巨桉叶片总RNA提取方法比较

本研究以巨桉嫩叶为材料,通过试剂盒法、改良CTAB法和改良SDS法,进行巨桉嫩叶总RNA提取方法的比较试验,探讨适合巨桉嫩叶总RNA提取的方法。通过超微量分光光度计、凝胶电泳和RT-PCR对总RNA提取质量进行检验,结果表明:改良CTAB和改良SDS法均能获得高质量的总RNA,条带清晰,纯度高,效果稳定,均适用于桉树叶片总RNA提取。     

一种广泛适用的RNA提取方法

分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而RNase、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程.现利用硅藻土对RNase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的RNA提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含RNase的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种RNA提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,得率高的RNA.RT-PCR实验表明,提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究.硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是异硫氰酸胍法的3倍多.此外,将分离提取的总RNA经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段RNA,以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环RT-PCR,结果证明,富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后续实验.     

大青杨叶片总RNA的快速提取方法

目的:寻求快速提取大青杨叶片总RNA的方法。方法:分别用改良CTAB法、改良SDS法、改良TRIzol法及某公司总RNA提取试剂盒提取大青杨叶片总RNA,并用紫外光谱分析、凝胶电泳方法对提取的总RNA进行鉴定。结果:用改良CTAB法和改良TRIzol法能有效地去除蛋白及多糖,提取到的总RNA纯度高,D260nm/D280nm分别为2.05和1.78,RNA的完整程度优于试剂盒法。结论:改良CTAB法为大青杨叶片总RNA的最佳提取方法。     

提取高质量人参RNA的方法研究

针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90～120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究.     

麻疯树根边缘细胞生物学特性及镉对其活性的影响

以麻疯树为试材,采用悬空气法,探讨麻疯树离体根边缘细胞的生物学特性及重金属镉(Cd2+)对根边缘细胞活性的影响.结果表明,麻疯树根边缘细胞大多数呈椭圆型,少数成弯曲的长条型;根长为15 mm时,边缘细胞的生物学活性(存活率)最大;根冠果胶甲基脂酶(PME)酶活性随着根的伸长有所降低.镉对麻疯树根边缘细胞产生明显毒害,随着镉浓度和处理时间的增加,边缘细胞的活性都呈现下降的趋势.     

四种副溶血弧菌总RNA提取方法的比较

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌.提取高质量的RNA是研究副溶血弧毒力基因表达与其致病性和环境适应性的基础.本研究分别用SDS法、Trizol法,PureLinkTM RNA Mini Kit和Uniq-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取六株副溶血弧菌的总RNA,用普通琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测RNA的质量,并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较.研究结果表明,Trizol法和PureLinkTM RNA Mini Kit简单快捷,提取的总RNA完整性好,纯度高,可用于后续实验的分子生物学研究;而Trizol法更适用于普通实验室细菌RNA的提取.     

荒漠生物结皮中齿肋赤藓总RNA最佳提取方法的确立

目的：根据不同提取方法对提取荒漠齿肋赤藓总RNA质量的影响,寻找一种快速高效提取齿肋赤藓总RNA的方法。方法：采用改良RNAiso Reagent试剂法、RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒法（TIANGEN）、皂土法分别提取采自新疆古尔班通古特沙漠生物结皮中齿肋赤藓的总RNA,用紫外分光光度计测定其浓度、纯度和产量,并通过RT-PCR进一步检测其质量。结果：三种方法均能提取出RNA,但质量差异较大。其中改良的RNAiso Reagent试剂法提取的RNA产量可达1298～1318μg/g,完整性好且纯度高,OD260/OD280值为1.86～1.92,且经济、操作简便,能有效抑制多酚物质氧化和次生代谢物质的影响,,适合用于进一步的RT-PCR反应。结论：改良的RNAisoReagent法经济且操作简便,提取的荒漠齿肋赤藓RNA完整性和纯度较高,可用于RT-PCR反应。     

一种简单有效的植物RNA提取方法

在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制RNAse,建立了一种高效的植物RNA提取方法。以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL,异硫氰酸胍法,SDS-KAc法和新创皂土法提取总RNA进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有皂土法能提出质量高,完整性好的RNA。进一步以皂土法提取的18S rRNA为模板的RT－PCR结果分析表明, 用该法提取的RNA 能用于分子克隆与基因表达分析等后继分子生物学实验。该方法简便,快速,不失为一种经济高效的RNA提取方法。     

石斛属植物茎部总RNA提取方法的研究

获得快速提取高质量石斛属植物茎总RNA的方法,为深入开展分子生物学研究奠定基础。采用7种方法提取铁皮石斛茎总RNA,凝胶电泳和紫外分光光度法检测质量,筛选最佳方法,并对方法进行验证。结果显示,经过比较,用改良华越洋多糖多酚试剂盒法(M7)提取的铁皮石斛茎总RNA的完整性、浓度和纯度均最好。用M7提取铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛、球花石斛和重唇石斛的茎总RNA,以及提取不同生长条件(温室和大棚种植)和不同生长时间(大棚生长3个月、1年和2年)铁皮石斛的茎总RNA,所获样品的完整性、浓度和纯度均符合质量要求。M7操作简便,结果重复性好,适于石斛属植物茎总RNA的提取。