TLR9激动剂对约氏疟原虫体液免疫记忆的影响

为探讨TLR9激动剂对疟疾体液免疫记忆的影响,用非致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠,感染前2 d注射TLR9激动剂CpGl826,90 d后进行二次感染。薄血膜染色法观察红细胞感染率,流式细胞术检测脾细胞悬液中记忆性和活化性B细胞百分比,双夹心ELISA法检测特异性抗体水平。结果显示,二次感染前,TLR9激动剂处理鼠记忆性和活化性B细胞以及抗体水平略高于对照组;二次感染后,其再感染发生率和虫血症水平均略低于对照组;活化性B细胞和抗体以及记忆性B细胞也分别于二次感染后1 d和3 d出现了有意义的升高,且升高幅度均略高于对照组。表明TLR9激动剂对约氏疟原虫感染后体液免疫记忆的建立和维持有一定促进作用。     

TLR9激动剂对约氏疟原虫记忆性T细胞的影响

为探讨TLR9激动剂对疟疾记忆性T细胞的影响,用非致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠,感染前2 d注射TLR9激动剂Cp Gl826,90 d后进行二次再感染。薄血膜染色法观察虫血症,流式细胞术检测脾细胞悬液中记忆性和活化性T细胞百分率,双夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子水平。结果发现,再感染前,TLR9激动剂注射组记忆性T细胞百分率(12.98%)高于对照组(10.16%);再感染后,其再感染发生率(50%)和峰值血症水平(0.64%)均低于对照组(70%和0.82%);而活化性T细胞和IFN-γ水平于再感染后1 d即出现了显著升高,分别达到6.62%和372.74 pg/m L,其升高幅度高于对照组(5.04%和216.17 pg/m L)。这表明,TLR9激动剂对约氏疟原虫记忆性T细胞的产生和维持有一定促进作用。     

约氏疟原虫红外期体外培养的研究

通过药物二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，取肝癌白色结节用胶原酶消化，体外培养建立肝癌细胞系，筛选出对约氏疟原虫子孢子敏感的大鼠肝癌细胞系，建立了大鼠肝癌细胞－约氏疟原虫体外培养系统。纸氏疟原虫子孢子接种单层培养的肝癌细胞，４８ｈ可见红外期裂殖体，７２ｈ后培养细胞胰酶消化，消化下的细胞及培养上清一半离心，悬液接种健康小鼠，可使之感染疟疾。     

大蒜素对致死型约氏疟原虫鼠疟模型CD4+活化/凋亡T细胞的影响

探讨大蒜素对致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii 17XL,P.y 17XL)感染BALB/c小鼠T细胞免疫应答的影响。P.y 17XL感染后第0~2天每日口服给予不同浓度大蒜素(3 mg/kg或9 mg/kg)处理;动态监测各组小鼠原虫血症水平和生存期;感染后第0天、第3天和第5天无菌提取小鼠脾细胞,FACS检测小鼠活化T细胞(CD4~+CD69~+)、凋亡CD4~+T细胞(7AAD~-Annexin V~+)数量变化;ELISA检测脾细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α的水平。结果显示:与NC组相比,大蒜素处理组能降低感染小鼠的原虫血症水平,延长生存期。大蒜素处理能提高感染小鼠活化T细胞的数量,降低凋亡T细胞数量,并能提高脾细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α的水平。大蒜素能在感染早期促使宿主建立有效的Th1免疫应答,从而抑制红内期P.y 17XL疟原虫感染进程。     

Listr1遗传位点影响小鼠对约氏疟原虫易感性的研究

探讨Listr1遗传位点影响小鼠对疟原虫易感性的可能性及其初步作用机制。致死型约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii17XL,P.y17XL)感染C.B6By-Listr1小鼠(BALB/c小鼠基因背景下引入C57BL/6小鼠Lis-tr1遗传位点的同类系小鼠)和BALB/c小鼠,分析二者生存率和感染率的差异;HE染色分析P.y17XL感染后第5天C.B6By-Listr1小鼠和BALB/c小鼠肝脏组织损伤情况;定量PCR法检测P.y17XL感染后小鼠肝脏组织第1、2、5天IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达含量。结果显示,P.y17XL感染后4~8dC.B6By-Listr1小鼠虫血症水平显著高于BALB/c小鼠(P<0.05)。C.B6By-Listr1小鼠于感染后7~9d全部死亡;而半数BALB/c小鼠于感染后8~9d死亡,其余BALB/c小鼠至感染后第13天仍存活,两种小鼠生存率差异具有统计学意义(P<0.01)。C.B6By-Listr1小鼠P.y17XL感染后第5天肝组织HE染色可见到明显的疟色素沉积;而BALB/c小鼠全片基本未见到疟色素的沉积。P.y17XL感染后第2天BALB/c小鼠肝组织IL-6(P<0.05)、TNF-α(P<0.05)mRNA水平显著高于C.B6By-Listr1小鼠。结果表明Listr1遗传位点可以影响小鼠对疟原虫的易感性,与肝脏固有免疫相关。     

TLR4激活剂对约氏疟原虫感染早期免疫应答的影响

通过外源性给予LPS,探讨TLR4在疟疾感染早期免疫应答的作用特点及其免疫调节作用。通过Plasmodium yoelii 17XL感染的BALB/c小鼠建立鼠疟模型并在感染前给予LPS,于感染第0、3和5天制备脾细胞悬液,通过流式细胞术检测脾细胞悬液中TLR4+DCs和Tregs百分含量;ELISA方法检测脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-10水平。结果显示,LPS处理能够显著延长宿主生存期,降低原虫血症水平,同时显著提升脾上清中的IFN-γ水平,降低抑炎性细胞因子IL-10水平。在感染早期,LPS处理可诱导Th1型免疫应答的有效建立,明显遏制P.y 17XL红内期疟原虫的感染进程。     

约氏疟原虫蚊期体外培养：动合子和动合子形成的扫描电镜观察

为了开展疟疾防治以及疟原虫生物学的研究,进一步了解在体外培养中疟原虫的发育规律、形态结构等生物学特性,我们于1985年对离体培养的约氏疟原虫约氏亚种动合子和动合子形成进行了扫描电镜的观察。 材料和方法 约氏疟原虫约氏亚种(Plasmalium yoelii yoelii)用血传和蚊传保种。在昆明株小鼠(KM/AMS)体内多次血传做为供血鼠。C_(57)6JB/ax 小鼠保种。定期感染斯氏按蚊(Anpheles stephensis)MEM     

约氏疟原虫红外期成熟裂殖体的超微结构研究

用细胞色素氧化酶组织化学方法处理感染了约工疟原虫子孢子的大鼠肝脏,通过透射电镜研究红外期裂殖体的超微结构。在接种子孢子后４８小时的标本中发现一成熟裂殖体,外周仍由一寄生虫质膜包裹,膜下有许多小泡,粗面内质肉、圆形或蚕豆形具明显嵴的线粒体,以及大量成熟裂殖子。     

左旋精氨酸上调约氏疟原虫感染DBA/2小鼠的抗体应答效应

探讨左旋精氨酸（L-Arginine,L-Arg）对约氏疟原虫（Plasmodium yoelii17XL,P.y17XL）感染DBA/2小鼠体液免疫应答的调节效应。于P.y17XL感染前7 d,连续每日给予DBA/2小鼠L-Arg（1.5 g/kg体重）灌胃预处理,动态观察各组感染小鼠原虫血症水平和生存率;于感染后第0、8和10天分别提取小鼠脾细胞,流式细胞术检测DBA/2小鼠浆细胞分泌IgG1和IgG2a的水平。与NC组比较,L-Arg能够显著降低感染小鼠的原虫血症水平,自愈时间提前。感染后8 d和10 d,L-Arg组CD138＋B220＋IgG1＋细胞数量出现有意义的增加,感染后10 d,L-Arg组CD138＋B220＋IgG2a＋细胞数量明显升高。L-Arg处理可诱导DBA/2小鼠建立更加有效的抗体免疫应答,明显加速DBA/2感染小鼠清除疟原虫。     

重组IL-33在致死型约氏疟原虫感染中对细胞因子表达的影响及意义

探讨IL-33作为外源性细胞因子对致死型约氏疟原虫感染的细胞因子表达的影响及意义。以致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii 17XL,P.y 17XL)感染BALB/c小鼠为研究对象,感染D0-D5腹腔注射重组IL-33,动态观察原虫血症。感染后3 d和5 d,无菌制备脾细胞悬液,P.y 17XL原虫裂解物体外刺激脾细胞培养72 h。采用多因子检测方法对脾细胞培养上清多种细胞因子进行定量分析。与对照组相比,IL-33给药组原虫血症上升缓慢,原虫血症峰值延迟出现。与对照组相比,IL-33给药组脾细胞培养上清IFN-γ、IL-6、TNF-α和IL-18表达明显下调,而IL-5表达水平明显增加。趋化因子MIP-1β、MIP-1α、RANTES和GRO-α表达明显降低。重组IL-33在P.y 17XL感染过程中通过下调趋化因子表达,减少炎症细胞浸润进而降低前炎症细胞因子表达。通过上调IL-5表达,增强嗜酸性粒细胞活性进而发挥控制P.y 17XL原虫增殖的作用。     

脾细胞不同组分在鼠疟感染中相互作用的研究

探讨约氏疟原虫感染后脾细胞不同组分间相互作用对免疫分子分泌的影响。以约氏疟原虫腹腔感染DBA/2小鼠,采用ELISA和Griess实验分别检测感染后第3 d小鼠全脾细胞、巨噬细胞和悬浮细胞培养上清中IFN-γ和NO水平。在不同培养时间组,全脾细胞IFN-γ和NO分泌水平均明显高于单纯巨噬细胞或悬浮细胞;全脾细胞48 h和72 h培养组的IFN-γ水平明显高于24 h培养组,并且其NO的分泌水平随培养时间的延长而显著升高。脾细胞不同组分间的相互作用可明显促进其免疫分子的分泌;NO的分泌依赖于IFN-γ的诱导效应。     

约氏疟原虫配子体形成的形态学特征

应用六氰酸铁钾和锇酸双染色法的透射电镜技术,对红内期疟原虫配子体形成过程中的形态生物学特征进行识别。结果表明,配子体是一渐进发育的单核、惰性(团块样、虫体不活跃)虫体,其核旁有一个由扁平囊和泡状小体极性排列组成的细胞器——高尔基体(Golgi complex),虫体被膜下有嗜锇小体。其雌性配子体的结构特点是核质较致密、内质网丰富和被膜下嗜锇小体多;而雄性配子体却是核质较疏松、线粒体发达、内织网和嗜锇小体少。结论是红内期疟原虫配子体形成与裂体增殖过程中形态结构的明显差别,雌雄配子体在结构与发育上明显的差异,都具有特定的生物学与生态学意义。     

约氏疟原虫Pys48核酸疫苗传播阻断效应的实验研究

探讨约氏疟原虫（Plasmodium yoelii17XL）Pys48核酸疫苗免疫BALB/c小鼠的特异性抗体产生特点及其效应。将Pys48核酸疫苗肌肉内注射免疫BALB/c小鼠,并以空质粒注射组作为对照,3次免疫后通过P.y17XL攻击小鼠;采用ELISA检测免疫后小鼠血清中特异性抗体水平;通过P.y17XL感染小鼠,取其感染后第3天含有配子体的血液进行体外培养,观察合子、动合子的形成数量。ELISA结果显示疫苗免疫组小鼠血清特异性抗体滴度明显高于对照组;而合子、动合子数量明显低于对照组。提示Pys48核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠后可以建立起有效的传播阻断效应。     

夏氏疟原虫感染过程中调节性B细胞的表达变化

调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)是近年来发现的通过分泌IL-10发挥免疫调节作用的B细胞,其在疟疾免疫应答中的作用尚不清楚。利用血液阶段夏氏疟原虫(Plasmodium chabaudi AS,P.c AS)感染的BALB/c小鼠,观察了感染过程中Bregs数量变化及其表面分子表达情况。结果显示,BALB/c小鼠感染P.c AS后红细胞感染率逐渐升高,于感染后第9天达到30%,多数小鼠死亡。脾组织细胞因子IL-10 mRNA水平在感染后显著升高,感染后第5天达到高峰,感染后第8天仍为正常小鼠的10倍左右。CD4+细胞中IL-10+细胞百分比和绝对数量在感染后第5天达到峰值,于感染后第8天回落至正常水平;而CD19+细胞中IL-10+细胞(Bregs)百分比在感染后持续上升,在感染后第8天达到CD19+细胞的5%左右;感染后第5天,脾中CD4+IL-10+细胞绝对数量高于CD19+IL-10+细胞,至感染后第8天,CD19+IL-10+细胞绝对数量显著高于CD4+IL-10+细胞(P﹤0.01),约90%Bregs为CD5-细胞。结果提示,P.c AS感染过程中Bregs显著活化,是感染1周后IL-10的主要产生细胞。     

蛋氨酸脑啡肽对疟疾感染鼠一氧化氮产生的研究

探讨蛋氨酸-脑啡肽(M-ENK)对约氏疟原虫感染早期小鼠脾细胞分泌一氧化氮(NO)的免疫调节效应及相关机制。以不同浓度的M-ENK(单独或与LPS合用)与疟原虫感染后第3dBALB/c或DBA/2小鼠的脾细胞共同培养,通过Griess反应和ELISA法分别检测其上清中NO和IFN-γ的水平。脾细胞与浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK培养后,NO的分泌水平明显升高,并且与LPS联合刺激后其NO的产生进一步增强,但IFN-γ水平均未出现有意义的变化。提示浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK能够促进约氏疟原虫感染小鼠脾细胞NO的产生,该作用与IFN-γ活化巨噬细胞路径可能无关,同时M-ENK对LPS的刺激效应也具有强化作用。     

Sequence analysis of the Rhop-3 gene of Plasmodium yoelii

The 110 kDa/Rhop-3 rhoptry protein of Plasmodium falciparum is non-covalently associated with two other proteins, the 140 kDa Rhop-1 and the 130 kDa Rhop-2. cDNAs encoding Rhop-3 from Plasmodium yoelii were isolated using rhoptry-specific antisera from Plasmodium falciparum, P. yoelii, and Plasmodium chabaudi. The cDNAs encoded peptides with partial homology to the C-terminal region (residues 541-861) of P. falciparum Rhop-3. Core regions of homology to the P. falciparum gene will be useful in determining the biological role of Rhop-3 and its potential as a vaccine candidate for malaria.     

沙门菌- 斑马鱼感染模型用于Th1/Th2 免疫应答的研究

目的:通过构建斑马鱼成鱼感染模型,研究鼠伤寒沙门菌感染对机体Th1/Th2免疫应答的影响。方法:用不同剂量细菌口饲感染8月龄的斑马鱼成鱼,绘制3周生存率曲线。观察各剂量下对成鱼的感染情况,并用实时荧光定量聚合酶链式反应检测肝脏Th1、Th2型细胞相关基因和细胞因子的mRNA转录水平,计算Th2/Th1相对表达量比值。结果:用105 CFU感染2周斑马鱼全部存活,第15天开始出现死亡,且在3周后死亡率达到50%;感染后3周解剖发现,肝脏、脾脏和肠道有明显红肿和糜烂;肝脏Th1、Th2型细胞相关基因和细胞因子mRNA转录水平明显向Th2偏移。结论:用105 CFU鼠伤寒沙门菌口饲感染斑马鱼成鱼构建的模型,能反映机体感染和免疫功能变化,可用于研究体内Th1/Th2免疫应答,为进一步研究鼠伤寒沙门菌感染与免疫机制提供了很好的实验工具。     

Effects of Plasmodium yoelii nigeriensis infection on Anopheles stephensl egg development and resorption

Abstract It has been shown previously that infection with Plasmodium yoelii nigeriensis reduces the number of eggs produced by female Anopheles stephensi. Here we examine the mechanism underlying fecundity reduction. Ovaries from infected and uninfected (control) female mosquitoes were examined12, 24 or 36 h after blood-feeding during the first gonotrophic cycle (replicated) or the second gonotrophic cycle (unreplicated). Follicular development was assessed according to Christophers' stages and the proportions of developing and resorbing follicles per ovary were determined. Resorption of some follicles commenced within 12h of blood-feeding, affecting significantly more follicles in the infected females: 1.1% v. 3.2%. The difference was greatest 36h after blood-feeding: 25% reduction (10 v. 35%) in the first cycle; 16% reduction (9 v. 25%) in the second gonotrophic cycle. The mean speed of oogenesis was also found to be significantly retarded in infected mosquitoes. During the second gonotrophic cycle, for example, only 92–94% of follicles reached stage III by 24 h and stage IV by 36 h in infected females, whereas all the developing follicles of uninfected females reached these stages more or less synchronously in the time specified.