跑台运动对攻击行为大鼠内侧下丘脑和中脑导水管周围灰质5-HT1A受体、5-HT2A受体蛋白表达的影响

目的:探讨跑台运动对攻击行为大鼠内侧下丘脑(MH)和中脑导水管周围灰质(PAG)5-HT1A受体、5-HT2A受体蛋白表达的影响,为研究运动对攻击行为改善的神经生物学机制提供实验基础.方法:3月龄雄性SD大鼠40只,体重160～180 g,随机分为4组:安静组(A)、攻击模型组(G)、攻击跑台组(GP)、入侵组(R)....     

上海地区汉族人5-HT2a受体基因T102C多态性的基因频率分布

为了揭示中国汉族人5-HT2a受体基因T102C多态性基因频率的分布,我们随机抽取了226例汉族健康人作研究,用限制性片段长度多态性(RFLPs)技术测定研究对象的基因型和等位基因。结果发现汉族正常人5-HT2a受体基因T102C多态性基因型频率依次为:A1/A2=0.5044,A1/A1=0.2965,A2/A2 =0.1991,两种等位基因频率依次为:A1=0.5487,A2=0.4513,杂合度H=0.50 44、期望杂合度h=0.4953,多态信息量PIC=0.3726,表明T102C多态性具有合适信息,对疾病的关联研究,法医学鉴定有一定的价值。 Abstract:To investigate the distribution about genotype and allele frequencies of T102C polymorphism in the 5-HT2a receptor gene Chinese Han population,the genotypes and alleles of 226 healthy person were examined with Restriction Fragment Length Polymorphisms(RFLPs)technique.The genotype frequencies are as follows:A1/A2=0.5044,A1/A1=0.2965,A2/A2=0.1991,respectively,and the allele frequencies are as follows:A1=0.5487,A2=0.4513,respectively.The heterozygosity(H)is 0.5044,the expected heterozygosity(h)is 0.4953,and the Polymorphism Information Content(PIC)is 0.3726.Our findings suggest that the T102C polymorphism in 5-HT2a receptor gene may have suitable information to be used for association study or forensic identification.     

重庆居民5-HT2A基因多态性与原发性高血压关系

以聚合酶链PCR法分析重庆市一般人群的5-HT2A基因C102T多态性(样本总数348人,其中高血压组:HT=137例,非高血压组:NT=211例)的临床指标间的相关性与频率分布。了解重庆地区汉族人群5-羟色胺受体2基因(5-hydroxytryptamine receptor gene,5-HT2A)C102T多态性与原发性高血压病(essential hypertension,EH)的关系。卡方检验结果显示5-HT2A的C102T基因多态性(P=0.549)与等位基因频率(P=0.263)在HT与NT之间没有显著性统计学差异;5-HT2A的C102T基因多态性与高血压logistic回归模型分析结果显示也未见显著性差异,卡方值(Wald)为0.399;比值比为0.884;95%的可信区间为0.603~1.296,P值为0.528。一般线性模型分析结果:5-HT2A基因C102T多态性与收缩压,舒张压之间没有显著性统计学差异,PSBP=0.868,PDBP=709。5-HT2A的C102T多态性可能与重庆汉族人群EH无关。     

5-HT2和5-HT3受体在外周初级感觉神经末梢痛反应和痛调制中的相互作用

目的：探讨5-HT2和5-HT3受体亚型在5-HT引起外周痛反应和痛调制中的相互作用及其机制;方法：在大鼠三又神经节神经元标本上应用全细胞膜片钳技术记录5-羟色胺激活电流（15_HT）,并结合痛行为实验进行观察。结果：在大多数受检细胞（54／88,61．4％）特别是中、小型细胞外加5-HT可引起一快去敏感的内向电流,此内向电流能被5-HT,受体特异性激动剂2-甲基-5-羟色胺所模拟,被5-HT3受体拮抗剂ICS250-930可逆性阻断,而5-HT2受体激动剂α-甲基-5-羟色胺则有明显增强15-HT的作用,5-HT1受体激动剂R-（＋）-UH301无明显反应。在进一步的整体清醒动物的行为学试验中我们观察到,大鼠后肢掌底皮下注射5-HT（10-5,10-4和10-3mol／L）引起浓度依赖性的痛行为反应,而用5-HT2和5-HT3受体特异性拮抗剂Cyproheptadine和ICS250-930分别阻断相应受体亚型后,5-HT引起的痛行为反应的强度序列为：5-HT〉5-HT＋ICS〉5-HT＋Cyp。结论：本文结果提示：5-HT所引起的痛反应中,在初级感觉神经元水平5-HT3受体可能仅起着启始作用,而5-HT,受体则在伤害性信息的维持和调制过程中发挥更大的作用。     

多发性骨髓瘤患者13q14．3区域一个候选抑瘤基因MYETSl的克隆与序列分析

为克隆位于多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者染色体13q14．2～13q21．1区域候选抑瘤基因．通过生物信息学分析获取疾病基因定位区域内代表新基因的ESTs,并运用半定量RT—PCR检测它们在正常人与MM患者骨髓组织中的表达水平,发现一条在MM患者骨髓组织中明显表达下调的EsT(cenBank收录号：H86826)．Northern印迹杂交显示H86826在骨髓组织中转录本大小为1．5kh．通过购买商品化克隆IM．AGE223589测序获得了H86826所代表的基因的1491bp全长cDNA序列(GenBank收录号：AY368652)．人类基因组命名委员会将其命名为MYETSl(myeloma tumor suppressor1)．生物信息学分析其为一个编码分子质量为15．1kD、等电点为6．13的135个氨基酸的新基因．该基因的功能正在进一步的研究之中．     

两种基因编码的探针特异性检测小鼠脑5-HT信号的比较

摘要 目的：五羟色胺（5-HT）对中枢神经系统发挥着重要的调控作用,其功能失调与许多精神类疾病密切相关,因此开发能实时灵敏检测5-HT的工具对研究此类疾病及研发靶向药物至关重要。最近新开发的iSeroSnFR和GRAB_5-HT1.0两类5-HT荧光探针,具有细胞特异性、反应灵敏以及高时空分辨率等显著优势,已经成为深入探究5-HT作用机制的有力工具。本研究旨在探究荧光探针iSeroSnFR和GRAB_5-HT1.0哪种能更有效地检测5-HT递质释放及动态变化,从而为后续优化5-HT荧光探针和利用这一有力工具解析神经疾病中的递质异常提供新思路。方法：将iSeroSnFR或GRAB_5-HT1.0探针的基因序列插入到Sindbis病毒表达载体,然后把病毒分别转染到培养的小鼠离体脑片的海马CA1区,比较两种探针在神经元中的表达差异;并检测其对外源性5-HT药物诱导产生的荧光反应。另外,将上述病毒转染到急性小鼠脑片中缝核（DRN）区,给与电刺激检测两种探针响应内源5-HT释放的荧光信号差异。结果：在转染iSeroSnFR的海马CA1区神经元中均有荧光表达,但细胞边界不清晰;而转染了GRAB_5-HT1.0的神经元细胞膜上表达有强烈的绿色荧光信号。用1 μM 5-HT处理培养的小鼠脑片海马CA1神经元时,iSeroSnFR探针没有明显的荧光强度变化;而GRAB_5-HT1.0探针产生的荧光强度显著增强;用1 mM 5-HT处理时,iSeroSnFR探针产生一定强度的荧光反应,但响应幅度弱于GRAB_5-HT1.0探针。另外,利用上述病毒转染急性小鼠脑片DRN区,通过电刺激诱导内源性5-HT释放,发现仅在表达GRAB_5-HT1.0探针的DRN神经元中观察到显著增强的荧光反应;而iSeroSnFR探针几乎未产生明显荧光变化。结论：在小鼠脑中,GRAB_5-HT1.0荧光探针对外源性及内源性的5-HT的亲和力更高、灵敏度更强。     

紫杉醇合成相关候选基因A02725的克隆及转基因菌株的构建

真菌紫杉醇合成相关基因的功能研究是揭示真菌紫杉醇合成机制的关键。为了揭示产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A02725对宿主紫杉烷类合成的作用,本研究克隆了候选基因A02725的DNA全长序列(1 524 bp);生物信息学预测结果表明该基因编码蛋白为亲水蛋白,含508个氨基酸,无信号肽和跨膜结构,与牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)具有79%的一致性;进一步构建该基因的超表达载体并转化枝状枝孢霉MD2,通过抗性筛选以及Southern blot检测,共获得27株转基因菌株,其中5株转基因菌株的外源基因是以单拷贝方式整合。该结果为深入分析超表达候选基因A02725对宿主紫杉烷类合成的影响奠定了基础。     

人PRMT5基因的生物信息学分析

PRMT5 (Protein arginine methyltransferase 5)已经广泛地作为组蛋白甲基转移酶修饰H4R3、H2AR3和H3R8,从而潜在地影响多个信号传导途径。本研究为了对人PRMT5基因进行生物信息学方面的深入分析,以PRMT5基因序列及编码蛋白序列为材料,通过生物信息学方法分析了PRMT5基因的DNA序列、启动子及CpG岛、RNA结构,及该蛋白的理化性质、亚细胞定位、信号肽与跨膜区域、互作蛋白、系统发育等。研究结果表明,人PRMT5在物种间的保守性相对较高,位于染色体14q11.2,大小为1 911 bp,潜在核心启动子在1 014~1 064 bp,没有预测到CpG岛。PRMT5基因编码637个氨基酸残基,分子量为10 157 Da,等电点为5.88,不稳定系数是44.33;该蛋白更可能定位于细胞质,无明显的信号肽及跨膜结构;主要的二级结构元件是α-螺旋结构和无规卷曲,包含一个SAM-dependent MTase功能结构域,同时有10个可能的互作蛋白;进化分析表明黑猩猩和猕猴与人PRMT5蛋白亲缘关系最近。     

中国人群5—羟色胺2A受体基因中T102C多态性与精神分裂症的联系

在研究５－羟色胺２Ａ受体基因多态性与精神分裂症的关联分析中,调查了２０２例精神分裂症患者及２０２例正常对照。各相匹配组间比较未发现基因型和等位基因频率的显著性差异。结果提示,在中国人群中５－羟色胺２Ａ受体的静态Ｔ１０２Ｃ突变与精神分裂症之间不存在关联。     

水稻抽穗期QTL定位及候选基因分析

水稻(Oryza sativa)抽穗期是决定产量和品质的重要性状,在育种、制种及引种驯化过程中发挥重要作用。将热研2号(O. sativa subsp. japonica cv.‘Nekken2’)和华占(O. sativa subsp. indica cv.‘HZ’)杂交获得F₁代,经连续多代自交得到120个重组自交系(RILs)群体。在常规水肥管理条件下,对120个RILs株系的抽穗时间进行统计分析。利用已构建好的高密度遗传图谱,对水稻抽穗期相关性状进行QTL定位分析,结果共检测到11个QTLs,分别位于第1、3、4、5、6、8和12号染色体上,其中1个LOD值高达5.75。通过分析QTLs区间内的候选基因,筛选出可能影响两亲本抽穗期的相关基因,并利用实时定量PCR进行基因表达量分析,发现LOC＿Os03g03070、LOC＿Os03g50310、LOC＿Os03g55389、LOC＿Os04g55510、LOC＿Os08g07740和LOC＿Os08g01670共6个基因在双亲间的表达量差异显著,其中LOC＿Os03g50310在Nekken2中的表达量比H...     

二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠行为学及5-HT1AR的调节作用探析

目的:探究藏药二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠行为和5-HT1AR的调节作用。方法:将48只大鼠随机分为假手术组、模型组、二十味沉香丸组、帕罗西汀组。每组各12只。造模后未达到观察时点死亡的大鼠排除本研究,筛选出符合条件的大鼠并通过随机抽样原则补齐动物。造模后每天分别给予相应的药物或生理盐水进行灌胃,灌胃2周后采用旷场实验检测各组剩余大鼠行为学变化。每组各取6只,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测海马组织中5-HT1AR基因和蛋白水平的变化。结果:与假手术组相比较,模型组运动总距离(P0.01)、单次最大运动距离(P0.05)、穿格次数(P0.01)、直立次数(P0.01)、直立时间(P0.01)、修饰时间(P0.01)、修饰次数(P0.05)减少差异有统计学意义,5-HT1AR基因(P0.05)及蛋白表达水平下降;与模型组相比较,二十味沉香丸组运动总距离(P0.05)、穿格次数(P0.05)、直立时间(P0.05)、直立次数(P0.01)增加差异具有统计学意义,且5-HT1AR的基因(P0.05)及蛋白水平表达升高;与模型组相比较,帕罗西汀组穿格次数(P0.05)、运动总距离(P0.05)、直立时间(P0.05)增加差异具有统计学意义,5-HT1AR的基因(P0.01)及蛋白表达水平升高。结论:本实验成功复制了卒中后PTSD模型,所选取的中药二十味沉香丸能在一定程度上改善卒中后PTSD模型大鼠的焦虑样行为,其效用与西药帕罗西汀类似,且作用机制可能与调节5-HT1AR有关。     

小家鼠Pitx2基因的生物信息学分析

目的:对小家鼠Pitx2基因编码蛋白质进行结构和功能预测.方法:利用生物信息学方法和工具对PITX2蛋白质的理化性质、结构功能域和功能分类进行分析.结果:氨基酸残基的组成中丝氨酸含量最高,分子式为C1549H2430N460O483S17,相对分子质量35.8kD,等电点为9.63,具有一定的亲水性;可能为非跨膜蛋白;主要构件为α-螺旋和无规则卷曲;含有一个Hox结构域,推测该蛋白为转录调节因子.结论:通过生物信息学分析,为进一步研究该基因功能奠定基础,也为小鼠作为模式生物在人类的积累性遗传病的研究上提供了理论依据.     

5-HT1B受体亚型对小脑顶核介导的运动行为的影响

目的：探讨5-羟色胺（5-HT）能神经系统在经小脑顶核介导的运动行为中的作用。方法：采用大鼠离体脑片膜片钳及大鼠走步机的行为学测试方法。结果：阻断5-HT_1B受体能够增强小脑顶核兴奋性突触传递,行为学试验中给予5-HT及5-HT_1B受体阻断剂SB224289,发现注射5-HT到小脑顶核后,大鼠在Rota-rod走步机上的持续时间显著延长,而给予其阻断剂SB224289后,能够反转此作用。结论：5-HT很可能通过5-HT_1B受体抑制顶核神经元的兴奋性突触传递从而调节小脑核团神经元环路的活动,继而影响小脑的最终输出,实现对小脑顶核介导的运动平衡和协调能力的调控。     

多发性骨髓瘤患者13q14.3区域一个候选抑瘤基因MYETS1的克隆与序列分析

为克隆位于多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者染色体13q14.2～13q21.1区域候选抑瘤基因,通过生物信息学分析获取疾病基因定位区域内代表新基因的ESTs,并运用半定量RT-PCR检测它们在正常人与MM患者骨髓组织中的表达水平,发现一条在MM患者骨髓组织中明显表达下调的EST(GenBank收录号:H86826).Northern印迹杂交显示H86826在骨髓组织中转录本大小为1.5kb.通过购买商品化克隆IM-AGE223589测序获得了H86826所代表的基因的1491 bp全长cDNA序列(GenBank收录号:AY368652),人类基因组命名委员会将其命名为MYETS1(myeloma tumor suppressor 1).生物信息学分析其为一个编码分子质量为15.1 kD、等电点为6.13的135个氨基酸的新基因.该基因的功能正在进一步的研究之中.     

卵巢早衰候选基因的突变研究进展

卵巢早衰病因复杂, 多数病例病因不明。在已知的病因中, 遗传因素非常重要。卵巢早衰不但可导致不孕症, 患者的低雌激素水平还增加了患骨质疏松症和冠心病的危险。目前临床上的主要治疗措施包括激素替代治疗和供卵治疗不孕症等, 但效果都不理想。鉴定卵巢早衰的致病基因是从根本上治疗和预防该病的基础。目前已发现在X染色体上和常染色体上多个基因与之相关, 文章综述了近年来对卵巢早衰候选基因的突变分析情况, 旨在从分子水平分析研究卵巢早衰的发病机制提供基础。     

5-HT2A受体在尼可刹米增强新生大鼠延髓脑片呼吸放电中的作用

本文旨在探讨中枢呼吸兴奋剂尼可刹米对新生大鼠基本节律性呼吸的产生和调节的影响及5-HT2A受体在其中的作用.制作新生大鼠离体延髓脑片标本,含面神经后核内侧区(the medial region of the nucleus retrofacialis,mNRF)并保留舌下神经根,灌流改良Kreb'S液(modified Kreb'S solution,MKS),记录舌下神经根呼吸相关节律性放电活动(respiratory-re-lated rhythmic discharge activity,RRDA),观察不同浓度尼可刹米、5-HT2A受体特异激动剂2,5-二甲氧基-4-碘苯基丙烷[1-(2,5-dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropane,DOI]、5-HT2A受体特异拮抗剂酮舍林(ketanserine)以及联合使用尼可刹米和酮舍林对舌下神经根RRDA的影响.结果显示,尼可刹米在0.5～7μg/mL时对延髓脑片RRDA有兴奋作用,在5 μg/mL时对吸气时程(inspiratory time,TI)、放电积分幅度(integral amplitude,IA)、呼吸周期(respiratory cycle,Re)等呼吸指标综合效果最显著.DOI明显延长TI、增强IA、缩短RC,对RRDA有兴奋作用.酮舍林明显缩短TI、减弱IA、延长RC,对RRDA有抑制作用.联合使用DOI和酮舍林对RRDA无明显作用.酮舍林可完全阻断尼可刹米对RC的作用,部分阻断尼可刹米对IA的作用,对尼可刹米引起的TI变化无明显影响.结果提示,尼可刹米增强新生大鼠离体延髓脑片舌下神经根RRDA,5-HT2A受体可能足尼可刹米作用途径之一.     

类固醇5-α还原酶样基因Srd5α2l2的克隆及表达分析

采用表达序列标签（EST）介导的基因克隆和表达谱分析,从小鼠心脏克隆了一个cDNA为2 348 bp,主要在心脏表达的新基因Srd5α2l2（GenBank Acc No.AF548365）.该基因由12个外显子组成,3′非翻译区富含ATTTA序列,最大开放阅读框编码一个由361个氨基酸组成的假定蛋白,该蛋白质C端含有类固醇5-α还原酶的保守结构域（3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase,STEROID_DH）.生物信息学分析表明,人cDNA 克隆DKFZp313D0829（AL833108）是Srd5α2l2的人同源基因.经同源性检索,支持Srd5α2l2的全部41条EST中25条来自小鼠心脏组织.RT-PCR检测初步证实,该基因主要在心脏中表达,而在其他组织中不表达或弱表达.综合考虑Srd5α2l2的序列特征和表达谱,Srd5α2l2可能在心脏组织中发挥重要作用.     

5-HT1A受体对新生大鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的调制

本研究探讨5-HT1A受体在延髓基本节律性呼吸放电发生和调节中的作用。以改良Kreb＇s液恒温灌流新生Sprague-Dawley大鼠离体延髓脑片标本,稳定记录与之相连的舌下神经根的呼吸节律性放电活动（respiratory rhythmical discharge activity,RRDA）后,第一组在灌流液中分别单独给予5-HT1A受体的特异性激动剂8-羟四氢萘[（＋／-）-8-hydroxy-2-（di-N-propylamino）tetralin hydrobromide,8-OHDPAT]和特异性拮抗剂多次甲基多苯基多异氰酸酯[4-iodo-N-[2-[4-methoxyphenyl]-1-piperazinyl]ethyl]-N-2-pyridynyl-benzamide hydrochloride,PMPPI];第二组分别先后给予8-0HDPAT和8-0HDPAT＋PMPPI,观察舌下神经根RRDA的变化,探讨5-HT1A受体对其调节作用。结果显示,给予8-OHDPAT后,呼吸周期（respiratory cycle,RC）和呼气时程（expiratory time,TE）显著延长,放电的积分幅度（integral amplitude,IA）持续降低,吸气时程（inspiratory time,TI）无明显变化;给予PMPPI后RC、TI和TE明显缩短,舌下神经根IA无明显变化,且8-OHDPAT的作用可部分被PMPPI逆转。结果提示,5-HT1A受体参与了哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节。     

水稻早衰突变体LS-es1的基因定位及候选基因分析

衰老是植物发育末期自主发生且不可逆的适应性反应, 叶片早衰相关分子机制研究对水稻(Oryza sativa)遗传改良以及抗衰老品种培育有重要意义。LS-es1是通过EMS诱变粳稻品种TP309获得的稳定遗传的早衰突变体。对LS-es1及其野生型的表型观察和生理生化分析表明, LS-es1叶片中积累了大量活性氧且细胞死亡更多, 同时LS-es1与产量相关的农艺性状均显著下降, 这也验证了LS-es1早衰的特征。对LS-es1及其野生型幼苗进行外源激素处理, 结果表明LS-es1对水杨酸(SA)、脱落酸(ABA)和茉莉酸甲酯(MeJA)更敏感。用图位克隆方法将LS-es1基因定位在水稻第7号染色体长臂46.2 kb区间内, 该区间共包括8个开放阅读框(ORF)。对该区间内的基因进行生物信息学分析, 结果发现Os07g0275300和Os07g0276000两个候选功能基因与早衰途径相关, 并且这2个基因的表达量在野生型和突变体中差异较大。研究结果为进一步克隆LS-es1基因并深入研究其生物学功能奠定了基础。     

玉米花丝颜色基因qSC10精细定位及候选基因分析

为解析玉米花丝颜色性状的遗传机理,挖掘其候选基因及等位变异,本研究以郑58和昌7-2为亲本构建的重组自交系(RIL)群体为材料,对控制玉米花丝颜色QTL进行定位.利用郑58与控制玉米粉色花丝主效位点qSC10的近等基因系qSC10-NIL杂交构建F3作图群体,对主效位点qSC10进行精细定位,根据qSC10定位区间和N...