他生物学特性也显示出真洞穴生物(troglobiont)的特征,包括缺乏体色素、附肢延长、繁殖无季节性、耗氧量降低、新陈代谢缓慢等.     

扁担塘虾类群落组成、空间分布和生物量估算

2002年秋季,利用“蹦网”(Popnet)采样,调查了扁担塘的虾类组成、空间分布和生物量,以期为虾类资源的合理开发利用提供科学依据。采集样点31个,共采集到虾类44287尾,由6种组成,其中长臂虾科4种,匙指虾科2种。优势种是细足米虾(CaridinaniloticgracilipesdeMan)、日本沼虾(MacrobrachiumnipponensedeHaan)和中华新米虾(NeocaridinadenticulatesinensisKubo),它们占采样总数量的99.3%。根据水深特征将扁担塘划分为浅水区(1.5m);根据水生植被的分布格局将全湖划分四种生境类型:苦草生境、聚草生境、金鱼藻生境和裸地生境。协方差分析的结果表明:水深类型对虾类的分布没有显著影响,生境类型是决定虾类密度分布的主要因素。整个湖区虾类密度为83.36ind/m2,生物量为3.97g/m2。其中细足米虾的密度和生物量分别为64.69ind/m2,1.53g/m2;日本沼虾为8.99ind/m2,2.09g/m2;中华新米虾为8.61ind/m2,0.22g/m2。       

饵料淀粉水平对饥饿后日本沼虾生长代谢的影响

研究了饵料淀粉水平对饥饿后日本沼虾生长代谢的影响,探讨营养水平对日本沼虾补偿生长的作用.结果表明,在4 d饥饿后,饵料中20%、25%的淀粉水平能使日本沼虾达到完全补偿生长,机体代谢率高于对照组,而8 d的饥饿处理,各组日本沼虾的生长代谢均低于对照组,说明饥饿时间及恢复投喂后饵料淀粉水平对日本沼虾补偿生长有一定的影响.     

日本沼虾三群体线粒体16S rRNA基因片段序列的差异与系统进化

通过对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)3个群体线粒体DNA 16S rRNA基因片段进行扩增和测定,得到长度为495bp的片段,其碱基A、T、G和C的平均含量分别为28.6%、36.1%、22.7%和12.5%,AT含量明显高于GC含量。通过对日本沼虾16SrRNA基因片段遗传特征的研究发现其种内变异很小,在3个群体中只有5个位点发生转换。另外,利用其454bp的同源序列,以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为外群探讨了沼虾属日本沼虾、罗氏沼虾(M.rosenbergii)等8种沼虾的系统进化关系。用MEGA3.1软件中的NJ法构建的分子进化树,日本沼虾3个群体先聚在一起后与海南沼虾聚在一起;另外,罗氏沼虾与马氏沼虾、短腕沼虾与贪食沼虾亲缘关系较近先聚在一起,然后再与大臂沼虾和等齿沼虾聚在一起,最后才与外群中国明对虾聚在一起。     

三丁基锡(TBT)对罗氏沼虾的毒性效应

将罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)幼虾和成虾暴露在不同浓度的三丁基锡(tributyhin,TBT)溶液中,进行急性和慢性毒性实验,通过组织病理学观察研究TBT对罗氏沼虾的毒性效应。结果表明:TBT对罗氏沼虾幼虾和成虾的96h半致死浓度(96h LC50)分别为51和376μg.L-1,安全浓度(SC)分别为5.1和37.6μg.L-1;罗氏沼虾幼虾暴露在浓度分别为1.25、2.5和5μg.L-1的TBT溶液中30d后,其体重和体长均极显著低于对照组(P<0.05);罗氏沼虾成虾暴露在浓度分别为2、8和32μg.L-1的TBT溶液中30d后,生长速度虽未见明显差异,但鳃和肝胰脏组织结构均出现异常;TBT浓度高于8μg.L-1时,处理组鳃上皮细胞肿胀,支持细胞中的细胞核萎缩,鳃血窦中血细胞聚集,肝胰脏细胞肿大,出现空泡化,细胞中出现细小颗粒;TBT浓度达32μg.L-1时,罗氏沼虾肝胰脏细胞空泡化程度严重,细胞核消失,部分细胞解体并出现坏死区;表明一定剂量的TBT对罗氏沼虾的鳃和肝胰脏有明显的毒性效应。     

安徽沼虾属一新种记述：（十足目：长臂虾科）

本文记述安徽西部沼虾属一新种梅山沼虾,新种Macrobrachium meishanense sp.nov.本新种与近似种江西沼虾M.jiangxiense Liang et Yan 1985之不同在于:新种额角较短,伸至鳞末或近鳞末;尾节末端有羽状刚毛2—4对;第二触角鳞片较宽短,长为宽的2.8—3.2倍;第二步足指节表面和切缘覆盖密毛,掌部和腕节满布小刺,腕节明显短于螯长,座节短于或等于长节等。模式标本存安徽师范大学生物系。     

对虾白斑综合征杆状病毒体内增殖模型的建立

应用对虾白斑综合征杆状病毒(WSSV),对淡水克氏螯虾、罗氏沼虾、日本沼虾和两种淡水蟹(中华绒螯蟹、长江华溪蟹)进行人工感染实验.结果除淡水克氏螯虾之外,其它受试的虾蟹均不能感染WSSV.克氏螯虾3个不同剂量组感染至12 d,平均死亡率为94%.从发病或死亡个体采集血淋巴,经电镜负染色可观察到完整的病毒粒子,其形态大小、靶细胞组织病理均与从中国对虾中分离的WSSV相似或相同.同时,通过原位杂交技术进一步证明该实验的可靠性.克氏螯虾重复感染效果良好,有可能成为研究WSSV的一种理想的病毒体内增殖模型.     

饥饿对日本沼虾摄食节律的影响

本文研究了不同饥饿时间对开本沼虾Macrobrachium nipponense摄食节律的影响.结果表明,饥饿后恢复投饵初始日本沼虾表现出强烈的摄食,摄食节律为单峰型,随着时间的延长,多峰型摄食节律出现.饥饿4 d的日本沼虾在饥饿过程中并未出现饥饿死亡现象,恢复投喂后在较短时间内(5 d)即可恢复正常的摄食节律.饥饿8 d组在饥饿的第6～8 d便可明显观察到虾体色异常并有部分死亡,说明饥饿8 d已经影响到了日本沼虾的存活.饥饿8 d组日本沼虾摄食高峰的变化无明显规律,恢复到正常摄食节律需要较长时间.     

鄱阳湖日本沼虾15个群体遗传多样性的微卫星分析

利用徽卫星分子标记研究鄱阳湖15个日本沼虾(Macrobrachium nipponense野生群体的遗传多样性.结果表明:10个微卫星位点呈高度多态性,共检测到129个多态性位点;每个群体中至少有5个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡,表现出杂合不足;15个日本沼虾群体均表现出较高的遗传多样性,其中大坝外群体和星池群体遗传多样性较高,万户和湖口群体相对较低.瓶颈效应和突变-漂移平衡分析表明,鄱阳湖日本沼虾群体近期没有经历过瓶颈效应,群体数量也没有下降.群体间F统计量及AMOVA分析显示,鄱阳湖日本沼虾群体存在极显著的遗传分化程度(FST=0.04709,P＜O.01).综上所述,鄱阳湖日本沼虾群体具有丰富的遗传多样性,可作为日本沼虾选育的基础群.     

不同途径感染白斑综合征病毒 (WSSV) 对日本沼虾的致病性

日本沼虾肉质鲜美、经济价值高,但其对白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的易感性尚不明确。采用流行病学调查、感染试验和荧光定量PCR(qPCR)等方法,研究了日本沼虾Macrobrachium nipponense对WSSV的易感性、感染发病率以及WSSV在其体内的增殖情况。结果表明:日本沼虾是WSSV的自然宿主,上海市附近省份地区120个样本的自然携带率为8.33%。日本沼虾可以通过注射、摄食、浸泡途径感染WSSV,10 d内累计感染率均为100%,累计死亡率分别为100%、75%和0%。其中注射途径感染日本沼虾,感染后5 d肌肉病毒含量达到感染后1 d的1 000倍,8 d死亡率达100%。用注射WSSV感染日本沼虾死亡率来测量病毒致死日本沼虾的半数致死剂量(LD_(50)),2.71×10~5病毒粒子/μL能使日本沼虾死亡率达到50%以上。在养殖生产中,日本沼虾可以通过摄食感染WSSV的病虾或死虾而感染WSSV,也能通过浸泡在含WSSV的水体中而感染,并因此成为一种传播媒介,从而影响了WSSV的迅速传播与致病。     

壬基酚和雌二醇干扰罗氏沼虾卵黄蛋白原VTG基因表达的效应

对刚孵化后的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)亲虾用高低两个浓度的壬基酚(nonylphenol,NP,100μg/L和0·01μg/L)和雌二醇(estradiol,E2,1μg/L和0·01μg/L)进行浸泡处理,分别于3d和5d对罗氏沼虾肝胰腺和卵巢中卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)基因表达变化进行半定量分析。结果显示,NP和E2能够提高罗氏沼虾肝胰腺和卵巢中卵黄蛋白原VTG基因的表达。100μg/LNP对罗氏沼虾表现出雌激素效应,0·01μg/LNP作用效果不明显;而E2则在1μg/L和0·01μg/L两个浓度下均对罗氏沼虾有较强的雌激素效应。在100μg/LNP作用下,卵巢VTG表达量3d和5d均保持较高水平,无明显下降,其他实验组均是3dVTG基因表达量升高,5d后表达量较3d表达量有所降低。结果表明,与其他动物一样,NP对罗氏沼虾具有内分泌干扰作用。