胰RNA对瘤细胞作用的研究——胰RNA对离体瘤细胞的杀伤作用及其有效组分的初步探讨

在体外培养瘤细胞的实验中,胰RNA提取物不仅对艾氏腹水癌细胞而且对其他瘤细胞(S₁₈₀、P₃₈₈、H₂₂)也具有杀伤作用。在胰RNA提取物中,对瘤细胞具有杀伤作用的活性物质不是外源性凝集素样多糖类或能透过半透膜的低分子化合物,而是具有一定二级结构的低分子RNA。     

正常牛胰RNA对Ehrlich腹水癌细胞的抑制和杀伤作用

近年来,人们已开始把各种外源性核酸用于生物体,例如,免疫核糖核酸以mRNA的作用来增加淋巴细胞的免疫活性,释放淋巴毒素,杀伤瘤细胞;淋巴组织的双股RNAn对瘤细胞有一定毒性并抑制其生长,还有淋巴组织RNA不介导淋巴细胞而直接杀伤瘤细胞等。我们曾在外源性RNA对EATC形态变化的影响实验中发现,与脑、胸腺、脾淋巴结等组织RNA相比,胰脏RNA更显著地抑制EATC的生长,并有改变其形态的作用。不仅     

对牛胰多肽抑制胰酶分泌作用的离体研究

为探讨胰多肽抑制胰酶分泌的机制,我们利用大鼠离体胰腺泡制备观察了牛胰多肽(BPP)在细胞受体水平对氨甲酰胆碱等促分泌物作用的影响。实验结果显示,BPP 对氨甲酰胆碱诱导的胰腺泡淀粉酶分泌具有抑制作用,并存在剂量反应关系。BPP0.1μmol/L 和0.2μmol/L,可分别使氨甲酰胆碱诱导淀粉酶分泌的效价降低3倍和10倍;BPP 还可抑制氨甲酰胆碱刺激胰腺泡释放~(45)Ca。以上结果提示,BPP 对胰腺泡的胆碱能 M 受体具有拮抗作用。此外,BPP 对促胰液素及其同类激动剂和氨甲酰胆碱协同作用诱导的胰腺泡淀粉酶分泌具有抑制作用,提示胰多肽在整体对促胰液素诱导的胰酶分泌的抑制,可能是通过拮抗胰腺泡细胞上的 M 受体而抑制了促胰液素和胆碱能刺激协同作用引起的胰酶分泌。     

尿激酶受体反义RNA抑制人乳腺癌细胞的侵袭作用

将尿激酶受体 u PAR反义 RNA表达质粒 p URAS以脂质体法转染高侵袭性人乳腺癌细胞株 MDA- MB- 2 31 ,G41 8筛选抗性克隆 .Northern印迹法检测 u PAR反义 RNA的表达 ,RT- PCR法检测 u PAR的表达 ,牛奶板法测定细胞培养上清中纤溶活性 .改良 Boyden小室模型和裸小鼠乳房脂肪垫接种试验分别检测肿瘤细胞体外和体内侵袭能力 .反义克隆细胞能表达 u PAR反义RNA,其 u PAR表达水平及培养上清中纤溶活性明显降低 .反义细胞克隆体外侵袭能力比原代细胞 MDA- MB- 2 31和转染载体细胞克隆显著降低 .裸小鼠体内侵袭实验表明 ,反义细胞克隆的成瘤性、生长性和侵袭性均显著受到抑制 .u PAR至少在一部分恶性乳腺癌侵袭行为中发挥重要作用 ,反义 RNA可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段 .     

RNA干扰抑制结肠癌血管内皮生长因子的体内实验研究

目的:应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达,并通过体内实验,观察在体内复杂环境下能否有效抑制VEGF表达,以及结肠癌细胞凋亡的情况,为RNA干扰技术的临床应用奠定基础。方法:体内实验中,将RNA干扰质粒以水动力法导入结肠癌裸鼠模型,通过RT-PCR观察VEGF mRNA表达受抑的程度;Western杂交检测VEGF蛋白的表达情况;通过测量比较瘤体大小和Tunel法,观察VEGF受抑制后,肿瘤形态和细胞凋亡的变化。结果:体内实验中,通过RT-PCR和Western杂交检测,发现这两种抗VEGF表达载体能够有效抑抑制裸鼠结肠癌模型瘤体VEGF的表达;VEGF受抑制后,瘤体增长受到抑制,Tunel法显示,RNA干扰可致肿瘤细胞凋亡增加。结论:Tunel法分析显示,当VEGF受抑制后,肿瘤细胞凋亡发生率明显增加,针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制裸鼠VEGF基因的表达。     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ｃＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动子下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反义ＲＮＡ载体．将其用电击法导入ＣＤ４４＋的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地抑制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达．ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响．将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ＣＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ＰＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反应ＲＮＡ载体,将其用电击法导入ＣＤ４４的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地换制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达,ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响,将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低。     

小干扰RNA靶向VEGF基因体内外抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖

 血管生成与肿瘤生长、侵袭、转移密切相关.血管内皮生长因子能特异地促进内皮细胞分裂、增殖及迁移,在肿瘤新生血管生成过程中起着至关重要的作用.通过RNAi抑制VEGF表达的抗血管生成疗法可有效应用于肿瘤治疗.本研究采用化学修饰的siRNA在体内外抑制VEGF基因表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性.选用阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000作为转染试剂,将针对人VEGF基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人类乳腺细胞株MCF-7和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白印迹实验等检测siRNA治疗组和对照组VEGF基因表达及细胞增殖变化.体外实验结果显示：靶向VEGF基因siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,细胞生长抑制率达52.5%;VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;裸鼠体内实验结果显示：siRNA治疗组瘤组织的增长受到明显抑制;RT-PCR结果同时表明治疗组VEGF表达下调.体内外对照组各指标无显著变化.化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功下调靶基因VEGF的表达,抑制MCF-7细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法.     

C-myc反义RNA抑制血管平滑肌细胞增生的实验研究

观察血管内膜损伤后C－myc反义RNA在抑制血管平滑肌细胞的增生、迁移及防止动脉粥样硬化形成和血管再狭窄中的作用。选雄性日本大白兔36只,经球囊造成腹主动脉内膜损伤的同时,局部给予C－myc反义RNA、正义RNA及盐水,高胆固醇喂养12周处死,测量内膜厚度,计数增生细胞核抗原PCNA阳生细胞数。结果显示：盐水及正义对照组内膜明显增厚（317μm）,PCNA核阳性细胞数明显增多（63％）,可见明显的粥样斑块灶形成,而反义RNA治疗组内膜增厚仅为217μm,PCNA阳性细胞为30.5%,明显低于对照组,P＜0.01。结果表明：C－myc反义RNA具有显抑制VSMC增生,减轻粥样斑块形成的作用。     

反义RNA对人胃癌细胞生长抑制及恶性表型的阻断作用

ｒａｓ原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达ｃ－Ｈ－ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ的质粒,导入人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,研究了ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用,结果表明,ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ可引起ＢＧＣ－８２３生长速率及形态的变化,在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱,部分也抑制了ＢＧＣ－８２３在裸鼠体内的致瘤性。ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ对其ＲＮＡ的过量表达     

外源性肝胞质RNA对人肝癌细胞的生物学作用及体内分布

从正常动物肝脏提取了以胞质RNA 为主的RNA,以聚丙烯酰胺电泳及对人体肝癌(7402)细胞的生物学作用证明,制品含有相当于7～18S 的不均一RNA,和具有mRNA 的模板活性以及对基因活动的调节控制活性。应用~(125)Ⅰ(及~(131)Ⅰ)标记的肝RNA 注入正常小鼠及肝内接种移植性肝癌的小鼠,从整体动物扫描及脏器比放射性分布,证明~(125)Ⅰ-RNA 优先进入肝及肝癌组织,~(125)Ⅰ-核苷酸(NT)则呈均匀分布。注射10～50微居里~(125)Ⅰ-RNA,15分钟后,细胞放射自显影显示,在肝及肝癌细胞中出现银颗粒的积聚。~(125)Ⅰ-NT 在同样条件下,肝及肝癌细胞中未见明显的银粒积聚,由此提示~(125)Ⅰ-RNA 可能有相当部分以一定的大分子形式进入肝及肝癌细胞。人肝癌(7402)细胞经正常鼠肝RNA 温育24小时后,以~(14)C-亮氨酸对血清白蛋白的参入证明,人体肝癌细胞不仅合成鼠血清白蛋白,并可显著促进人血清白蛋白的合成,高达未处理的肝癌细胞的3.6倍,由此说明我们所制备的肝RNA 不仅具有供体(鼠)肝的模板活性作用,同时具有调节宿主(人)肝癌细胞基因活动的作用。放线菌素D 可部分或全部阻断这种调控作用,但对模板作用影响较少,甚至可见有增强作用。肝RNA 制品中显示的模板和调控活性可能来自两类不同功能的RNA,对此作了讨论。无论是模板或调控作用,都可能促使肝癌细胞发生功能上的分化,反映出癌细胞表现型的改变。通过外源性正常肝RNA 的调控作用,纠正癌细胞基因活动的异常,从而导致向正常细胞表现型逆转,可能将为肝癌的防治提供新的途径。     

反义RNA对人胃癌细胞生长抑制及恶性表型的阻断作用

ｒａｓ原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达ｃ－Ｈ－ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ的质粒,导入人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,研究了ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用,结果表明,ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ可引起ＢＧＣ－８２３生长速率及形态的变化,在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱,部分地抑制了ＢＧＣ－８２３在裸鼠体内的致瘤性。ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ对其ＲＮＡ的过量表达呈特异性抑制作用。     

双歧杆菌协同TIL细胞体内杀瘤活性的研究

本研究应用从小鼠Ｓ１８０癌性腹水分离诱导的ＴＩＬ癌内注射与活的双歧杆菌腹腔内注射共同治疗荷Ｓ１８０实体瘤小鼠,结果表明单用ＴＩＬ和ＴＩＬ合用ＩＬ－２早期抑瘤效果,能延缓肿瘤的发生和发展,而晚期抑瘤效果尚不及单用双歧杆菌组。ＴＩＬ与双歧杆菌、ＴＩＬ、双歧杆菌及低剂量ＩＬ－２,荷瘤早、晚期抑瘤效果均较好,且毒副作用低,表明双歧杆菌有可能通过刺激机产生内源性ＩＬ－２维持ＴＩＬ的生物学活性从而协同ＴＩＬ细     

藻蓝蛋白对非小细胞肺癌细胞移植瘤生长的抑制及促凋亡作用的机制研究

摘要 目的：探讨藻蓝蛋白对非小细胞肺癌细胞移植瘤生长的抑制及促凋亡作用的机制研究。方法：4~6周龄30只无胸腺BALB/c裸鼠随机分为移植瘤组和藻蓝蛋白组。每5天用卡尺测量裸鼠肿瘤体积。通过RT-PCR检测裸鼠肿瘤中凋亡相关因子MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Bax的mRNA表达。通过流式细胞术分析细胞周期。通过蛋白印迹分析EMT相关蛋白的表达。通过ELISA检测血浆细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β的浓度。通过蛋白印迹分析STAT3/NF-κB信号通路的表达。结果：第13天时,移植瘤组和蓝藻蛋白组肿瘤大小比较无差异（P>0.05）,第18天和第25天时,藻蓝蛋白组肿瘤体积较移植瘤组减小（P<0.05）。藻蓝蛋白组MMP-2、MMP-9和Bcl-2的mRNA表达较移植瘤组降低（P<0.05）,藻蓝蛋白组Bax mRNA表达较移植瘤组升高（P<0.05）。藻蓝蛋白组G1期占比较移植瘤组升高（P<0.05）,藻蓝蛋白组G1期占比较移植瘤组升高（P<0.05）,藻蓝蛋白组S期和G2期占比较移植瘤组降低（P<0.05）。藻蓝蛋白组N-钙粘蛋白和VEGF蛋白表达较移植瘤组降低（P<0.05）,藻蓝蛋白组E-钙粘蛋白表达较移植瘤组升高（P<0.05）。藻蓝蛋白组TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β的浓度较移植瘤组降低（P<0.05）。藻蓝蛋白组p-STAT3、p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达较移植瘤组降低（P<0.05）。结论：藻蓝蛋白通过调控STAT3/ NF-κB信号通路抑制炎性细胞因子的分泌和EMT发生,促进肿瘤细胞凋亡,抑制裸鼠体内移植瘤的生长。     

反义RNA抑制存活素基因的表达对HeLa细胞的影响

为研究存活素（survivin)基因在肿瘤细胞中的应用,通过RT-PCR从HeLa细胞中克隆得到存活素cDNA的编码区,将其反向克隆到可诱导型表达载体pHC中,得到存活素反义RNA表达的载体pHSC,通过脂质体的介导,将pHSC导入HeLa细胞中,经C418（800nmol/L)筛选获得可以诱导表达存活素反义RNA的稳定细胞株HeLa-pHSC。获得的细胞株在2mmol/LZn^2 的诱导下,可以表达存活素反义RNA,从而抑制存活素基因的表达,此时HeLa细胞的增殖受到抑制,对化疗药物的敏感性增加,在G2/M期可以减缓细胞周期的进行性,这表明存活素对维持肿瘤细胞的增殖以及细胞周期的进行具有非常重要的作用。     

关于人和动物交感神经节细胞的分类及机能形态学问题

研究交感神经节细胞的分类、形态、机能及其与其他神经结构的相互联系,对于理解参与机体某些机能调节的神经机制,以及对于神经系统的结构,机能特性及其发育的一般概念有很大意义。为此,将苏联学者及本文作者对此问题的研究文献加以综述,以供大家参考。 1896年把交感神经节(星状神经节及其他的交感干神经节)的神经细胞区分为Ⅰ型及Ⅱ型细胞两种类型。在1899年又把交感干神经节的神经细胞区分为Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅲ型细胞三种类型。对这三型神经细胞的形态及其机能意义作了如下的叙述。Ⅰ型细胞:细胞呈星形,树状突短而粗,接近细胞体再一次分枝,数目不等,约2—20条,轴突从细胞体发出,或从一条树状突宽的锥体形底部发出,     

霉酚酸酯对人肝癌细胞HepG-2抑制作用的研究

目的:研究霉酚酸酯体外对细胞生长抑制率、细胞凋亡以及对细胞黏附率的影响.方法:以霉酚酸酯在0.1μg/ml-100μg/ml,24-72h内作用于肝癌细胞,MTT法检测肿瘤细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,Hoeehst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态变化,细胞黏附实验检测细胞黏附率的影响.结果:霉酚酸酯显著的抑制了肿瘤细胞的增长,并显著的抑制其黏附率,在浓度为100μg/ml作用72小时时生长抑制率达78.8%,黏附率降低至42.1%,Hoechst33258染色实验发现随浓度增大细胞凋亡的发生增多,核固缩、核碎裂的现象发生越明显.流式细胞仪检测,细胞周期阻滞于GO/G1期,减少增殖细胞在S期的分布.结论:霉酚酸酯对肝癌细胞HepG-2的增长具有明显的抑制作用.     

灵芝多糖GLP 抑制小鼠骨肉瘤细胞S-180 在体内生长的作用机制

目的:探讨灵芝多糖成分(GLP)抑制肿瘤的作用机制。方法:在小鼠右腋皮下接种1×106TC-1细胞后7天后,用100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg 3种剂量给小鼠口服灌胃给药20天,然后观察肿瘤的重量,并用ELISA检测小鼠血清中IL-2、IL-6和TNF-alpha,用流式细胞仪检测其外周血中CD4+和CD8+。结果:100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg 3种剂量给小鼠口服灌胃给药20天,与对照组比较,抑瘤率分别可以达到53%、59%和58%,P<0.05;小鼠外周血血清中的IL-2从1.27ng/mL提高到了2.88ng/mL,P<0.05;TNF-α从1.05ng/mL提高到了1.82ng/mL,P<0.05;而IL-6则没有明显的变化。CD4+细胞水平升高(从54.80%提高到了58.27%),但差异无统计学意义(P>0.05);CD8+细胞明显增多(从24.15%提高到了45.36%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GLP有明显抑瘤作用,但抑瘤作用与GLP剂量不存在依赖关系。GLP对肿瘤细胞生长的抑制是通过提高小鼠的细胞免疫能力来实现,而并非直接杀伤肿瘤细胞。