人体胚胎浸制标本的制作

人体胚胎浸制标本的制作人体胚能浸制标本的传统制作工艺,难于制出体态丰润、色泽自然的理想标本。为了制出保持原色原状的人体胚胎标本。作者进行了多年的系列比较试验,制出一批比较理想的标本。（一）材料的来源和处理人体胚胎来自医院。事先与医院预约挂钩,购取人工...     

H3N2v疫苗病毒的鸡胚适应性突变能提高病毒收量,而又不失去抗原性和免疫原性

<正>最近发现的人畜共患H3N2型变异甲型流感病毒(H3N2v)已导致有记录的343例与猪接触相关的人类感染。需要研制针对病毒的有效疫苗,这些病毒可能获得了在人群中的遗传稳定性。然而,从人体中分离的病毒在鸡胚中不能良好复制,这构成了基于鸡胚的疫苗生产的障碍。为了解决这个问题,我们想得到表面蛋白的鸡胚适应性突变以在保留免     

流行性出血热疫苗研究进展

<正>目前肾综合症出血热在全世界每年约有15万病例,死亡率为3～10%,主要分布在欧亚大陆,近年来发现东南亚和非洲国家亦有此病发生。自1978年李镐汪首先分离到出血热病毒后各国各地从野鼠、家鼠、试验大鼠或其他动物及病人标本分离到许多病毒株。我国自1981～1982年先后从黑线姬鼠和褐家鼠分离到出血热病毒后,全国各地亦从不同动物和人体分离到许多病毒株,并对这些病毒株进     

SARS冠状病毒的分离培养与鉴定

采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero 、Vero E6、MDCK、Hela 、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体.结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒.间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用;电镜下可观察到冠状病毒样颗粒;RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100%.从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关.     

SARS冠状病毒的分离培养与鉴定

采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用;电镜下可观察到冠状病毒样颗粒;RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100％。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。     

2019-2020年苏中地区某活禽市场H9N2禽流感病毒分子进化

【背景】20世纪90年代以来,H9N2禽流感病毒成为危害我国养禽业及人类健康和公共卫生的重要病原。【目的】了解苏中地区2019-2020年活禽市场H9N2禽流感病毒的分子进化特征。【方法】通过荧光定量PCR法对标本进行流感病毒分型检测,原始标本用SPF鸡胚进行病毒分离,用特异性引物对病毒分离物进行全基因组测序,利用BLAST、ClustalX和MEGA6等软件进行序列比对和系统发育分析。【结果】2019-2020年间从苏中地区某农贸市场采集到231份环境和禽类标本,共检出34份甲型流感病毒,其中33份为H9N2亚型。阳性标本接种SPF鸡胚,分离到20株H9N2病毒。对其中11株病毒进行全基因组测序,系统发育分析表明11株病毒的HA和NA都属于H9N2禽流感Y280-like系的G57基因型。根据HA和NA的进化特征,11株病毒可分为5个基因组合(A、B、C、D和E),其中A (n=5)是优势流行基因组合。11株H9N2分离病毒的HA蛋白HA1和HA2亚单位的裂解位点是一个碱性氨基酸R,具有低致病性禽流感病毒的特征。HA蛋白的受体结合部位有4个氨基酸位点(I155T、H183N、A190...     

油桐尺蠖核型多角体病毒接种几种脊椎动物细胞的试验

利用昆虫病毒防治害虫,既要求有防虫效果,又必须考虑其安全性。油桐尺蠖核型多角体病毒对实验动物的致病性试验,已有报道。本文侧重于细胞水平,用油桐尺蠖核型多角体病毒接种鸡胚细胞、地鼠肾细胞及人胚肺细胞,观察病毒能否在细胞中增殖或引起细胞病理变化。     

2009～2013年我国活禽市场环境样本中禽流感病毒的检测

为了解中国活禽市场环境样本中禽流感病毒分布情况,对全国2009~2013年采自活禽市场的环境样本进行流感病毒核酸检测,并利用无特殊致病原鸡胚(SPF鸡胚)对A型流感病毒核酸阳性标本进行病毒分离。结果显示,环境标本中禽流感病毒核酸阳性率的波动呈明显的季节性趋势,冬春季节核酸检测阳性率较高;我国南方地区活禽市场环境样本的禽流感病毒核酸阳性率高于北方。市场中清洗禽类的污水和宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭样本核酸阳性率高于其它类型的样本。2009~2013年环境样本中分离到的禽流感病毒以H5和H9亚型为主,2013年之前H5亚型多于H9亚型,而2013年H9亚型超过了H5亚型。本研究表明,对城乡活禽市场中禽流感病毒的实时监测具有重要的公共卫生意义,可为我国人感染禽流感病毒的防控和预测预警提供依据。     

库蠓源蓝舌病病毒1型的分离和初步鉴定

为监测云南边境地区虫媒库蠓蓝舌病病毒携带情况,本研究对2013年-2017年从云南6个口岸及周边地区采集到的约5 400只库蠓样本,分180组。采用荧光定量RT-PCR检测、鸡胚和细胞分离、目的基因克隆测序分析和间接免疫荧光试验等进行病毒分离与鉴定。结果显示:采集库蠓样本中有20组检出蓝舌病病毒核酸,检出率为11.11%(20/180);接种后有1份样本能导致鸡胚胚体充血出血和死亡以及BHK-21细胞呈现明显的细胞病变;RT-PCR能从感染细胞样本中扩增出蓝舌病病毒VP7基因特异性片段,且该片段序列与国外BTV-1毒株相应序列的相似性达95%~99%;间接免疫荧光试验显示分离病毒能与BTV-1抗体发生特异性结合。结果表明,云南边境地区库蠓携带有蓝舌病病毒,且为BTV-1,因此应加强对云南边境地区蓝舌病的预防与控制。     

利用8质粒系统拯救A/Chicken/Shanghai/F/98（H9N2）株禽流感病毒

应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的8个基因组cDNA分别克隆到polⅠ_polⅡ转录 表达载体pHW2 0 0 0中,构建成8个转录表达载体重组质粒。将这8个质粒共转染COS_1细胞,2 4h后收获细胞及上清接种SPF鸡胚,4 8h后收取鸡胚尿囊液继续进行鸡胚传代,产生能致死鸡胚的病毒。经血凝、血凝抑制试验、序列分析和电镜观察,证实产生了CK SH F 98(H9N2 )株AIV。     

用化学试剂灭活时病毒悬液感染性测定的一些特点

<正>病毒感染性灭活和在制备死疫苗时灭活控制的首要条件就是要有一适当的方法来测定灭活过程中病毒材料的感染性。对于动物病毒,广泛使用鸡胚的滴定方法。 结果可用Reed和Muench的方法测算。该法是将每一稀释度的病毒材料接种若干个鸡胚并记录感染鸡胚的数量。随着稀释度增加,受感染的鸡胚数量在一定稀释度时开始减少。从而可以计算出原始材料中病毒的滴度。     

退热1号口服液抗4种病毒的实验研究

采用病变抑制法和血凝试验在鸡胚和2种细胞培养上测定了中成药退热1号口服液对4种病毒的抑制作用。试验结果表明,退热1号口服液在浓度为1:2(原液浓度为每100毫升含生药量245克)以下时,对鸡胚和细胞无毒性作用。浓度在1:4—1:32时,对流感病毒、呼吸道合胞病毒和巨细胞病毒有较强的抑制作用,但对腺病毒无抑制作用。     

犬细小病毒单克隆抗体的制备及其与免疫血清在血凝抑制中的比较

将用犬细小病毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞在聚乙二醇作用下融合,经筛选、克隆,得到６株稳定分泌犬细小病毒单克隆抗体的杂交瘤。用杂交瘤腹水作血凝抑制试验,检测分别含有犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒和水貂肠炎病毒的标本,及ＣＰＶ感染犬粪便标本,并与免疫血清作对比。结果表明,用单克隆抗体作血凝抑制试验,比用免疫血清作具有特异性高、操作简便省时等优点,而二者敏感性一致。     

对1983年夏季北京地区儿童中流行性咽结膜热病毒病因的研究

1983年夏季,北京地区儿童(以中小学生为主)中曾暴发流行咽结膜热。为探讨其病毒病因以便为临床提供诊断和防治依据,从8月10—31日在我院儿科门诊共采集患儿80份咽拭子标本和8份结膜拭子标本。同时对88例中的58例采集了双份血清,进一步做血清学试验来检测病毒,并进行了免疫荧光早期快速诊断病毒的试验。现将结果报道如下。     

混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化与鉴定

【目的】研究混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化和鉴定方法。【方法】用鸡胚终点稀释法和鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法分别对2-3种已知亚型禽流感病毒的混合感染样品进行纯化,并对纯化结果用RT-PCR和血凝抑制试验进行鉴定。用建立的方法对214份禽流感病毒阳性样品进行了纯化和鉴定。【结果】用鸡胚终点稀释法对样品稀释、传代6-7次可使病毒达到纯化,但用鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法对样品稀释、传代4-5次即可达到病毒纯化。用RT-PCR和血凝抑制试验两种方法同时鉴定病毒的纯化效果,可明显提高准确性。用本方法从214份样品中纯化出涵盖13种亚型的禽流感病毒233株。【结论】鸡胚终点稀释法及其结合特异性血清中和法均能对禽流感病毒进行纯化,但是鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法更具有针对性,也更有效。另外,对纯化结果的鉴定需采取多种手段。     

核糖体失活蛋白体内外抗病毒的实验研究

核糖体失活蛋白是一类广泛存在于高等植物细胞内的能抑制核糖体功能的植物蛋白。建立了从苦瓜籽中提纯核糖体失活蛋白的方法,蛋白质电泳结果显示提取液中含有一定量的核糖体失活蛋白。在鸡胚成纤维细胞和鸡胚上进行核糖体灭活蛋白体内外抗马立克病病毒、新城疫病毒和鸡痘病毒试验,结果均表明核糖体灭活蛋白对3种病毒有一定的抑制作用。     

2017–2019年我国南方地区高致病性H5N6亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析

【背景】自2014年以来,H5N6禽流感病毒在我国家禽和活禽市场持续进化,成为人类和动物健康的重大威胁。【目的】对2017–2019年中国南方地区93株高致病性H5N6禽流感病毒的HA基因进行分子进化分析。【方法】接种9–11日龄鸡胚分离核酸检测阳性的H5N6标本,运用下一代测序平台对病毒分离物进行全基因组测序,从NCBI和GISAID数据库下载参考序列,利用BLAST、MEGA6.1及Clustal X等软件进行序列分析。【结果】2017–2019年,从189份江苏省H5亚型禽类/环境标本和1名H5N6患者咽拭子标本中共分离到43株病毒,完成了33株H5N6病毒的全基因组测序。下载网上同时期中国其他地区流行的H5N6毒株序列,对总计93株H5N6病毒的HA基因进行分子进化分析。93株H5N6病毒中有78株属于Clade 2.3.4.4h,9株病毒属于Clade 2.3.4.4e,4株H5N6病毒属于Clade 2.3.4.4b,1株属于Clade 2.3.4.4f,1株属于Clade 2.3.4.4g。所有93株病毒HA蛋白的裂解位点含有多个碱性氨基酸,表明它们都属于高致病性禽流感病...     

汉坦病毒在原代人胚肾与人胚肺细胞中增殖及其特性的研究

近年来研究发现,汉坦病毒能在多种细胞株及人体细胞中增殖、适应.国内学者用人胚肺二倍体细胞(2BS)体外适应该病毒成功,但有关原代人胚肺、肾细胞的报道尚少.作者选用两株病毒及两种原代人胚细胞用于体外感染、观察,应用免疫荧光间接法及胶体金包埋前染色电镜技术对宿主细胞中增殖的病毒进行了动态观察及特异性定位研究,现报告如下.1 材料和方法1.1 细胞的分离和培养1.1.1 人胚细胞:取正常孕妇5—7个月水囊引产胚肾及肺组织,按常规方法分散细胞,5—7天后长满单层.1.1.2 非洲绿猴肾上皮细胞(VeroE6):由安徽省医学科学研究所倪大石惠赠.1.2     

甲型流感病毒各代表株在鸡胚腎组培养上的表现

一、甲型流戚病毒各代表栋均能良好地在鸡胚肾组织培养氅殖：PR8、FMl、洛57—4、兰生60—2等株EID∞一般可达到5．0—6．0个对数,但沪防60一l梢低;多数毒株均能产生明显的细胞病变;病毒在戚染鸡胚肾组织培养后32—48小时为繁殖高壅。 二、甲型流戚病毒各代表株均能良好地在端胚肾组织培养中传代适应,在最初几代EID,。及血凝湔虔逐渐增高,以后维持在一定的水平。 三、利用血球吸附试验测定流戚病毒在鸡胚肾组织培养的繁殖滴度,是一种比较敏感和可靠的方法。 四、在鸡胚肾组织培养传代适应的病毒株与原株之同的抗原性及对非特异性抑制素的敏感性无显著的差别。 五、关于鸡胚肾组织培养与人胚肾、猴肾组织培养之间对流成病毒的敏感性的差异及鸡胚肾组织培养的实用价值进行了讨论。     

新甲_1型流行性感冒病毒的蚀斑

1977年5月,我国出现了新甲_1型流行性感冒(简称流感)病毒。我们共选用了9株新甲_1型流感病毒及5株减毒活疫苗毒种在鸡胚肌皮、鸡胚肾混合细胞单层进行蚀斑试验,结果如下。