宋内氏痢疾杆菌O-SP-TT结合疫苗的制备及其免疫学特性的研究

宋内氏痢疾杆菌（S.Sonnei)的一个重要保护性抗原是菌体抗原（O抗原）即细菌细胞壁中的脂多糖（LPS）成分,已证实血清中足够水平的抗LPS IgG抗体抗体即能对该菌提供免疫保护作用。本文选用Westphal热酚法提纯宋内氏痢疾菌LPS,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱免疫原性的O-特异性多糖（O－SP）,然后采用化学方法即通过连接剂己二酸二肼（ADH）将其共价结合到破伤风类毒素（TT）上,共制备得到了三批宋内氏痢疾杆菌O－SP－TT结合疫苗。经生化和免疫学方法检测证实我们提纯的LPOS,OSP及其合成的L－SP－AH衍生物,O－SP－TT结合物均具有宋内氏痢疾杆菌O抗原特异性,同时其核酸和杂蛋白质含量低（≤2%),表明纯度较高。同时经小鼠免疫原性试验证实三批结合物免疫小鼠后产生的抗LPS IgG抗体滴度均比单一O－SP免疫后产生的要高出10倍以上,且结合物再次注射后存在加强应答。补体介导的体外杀菌力试验表明结合物免疫小鼠后诱导产生的血清抗LPSIgG抗体对宋内氏痢疾杆菌具特异性杀菌活性。本文结果表明宋内氏痢疾杆菌O-SP-TT结合疫苗可望作为一种有效的侯选痢疾疫苗做进一步的大规模人体观察。     

志贺氏I型痢疾杆菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性

从志贺氏I型痢疾杆菌LPS中分离纯化出O SP半抗原 ,以ADH为连接剂将其与TT结合形成O SP TT结合疫苗 ,并用此结合疫苗免疫NIH小鼠 ,结果显示单独使用O SP免疫后 ,小鼠血清中没有抗LPS抗体产生 ,而用O SP TT免疫后小鼠血清中产生了抗LPSIgG和IgM抗体 ,且IgG抗体水平高于IgM抗体 ;O SP TT免疫组第二次和第三次免疫后IgG抗体水平均有显著的升高 (P <0 0 1) ,但第二次和第三次免疫后血清IgM抗体虽有升高 ,但与前一次免疫相比均无显著差异 (P >0 0 5 ) ,表明O SP TT结合疫苗具有加强免疫应答效应。补体介导的体外杀菌活性试验结果证明 ,O SP TT免疫血清在 1∶16 0倍稀释后仍对志贺氏I型痢疾杆菌具有特异性杀菌活性。     

志贺氏Ⅰ型痢疾杆菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗 …

从志贺氏１型痢疾村菌ＬＰＳ中分离纯化出料捩的,以ＡＤＨ为连接剂将其与ＴＴ结合形成Ｏ－ＳＰ－ＴＴ结合疫苗,并用此结合疫苗免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示使用Ｏ－ＳＰ免疫后,小鼠血清中没有抗ＬＰＳ抗体产生,而用Ｌ－ＳＰ－ＴＴ免疫后鼠血清中生了抗ＬＰＳＩｇＧ和ＩｇＭ抗体,且ＩｇＧ抗体水平高于ＩｇＭ抗体;Ｏ－ＳＰ－ＴＴ免疫组等二次和第三次免疫后ＩｇＧ我有显著的升高（Ｐ〈０．０１）,但第二次和第三次免疫后血清ＩｇＭ     

甲型副伤寒菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备 …

以脱毒后去除类脂Ａ的甲型副伤寒杆菌高分子量Ｏ－ＳＰ１和低分子量Ｏ－ＳＰ２为特异笥抗原,以破伤风类毒素（ＴＴ）为蛋白质载体,用已二酸二肼（ＡＤＨ）作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示单独注射Ｏ＿ＳＰ１或Ｏ－ＳＰ２免疫小鼠后,均不能刺激小鼠产生抗ＬＰＳ抗体;而用Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ和Ｏ－ＳＰ２－ＴＴ结合物免疫后,小鼠血甭中均产生了特异性抗－ＬＰＳ－ＩｇＧ抗体,且Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ免疫组     

甲型副伤寒菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性

以脱毒后去除类脂A的甲型副伤寒杆菌高分子量O SP1和低分子量O SP2 为特异性抗原 ,以破伤风类毒素 (TT)为蛋白质载体 ,用己二酸二肼 (ADH)作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫NIH小鼠 ,结果显示单独注射O SP1或O SP2 免疫小鼠后 ,均不能刺激小鼠产生抗 LPS抗体 ;而用O SP1 TT和O SP2 TT结合物免疫后 ,小鼠血清中均产生了特异性抗 LPSIgG和IgM抗体 ,且O SP1 TT免疫组血清中IgG抗体水平明显高于O SP2 TT免疫组 ,两组结合物免疫血清中抗体类型以IgG为主。O SP1 TT结合物免疫组第二次免疫和第三次免疫后IgG抗体水平均较前一次有显著升高 (p<0 0 1)说明 ,O SP1 TT结合物具有加强应答效果。补体介导的体外杀菌试验证明 ,O SP1 TT与O SP2 TT结合物免疫血清具有特异性杀菌活性。     

14型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的研制

将14型肺炎球菌的荚膜多糖(PS)与破伤风类毒素(TT)通过化学方法结合,制备成多糖-蛋白结合疫苗(PS14-TT)。用该结合疫苗免疫小鼠,在小鼠体内产生了高滴度的PS-IgG抗体和TT-IgG抗体,且再次注射后有加强应答效应,表明制备的结合疫苗保留了完好的抗原性,具有胸腺依赖性抗原的特性。     

细菌性多糖——蛋白质结合疫苗的免疫学

本文对细菌性表面多糖（ＣＰＳ,Ｏ－ＳＰ）的免疫原性,影响多糖免疫原性的因素、多糖－蛋白质的免疫学机理进行了综述。     

铜绿假单胞菌6型O-特异性多糖与破伤风类毒素结合物免疫原性研究

目的研制有效防治铜绿假单胞菌感染的疫苗。方法用热酚水法提取铜绿假单胞菌6型(IATS 6)菌株的脂多糖(LPS),去除类脂A并纯化O-特异性多糖(O-SP),用CDAP活化O-SP,己二酸二肼作连接臂,在EDAC作用下,与破伤风类毒素结合制备出O-SP-TT结合物并对该结合物进行小鼠免疫原性试验和免疫保护性试验。结果制备的结合物在小鼠免疫原性试验中,产生了高效价的IgG抗体,与O-SP试验组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫保护性试验表明,结合物免疫小鼠能很好的保护5～10 LD50活菌的腹腔攻击。结论该结合物有望成为防治IATS 6型铜绿假单胞菌感染的有效疫苗。     

C群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-TT结合疫苗的制备及其在小鼠体内免疫原性的研究

将C群脑膜炎球菌荚膜多糖以ADH作为间隔剂与TT结合形成GCMP-TT结合疫苗,然后用此结合疫苗免疫NIH小鼠,结果显示使用GCMP免疫小鼠后仅能产生较低水平抗GCMP的IgG抗体,而用GCMP-TT免疫后小鼠血清中产生了较GCMP免疫显著增高抗GCMP的IgG抗体,并且GCMP-TT组第二次和第三次免疫后与初次免疫相比,IgG抗体水平均有显著升高(P<0.01),表明GCMP-TT结合疫苗具有免疫记忆和再次免疫加强应答效应。补体介导的血清抗体体外杀菌试验结果证明,GCMP-TT结合疫苗组免疫小鼠诱导的抗体IgG比GCMP组具有增强的体外杀菌活性。     

肺炎链球菌18C型糖蛋白结合物的制备及其免疫原性

制备肺炎链球菌18C型荚膜多糖－破伤风类毒素结合物（CPS－TT）,测定结合物的理化性质,抗原特异性及其在动物中的免疫原性。结果显示,结合物能与相应的多糖和破伤风抗血清形成明显的沉淀线,蛋白／多糖比率为1．86,结合物分子大小（Kd值）为0．058。注射小鼠后可诱导明显的抗体应答,而且随着注射针次的增加,抗体反应水平明显增高,显示加强效应。结果表明,制备的肺炎链球菌糖蛋白结合物抗原性良好,具有胸腺依赖性的特性,在小鼠中显示较好的免疫原性。     

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性研究

采用溴化氰(CNBr)活化多糖,以无水己二酸二肼(ADH)作为连接剂,1乙基13(3二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDAC)为偶联剂制备A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)与破伤风类毒素(TT)的结合物,经皮下免疫NIH小鼠,用ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗载体蛋白的IgG抗体水平。用补体介导的体外杀菌试验检测血清中GAMP抗体的杀菌活性。结果显示,实验中制备的多糖衍生物和多糖蛋白质结合物都具有GAMP抗原特异活性。结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GAMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,产生再次应答。结合物免疫小鼠所诱生的血清GAMP抗体较之多糖组具有更强的体外杀菌活性。表明此方法制备的结合物可获得优于多糖的、稳定的特异免疫原性。     

冻干A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗安全性和免疫原性观察

为了评价冻干A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗(MPV)的安全性和免疫原性,按随机、盲法的原则,评价疫苗免疫后不良反应发生率、抗体阳转率及抗体几何平均滴度(GMT)。将606名健康观察者分为2～5岁、6～12岁、13～17岁、18～60岁四个年龄组,结果显示,该疫苗全身反应发生率2.64%,局部反应发生率1.32%,四个年龄组疫苗免疫后杀菌抗体阳性率分别为100%、100%、99.3%和100%,免疫后A群杀菌抗体GMT分别为1:250.47、1:190.61、1:144.22和1:205.79,免疫后C群杀菌抗体GMT分别为1:273.33、1:551.18、1:788.26和1:809.81,冻干A+C群多糖疫苗在≥2岁人群中具有良好的安全性和免疫原性,建议推广使用A+C群MPV。     

痢疾福氏2a asd基因的克隆及其序列分析

本文根据大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２ａｓｄ基因两侧序列设计了一对引物,用全菌ＰＣＲ扩增了福氏２ａ Ｔ３２株的ａｓｄ基因及其两侧序列。对ＰＣＲ产物的初步结果表明,在ａｓｄ基因两端存在ＢａｍＨ Ｉ位点。为了防止由ＰＣＲ扩增带来的差错,我们又从福氏２ａ Ｔ３２株染色体中克隆了全长的ａｓｄ基因。序列分析了结果表明,福氏２ａＴ３２株ａｓｄ基因的序列与Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１２的完全一致,全长１６８０ｂｐ,其两侧     

福氏志贺痢疾杆菌硫胺素单磷酸激酶(ThiL)表达纯化及晶体生长研究

硫胺素单磷酸激酶(ThiL)在ATP存在下催化硫胺素单磷酸(TMP)形成硫胺素焦磷酸(TPP)和ADP,硫胺素焦磷酸就是维生素B1的活性形式。硫胺素单磷酸激酶属于一个小的ATP结合蛋白超家族成员。将来源于福氏志贺痢疾杆菌2a(301株)ThiL基因构建入pET-22b(+)表达载体,在大肠杆菌中得到高效表达,经过两步纯化,得到高纯度蛋白,用于晶体生长,经过对其晶体生长条件进行摸索和优化,得到了能用于X-射线衍射的单晶,为其结构解析、催化机理研究和药物设计提供了基础。