酿酒酵母5号染色体精细物理图谱绘制

利用脉冲电泳（ＰｕｌｓｅｄＦｉｅｌｄＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,ＰＦＧＥ）分析了酵母菌Ａ３６４ａ的电泳核型,以５号染色体专一探针确定了该染色体在电泳核型中的位置,以内切酶ＢａｍＨＩ对该染色体ＤＮＡ进行部分酶切后,与整合型载体ＹＩｐ５连接获得了一个染色体专一的基因文库,其转化子数目超过了理论要求值。从文库中筛选与已知探针有同源性的片段并用内切酶ＢａｍＨＩ,ＥｃｏＲＩ,ＨｉｎｄＩＩ,ＰｓｔＩ和ＳａｌＩ分析这些插入片段,获得了一个覆盖Ａ３６４ａ５号染色体（其长度估计为６２０ｋｂ）９．４％的精细物理图谱。利用边界克隆和菌落杂交将使我们能够对整条染色体进行进一步的“步查”     

霍乱弧菌染色体基因文库的构建

利用限制性内切酶Ｓａｎ３Ａ将霍乱弧菌１７８（埃尔托生物型,小川血清型）染色体ＤＮＡ进行部分酶切后,分离２０～５０ｋｂ的ＤＮＡ片断,与经过ＢａｍＨＩ酶切的柯斯质粒ｐＨＣ７９连接重组,通过体外包装系统形成噬菌体颗粒,感染受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１,构建成霍乱弧菌１７８染色体基因文库。为霍乱弧菌中未知基因的克隆及其它研究打下了基础。     

组蛋白赖氨酸甲基化修饰与肿瘤

对组蛋白甲基化修饰认识已有相当长的时间,但直到最近几年由于组蛋白甲基化修饰酶的发现才使人们逐渐认识到组蛋白甲基化修饰有广泛的生物学功能,像异染色质形成、X染色体失活、转录调节、干细胞的维持和分化等,组蛋白甲基化修饰的改变与某些人类疾病和肿瘤也有一定关系。组蛋白修饰是可逆性的,这为某些疾病的治疗提供了新的可能。     

新疆野生油菜细胞遗传学研究──Ⅱ．染色体的形态特征、过氧化物酶同工酶和mtDNA分析

对７０个不同编号的新疆野生油菜和黑芥进行了染色体形态特征、过氧化物酶同工酶和ｍｔＤＮＡ的研究,结果表明：新疆野生油菜的染色体数为２ｎ＝１８,不同于黑芥（Ｂ．ｎｉｇｒａ）尤嫩斯２ｎ＝１６。新疆野生油菜与黑芥的核型都为Ｂ型,但染色体比不同,新疆野生油菜的染色体比小于黑芥。用吉姆萨染色,新疆野生油菜带型不同于黑芥,最明显的差异是新疆野生油菜有一对染色体显全带,表示为组成型异染色质,而黑芥没有。过氧化物酶酶带的明显差异是新疆野生油菜比黑芥多一条酶带。ｍｔＤＮＡ分析表明,新疆野生油菜与黑芥都有主带ＤＮＡ分子,但新疆野生油菜还有两条质粒状ＤＮＡ带,而黑芥没有。由此认为新疆野生油菜与黑芥不是同一个种,但亲缘关系密切,并推测在黑芥的演化过程中,新疆野生油菜可能是最原始的类型,到现在或许还有少数的过渡类型。     

乳链球菌Z270乳糖－蛋白酶质粒pUCL22的消除及其整合

用简单的温和法消除乳链球菌Lactococcus lactis sub sp．Lactis Z270的乳糖-蛋白酶质粒pUCL22(54kb)。DNA普通琼脂糖凝胶电泳图和生化检验证明,变异菌株D16和D17的质粒pUCL22被消除了。脉冲电泳图表明,D16的染色体限制酶图谱与野生菌Z270的相似,但D17的染色体被质粒的蛋白酶基因多位点整合,从而改变了其染色体限制酶的酶切图。     

枯草杆菌启动子—信号肽序列的克隆及序列分析

利用含红霉素抗生基因和缺启动子－信号肽序列的氨苄青霉素抗性基因的双功能质粒ｐＧＰＢ１４为探针载体,克隆了枯草杆菌的启动子－信号肽序列并对克隆的片段进行序列分析。枯草杆菌染色体ＤＮＡ经Ｓａｕ３Ａ酶解后与ＢａｎＨＩ酶切的质粒ｐＧＰＢ１４连接,转化大肠杆菌Ｃ６００,筛选抗氨苄青霉素及抗红霉素的转化子,从双抗性转化子中提取重组质粒并经酶切分析,显示克隆的ＤＮＡ片段在０．２７－１．５ｋｂ之间。用Ｓａｎｇｅｒ     

欧文氏菌2-酮基醛糖还原酶基因敲除的研究

根据已知基因序列,利用ＰＣＲ技术,从克隆质粒和欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐ．）ＳＣＢ１２５染色体中重新扩增得到含有２－酮基醛糖还原酶Ａ和Ｂ（２－ＫＲＡ和Ｂ）基因的片段,分别用于基因表达和敲除。用于表达的片段定向连接到表达载体ｐＢＬ并转化大肠杆菌ＢＨ５α后,获得高酶活表达。在证实发生了突变的基因表达产物仍具有酶活的基础上,对其进行基因敲除的研究。在体外将链霉素抗性基因插入到ｔｋｒＡ内部使其突变失活     

香蕉试管苗变异因素的初步研究

本文初步研究了香蕉离体培养中,培养基内不同激素浓度、继代培养数,以及３个品种（品系）对试管苗变异的影响。结果表明：６３１和台湾８号比威廉斯（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）稳定,培养条件相同,培养代数多时,变异率明显提高。外源激素的配比试验表明：ＩＢＡ∶ＢＡ为０．５∶４．０（ｍｇ／Ｌ）为最佳配方,当ＩＢＡ∶ＢＡ达到２．０∶１０（ｍｇ／Ｌ）时,异常苗发生率最高。用田间变异株根尖细胞染色体观察结果,发现其染色体数不是增多就是严重缺失。变异株的过氧化物酶同工酶酶谱经电泳分析,表明在迁移率为０．７处的一条带纹消失,而正常对照苗则稳定存在。     

水稻随体染色体的研究

分析了几种野生稻种及栽培稻品种随体染色体的数目,发现不同染色体组型的稻种之间随体染色体数目有一定差异,其中染色体组ＡＡ的有１～２对,随体染色体因品种或样本的来源而异,染色体组ＢＢ的有３对随体染色体,染色体组ＣＣ的有２对随体染色体,染色体组型为ＢＢＣＣ的Ｏｒｙｚａｍｉｎｕｔａ可能有４对随体染色体,而染色体组型为ＣＣＤＤ的Ｏ．ｌａｔｉｆｏｒｉａ则有２对随体染色体。在栽培稻中,不同品种之间随体染色体的数目也存在差异,一般而言,籼稻品种具有两对随体染色体,分别为第１０和第１２染色体,粳稻品种只有一时随体染色体,为第１０染色体。     

VE161小麦的外源染色体鉴定

通过染色体原位杂交、ＲＦＬＰ分析和染色体重双端体分析,对在小麦遗传育种研究中具有重要理论和应用价值的ＶＥ１６１小麦不育异代换系及其附加系进行了染色体鉴定。结果表明,ＶＥ１６１小麦代换的或附加的外源染色体为来自长穗偃麦草的４Ｅ染色体,被代换的小麦染色体为４Ｂ。过去曾鉴定为７Ｂ,可能是由于ＶＥ１６１早代染色体易位较多所致。同时发现,ＶＥ１６１小麦在５Ｂ,７Ｂ和１Ｄ所在的３个部分同源群中仍有染色体相互易     

优良水稻品种“明恢63”BAC文库的构建

“明恢６３”是我国许多重要的水稻杂交组合中的恢复系。为了对其进行深入的遗传学研究以及克隆控制重要农艺性状的基因,以细菌人工染色体（ｐＢｅｌｏＢＡＣ１１）为载体,克隆经限制性内切酶消化后部分收集的“明恢６３”基因组ＤＮＡ,将连接混合物转化细菌ＤＨ１０Ｂ,构建了细菌人工染色体（ＢＡＣ）文库。该文库共有２６０００个转化子,插入片段为９０～２４０ｋｂ,平均大小为１５０ｋｂ。经计算该文库覆盖９倍水稻基因组。该文库正在用于构建几个基因所在区段的物理图谱,为图位克隆打下基础     

牛肾细胞染色体中染色质纤维的包装及RNP的分布

应用培养的牛肾（ＢＫ）细胞及分离的ＢＫ细胞染色体做常规透射电镜样品,经表面舒展技术和临界点干燥制备ＢＫ细胞染色体的扫描电镜样品,并结合电镜细胞化学研究了ＢＫ染色质纤维的包装及核糖核蛋白（ＲＮＰ）的分布。观察到ＢＫ染色体具有多级双股螺旋结构。在染色体横切面中,可见染色体中央有一低电子密度的无染色质区,该区内有大量ＲＮＰ物质。在染色质区ＲＮＰ较少,分布在染色质纤维间,与中央轴区的ＲＮＰ相连续,表明ＲＮＰ在染色体中呈不均匀分布。     

维生素C混合发酵中产酸菌基因文库的构建

在对氧化葡萄糖酸杆菌ＳＣＢ３２９的纯培养方法进行了探索并获得了一定量的纯培养的ＳＣＢ３２９菌体的前提下,用常规方法抽提得到Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ｏｘｙｄａｎｓ　ＳＣＢ３２９染色体ＤＮＡ。选用质粒ｐＫＳ作为载体,该载体具有氨苄抗性以及ｌａｃＺ基因．用限制酶对染色体进行部分消化,将一定范围内的消化片段回收后与载体连接,连接产物转化Ｅ.ｃｏｌｉＤＨ５ａ感受态细胞,利用蓝白斑特性选出重组子构建ＳＣＢ３２９基因组文库。用低熔点琼脂糖将ＳＣＢ３２９菌体包埋起来,对包埋在凝胶块中的细菌     

银额果蝇武汉群体的B染色体研究

本研究发现,银额果蝇武汉群体的有丝分裂中期核型中存在着Ｂ染色体,其出现频率为３８％,仅低于昆明,而高于其他地区,Ｂ染色体形态为点状。细胞内染色体的不同步分裂可能是造成Ｂ染色体形成的一个原因。     

苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因在小麦基因组中的甲基化修饰

通过花粉管通道法将苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）毒蛋白基因（Ｂｔ．ｔｏｘｉｎｇｅｎｅ）转进了小麦品种京花５号与８６Ａｌ。利用点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ等技术鉴定了转化植株的当代和子代,证实了Ｂｔｔｏｘｉｎｇｅｎｅ的导入与对小麦染色体的整合。利用对腺嘌呤（Ａ）与胞嘧啶（Ｃ）甲基化敏感与否的限制性内切酶组（ｍｅｄｈｙｌａｔｉｏｎ－（ｕｎ）ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｇｒｏｕｐ,ＭＲＥＧ）酶切和ＲＣＲ扩增（ＭＲＥＧ－ＰＣＲ）,对转化子代中的Ｂｔ基因片段甲基化形式进行了研究。结果表明,整合在小麦基因组中的Ｂｔ基因的Ａ和Ｃ的甲基化形式发生了变化     

普通小麦抽穗期基因定位的研究

本文以物晚熟多小穗器系１０阿为被测材料,中国春和阿勃两套单体系列为测验系,对抽穗期性状进行了基因定位研究。结果表明,被测系１０阿晚抽穗,受５Ａ,１Ｂ,２Ｂ,６Ｂ和２Ｄ染色体上的隐性基因所控制。其中,２Ｄ染色体上的基因表现为强效,５Ａ,１Ｂ,２Ｂ和６Ｂ染色体上的基因表现为弱效.据前人研究和本试验结果分析认为,被测系１０阿的１Ｂ和２Ｂ染色体上可能具有控制晚熟性的新基因。     

蜘蛛的B染色体研究：I.武汉地区粽管巢蛛的B染色体（蜘蛛目：管巢蛛科）

首次发现武汉地区粽管巢蛛胚胎细胞中存在的Ｂ染色体,观察数目为１～２８条,Ｂ染色体数目从有丝分裂晚前到中期逐渐减少,在非整倍体细胞中,随着Ａ染色体的减少逐渐增多,Ｂ染色体形态稳定,大多数为等臂染色体,少数具有亚端着丝点和端着丝点,外观上明显小于Ａ染色体。     

phbB,phbC基因在大肠杆菌中的表达及对马铃薯植株的转化和检测

利用从真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）Ｈ１６染色体ＤＮＡ中克隆到的催化聚β羟基丁酸酯（ｐｏｌｙβｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ,ＰＨＢ）生物合成的两个关键酶基因：依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰乙酰ＣｏＡ还原酶基因（ｐｈｂＢ）以及ＰＨＢ合酶基因（ｐｈｂＣ）,同时利用大肠杆菌高效表达载体ｐＫＫ２２３３,构建了嵌合有ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ基因的表达载体ｐＫＣＢ,转入大肠杆菌ＪＭ１０９,通过显微镜观察及气相色谱分析检测ＰＨＢ的合成。在确证克隆基因正确的基础上构建了马铃薯块茎特异性表达载体ｐＰＳＡＧＢ（含ｐｈｂＢ基因）、ｐＢＩＢＧＣ（含ｐｈｂＣ基因）和ｐＰＳＡＧＣＢ（含ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ双基因）,转化５个马铃薯品种,经检测获得２０个转基因阳性株系。     

BaNPV感染油酮尺蠖及Bs484细胞的酯酯分析

本文使用聚丙烯酰胺凝胺电脉及薄层扫描技术测定了油桐尺蠖Ｂｕｎｕｒａ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａ和Ｂｓ４８４细胞感染核型多角体病毒后的酶酶（ＥＳＴ）含量类型的变化。结果表明,油桐尺蠖中肠ＥＳＴ的含量和类型在病毒感染８小时后就有明显的改变,随着感染时间延长,这二项指标都有较大的变化。而Ｂｓ４８４细胞的ＥＳＴ含量变化开始于病毒感染后３小时,细胞ＥＳＴ的类型则无改变。     

2,5—KDG还原菌Ⅱ基因的克隆和在大肠杆菌中的表达

参照文献上的２,５－二基－Ｄ－葡萄糖酸还原酶Ⅱ基因序列,合成两个引物序列并在两端加上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ两个酶切位点,抽提棒状杆菌ＳＣＢ３０５８菌株的染色体灯反进行ＰＣＲ反应,克 得到２,５－ＤＫＧ还原酶Ⅱ基因,酶切验民预期的结果相符合。将此片段克隆到ＰＧＥＭ－Ｔ载体上保存将２,５－ＤＫＧ还原酶Ⅱ基因用ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨＩｍ内切酶切下,连接到ＰＢＶ２２０载体上,构建成表达载体,４２℃诱导不能得