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农杆菌介导南瓜遗传转化体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
以南瓜金辉一号(Cucurbita moschata ‘Jinhui 1’)为实验材料, 利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化南瓜子叶节, 研究了预培养时间、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间, 抗生素羧苄青霉素(Carb)、头孢霉素(Cef)以及筛选剂卡那霉素(Kan)等因素对离体不定芽的影响, 建立了南瓜最适遗传转化体系。结果表明: 外植体预培养0天,侵染时间30分钟, AS浓度为100 mg·L–1, 共培养5天可获得最高遗传转化效率; 最适除菌剂为Cef, 其最适浓度为500mg·L–1; 最适Kan筛选浓度为100 mg·L–1; 在MS培养基上培养抗性芽生根, 经PCR和Southern blot检测, 证明为转基因植株。 相似文献
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以南瓜金辉一号(Cucurbita moschata' Jinhui1')为实验材料,利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化南瓜子叶节,研究了预培养时间、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间,抗生素羧苄青霉素(Carb)、头孢霉素(Cef)以及筛选剂卡那霉素(Kan)等因素对离体不定芽的影响,建立了南瓜最适遗传转化体系。结果表明:外植体预培养0天,侵染时间30分钟,AS浓度为100mg·L^-1,共培养5天可获得最高遗传转化效率;最适除菌剂为Cef,其最适浓度为500mg·L^-1;最适Kan筛选浓度为100mg·L^-1;在MS培养基上培养抗性芽生根,经PCR和Southern blot检测,证明为转基因植株。 相似文献
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赭曲霉在工业上用于甾体C-11α羟基化。为了对现有赭曲霉生产菌株进行遗传改造,以农杆菌LBA4404作为侵染菌株,以赭曲霉(TCCC41060)作为受体菌株,以潮霉素B基因作为筛选标记,成功建立了根癌农杆菌介导的赭曲霉遗传转化体系并对其转化效率的主要影响因素,如农杆菌浓度、孢子浓度、共培养时间和温度等进行了分析。在最佳条件下,转化效率可以达到57个转化子/108个分生孢子。随机挑选的8个阳性转化子10代连续培养结果表明所获得的转化子能稳定遗传。该遗传转化体系的建立为赭曲霉菌株的定向遗传改造提供了重要的操作平台。 相似文献
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根癌农杆菌介导的大豆遗传转化 总被引:6,自引:1,他引:6
农杆菌介导法是大豆遗传转化的重要方法之一 ,许多实验室应用该方法得到了转基因大豆 ,但目前使用该方法进行转化的效率还比较低 ,尚需深入研究。农杆菌菌株、大豆基因型、组织培养条件、T-DNA的转移效率和转化后的筛选模式都会影响大豆转化的效率。概述了近年来根癌农杆菌介导的大豆遗传转化的一些重要成果 ,以及转化过程中大豆的易感性与农杆菌的转化能力、乙酰丁香酮促进vir基因活化、转化的受体系统和巯基混合物减轻受体材料的褐化、提高T DNA的转移效率等几个重要因素的研究进展 ,并介绍了转化中常用的几个筛选标记基因 (nptⅡ、hpt、bar基因和突变的ahas基因 )及通过共转化法去除标记基因的方法 ,同时对今后研究的重点进行了讨论. 相似文献
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根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展 总被引:20,自引:0,他引:20
根癌农杆菌介导的真菌遗传转化是近年来发展的一种新方法 ,与其它方法相比 ,该方法具有操作简便、转化效率高和易得到稳定转化子等特点。目前 ,在根癌农杆菌介导下已实现了多个属种真菌的遗传转化 ,显示出良好的应用前景。综述了根癌农杆菌介导真菌遗传转化的转化机理和T DNA在真菌细胞中的存在方式等方面的研究结果 ,并展望这一方法的应用前景。 相似文献
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本文就农杆菌介导的玉米遗传转化的技术要点及原理等进行了综述,并对各种影响农杆菌转化玉米效率的关键因子包括农杆菌的菌株与载体、标记基因、受体材料的基因型、来源和发育状态以及组织培养的条件等进行了讨论。 相似文献
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The susceptibility of different Populus euramericana (Neva, PE68-022 x P. nigra, 71-060 x P. nigra) and P. deltoides (PE68-022 x P. deltoides) clones to wild-type Agrobacterium tumefaciens strains (A281 and 82.139) was evaluated in an inoculation experiment, and differences in the frequency of tumor formation (0-48) were found. Co-cultivation experiments demonstrated high transformation ability of oncogenic binary A. tumefaciens strains as compared to disarmed strains. Using oncogenic binary strains, transgenic calluses were obtained from all tested clones. The presence of acetosyringone did not influence the transformation frequency of the disarmed strains. Co-inoculation experiments were performed using leaf discs and a bacterial suspension containing both wild-type and disarmed strains. No positive effects on transformation efficiency were noticed in these conditions either. The transformation of tumors and kanamycin resistant calluses was confirmed by DNA analysis. 相似文献
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农杆菌介导SsNHX基因转化中林美荷杨的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
方法:以中林美荷杨组培苗的茎段为转化受体,利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将盐地碱蓬(Suaedaheteroptera)的Na /H 反向运输体基因SsNHX导入中林美荷杨组培苗中,实验过程中对影响遗传转化的一些关键因素进行了筛选研究。结果:最佳浸染条件为茎段外植体预培养1d,菌液浓度OD6000.3,浸染时间15-30min,共培养时添加AS 200μmol/L。经过抗性植株的PCR检测证明外源基因SsNHX已整合到中林美荷杨基因组中,获得了抗卡那霉素的再生植株及PCR阳性植株。结论:初步建立了中林美荷杨的遗传转化体系,为其遗传转化培育出抗盐碱的转基因植株奠定了理论基础。 相似文献
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Two clones of Populus nigra L. were tested in vivo and in vitro for their susceptibility to three different Agrobacterium tumefaciens wild-type strains evaluating number and size of resulting calluses. Strain C58 proved to be the most virulent.Various parameters affecting Agrobacterium-mediated transformation of P. nigra clones were further analyzed using ß-glucuronidase gene transient expression. The clone Jean Pourtet proved to be more susceptible than the clone San Giorgio. A. tumefaciens strain A281 pKIWI105 proved to be the most virulent. The optimal procedure involved dipping of leaf discs into a bacterial suspension (7×108 cells/ml) for 20 min, followed by a 48 h co-cultivation period on semi-solid regeneration medium.Leaf explants were co-cultivated with two disarmed A. tumefaciens strains. Plantlets of San Giorgio were regenerated, tested for ß-glucuronidase activity and rooted on selective medium containing kanamycin. Polymerase chain reaction analysis and Southern blot hybridization confirmed the integration of the neomycin phosphotransferase II gene into the poplar genome.Abbreviations BAP
6-benzyl-aminopurine
- CaMV
Cauliflower Mosaic Virus
- 2,4-D
2,4-dichlorophenoxyacetic acid
- GUS and gus
ß-glucuronidase
- hpt
hygromycin phosphotransferase
- IBA
indole-3-butyric acid
- KIN
kinetin
- LB
Luria Bertani
- MS
Murashige and Skoog
- NAA
ßnaphthaleneacetic acid
- NOS
Nopaline synthase
- NPTII and nptII
neomycin phosphotransferase II
- PCR
Polymerase chain reaction
- PVC
poly-vinyl-cloride
- SDS
sodium dodecyl sulfate
- SSC
sodium cloride-sodium citrate
- Tris
tris(hydroxymethyl)amino-methane
- WPM
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周祥明;郝志愚;夏时云;王姝;宋建;陈受宜;刘仲齐 《植物研究》2013,33(2):197-201
通过对农杆菌菌液浓度、侵染时间、预培养时间和共培养时间等影响转化效率的因素进行优化,建立了合欢农杆菌转化体系。在此基础上,利用农杆菌介导法将TaNHX2基因导入合欢基因组内,获得大量Kan抗性再生植株。常规PCR和实时荧光PCR检测结果表明,外源基因已整合到合欢基因组中,并正常转录。 相似文献
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对根癌农杆菌介导‘新津春四号’黄瓜(Cucumbis sativus L.)遗传转化的影响因素进行了研究。结果表明,黄瓜叶片适宜的潮霉素(Hygromycin,Hyg)筛选浓度为40 mg L-1;500 mg L-1羧苄青霉素(Carbenicillin,Carb)可有效抑菌。预培养2 d有利于转化;共培养2 d有利于提高转化频率并避免农杆菌的过度生长;添加150μmol/L乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS),农杆菌浸染液pH5.7、浓度0.8,浸染时间8 min为最佳遗传转化条件。再生植株经gus基因的瞬时表达检测及PCR检测证明hpt基因已成功转化。 相似文献