利用RAPD标记分析北美鹅掌楸与鹅掌楸种间遗传多样性

利用ＲＡＰＤ标记技术对鹅掌楸属（Ｌｉｒｉｏｄｅｎｄｒｏｎ Ｌ．）２个现存种鹅掌楸（Ｌｉｒｉｏｄｅｎｄｒｏｎ ｃｈｉｎｅｎｓｅ （Ｈｅｍｓｌ．）Ｓａｒｇ）和北美鹅掌楸（Ｌｉｒｉｏｄｅｎｄｒｏｎ ｔｕｌｉｐｉｆｅｒａ ｌｉｎｎ．）的遗传多样性进行分析,结果表明：２个种都有较高的遗传多样性,但北美鹅掌楸的遗传多样性水平高于鹅掌楸;鹅掌楸的遗传变异主要来自地理种源内,而北美鹅掌楸的遗传变异主要来自地理种源     

将大赖草种转移给普通小麦的研究Ⅵ.端体异附加系的选育与鉴定

利用根尖细胞有丝分裂中期染色体计数、花粉母细胞减数分裂中期Ｉ（ＰＭＣＭＩ）染色体构型分析以及Ｃ－分带,从普通小麦中国春与大赖草（ＬｅｙｍｕｓｒａｃｅｍｏｓｕｓＬａｍ．）杂种回交后代中,选育出两个端二体异附加系９５Ｇ０９．９５Ｇ１１和一个添加了一时大赖草第１４号染色体和另一对端体的双重异附加系９５Ｇ３０２（２ｎ＝４４＋２ｔ）,它们的ＰＭＣＭＩ染色体配对构型分别为０．２１个单价体（其中０．１６个端体单价体）、１９．５７个环状二价体＋２．３２个棒状二价体（其中０．９２个由两端体配对构成）,１．５２个单价体（１．４４个端体单价体）＋１８．０７个环状二价体＋３．１７个棒状二价体（０．２８个由两端体配对构成）,１．０３个单价体（０．７２个端体单价体）＋１８．８９个环状二价体＋３．６１个棒状二价体（０．６４个由两端体配对构成）。运用单花滴注技术对这些材料在活体和离体条件下进行赤霉病人工接种鉴定,结果表明：９５Ｇ３０２的抗性与抗赤霉病对照品种苏麦３号相仿;９５Ｇ１１的抗性高于苏麦３号,明显高于亲本品种中国春。还对端体附加系的利用以及有效、快捷地转移赤霉病抗性基因进行了讨论。     

大鼠胃肌间神经丛中NOS阳性神经元的组织化学研究

采用ＮＡＤＰＨ┐黄递酶（ＮＤＰ）组织化学技术在整装铺片上对大鼠胃肌间神经丛中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元进行定量和定位研究。结果显示：大鼠胃肌间神经丛中ＮＯＳ阳性神经元密度（个／ｍｍ２）分别为：６２．１±３７．７（幽门部）、４３．４±３１．７（胃体）、３１．６±２７．８（胃底）。胃底部神经节内神经元数量较少,神经元胞体较大,染色较深;幽门部神经节内神经元数量较多,胞体大小不等,染色深浅不一;胃体部的则介于两者之间,呈过渡态。结果表明：胃各部肌间神经丛中ＮＯＳ阳性神经元的差异可能与胃的生理功能密切相关     

从CIMMYT引进的人工合成六倍体小麦D染色体组微卫星分子标记的遗传差异

采用微卫星（SSR）分子标记技术,选用23个D染色体组特异性引的对来自CIMMYT的26份人工合成六倍体小麦D染色体组的遗传多样性进行了分析。研究发现,26份材料在D染色体组上存在丰富的等位基因变异（92个）,平均每个基因座为4个。遗传距离计算结果也显示,26份材料D染色体组之间具有较大的遗传差异,平均遗传距离高达0．4955。因此,人工合成六倍体小麦D染色体组中存在丰富的遗传多样性,可以作为拓宽普通小麦遗传基础的新的遗传变异来源。研究还发现,由同一个粗山羊草基因型与不同硬粒小麦杂交合成的人工合成六倍体小麦（如合成种17和18）在所用检测的23个基因座中有3个存在差异,说明小麦在多倍化后,供体基因组在重复序列区域会发生遗传分化。     

动态吸附与气相色谱-质谱（GC-MS）联用分析密蒙花（醉鱼草科）的挥发性花香成分

采用气相色谱-质谱联用技术对动态吸附法收集的密蒙花（Buddleja officinalis）花香成分进行了分析,并用气相色谱面积归-化法对各成分进行了定量。从密蒙花中分离出16个挥发性成分,定性定量出其中的11个,占挥发性成分总量的95．44％。其中丁基醋酸乙酯（81．57％）、苯甲醛（4．92％）、3-已烯-1-醇（3．26％）、欧洲丁香醛（2．34％）和芳樟醇（1．05％）为主要成分。该研究阐明了自然条件下密蒙花的花香成分及组成,其结果为今后定向创新醉鱼草属新香型观赏品种提供了科学依据。     

益智ISSR-PCR反应体系建立与优化

目的：获得适合的益智ISSR-PCR扩增反应体系。方法：利用正交设计L46（4^5）和单因素试验对益智ISSR-PCR反应体系的5因素（Taq酶,Mg^2＋,模板DNA．dNTPs,引物）在4个水平上进行优化试验,将二者所得结果进行综合比较分析。结果：最终扶得益智ISSR-PCR反应的最优体系（20μl）为：模板DNA 100ng,Mg^2＋ 3．0mmol／L,引物0．8μmol／L,dNTPs0．25mmol／L,Taq DNA聚合酶1．0U。最后,对益智ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为50℃。结论：这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术研究分析益智遗传多样性奠定基础。     

三个地理群体赤眼鳟遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术,对丹江口水库、青龙湖（河南）和宿鸭湖3个野生赤眼鳟群体90个个体的遗传多样性进行分析。10个ISSR引物共获得96个扩增位点,其中多态位点69个,多态位点比例为71．88％。3个群体的多态位点比例分别为68．13％、64．77％和63．22％,遗传距离分别为0．1885、0．1724和0．1711,Nei基因多样性分别为0．1509、0．1397和0．1385,Shannon信息指数分别为0．2575、0．2403和0．2372。3个群体上述指标差异均不显著（P〉0．05）。丹江口水库与青龙湖群体遗传距离最远（0．1581）,丹江口水库与宿鸭湖群体次之（0．1429）,青龙湖和宿鸭湖群体最近（0．1344）。UPGMA聚类结果为青龙湖与宿鸭湖群体先聚在一起,其次是丹江口水库群体。结果表明：3个赤眼鳟群体的遗传多样性均较丰富,但群体间地理遗传分化差异并不明显。     

中国龙葵复合种细胞学分析和地理分布的研究

本文根据１５省３０余个县的实地考察,和对采自２５省的６６份中国龙葵种籽进行种植观察,并与国外的有关研究资料对比分析,在国内首次提出;（１）中国龙葵复合种的四个种,从低纬度到高纬度（１８．６－５３．５°Ｎ）,分别属于二倍体,四倍体和六倍体种;（２）从中国南方到北方,自然形成了二倍体,六倍体与二倍体交叉,六倍体与四倍体交叉三个地理分布区。     

广东省水稻纹枯病菌遗传多样性与致病力分化的研究

利用随机引物扩增多态性DNA（PAPD）分子标记技术分析了来自广东省7个县市48个水稻纹枯病菌菌株的遗传多样性,以筛选出的10个随机引物对菌株进行PAPD－PCR扩增,共产生了98个PAPD分子标记,其中89．9％的片段具有多态性。48菌株间的遗传相似性系数（以Nei基因一致度表示）在0．56－0．949之间,用UPGMA和类分析可将它们分为5个RAPD遗传聚类群（A、B、C、D、E）,相同地区来源的菌株基本上聚类在同一组群内。在温室中对供试菌株进行致病性测定,结果表明所有菌株对水稻品种Tetep都有致病性,菌株间致病力差异显著（α＝0．05）,病情指数范围为0．73－18．7,平均感指病指数为5．24。试验分析结果表明水稻纹枯病菌具有丰富的遗传多样性,不同县市的菌株存在很大的遗传分化现象（FST＝0．579）,RAPD遗传聚类群的划分与菌株的地理来源有明显的相关性,但菌株的致病力差异与菌株的来源、遗传聚类组群的划分没有明显的相关性。     

美国白蛾核型多角体病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立对昆虫核型多角体病毒（nucleopolyhedrovirus）进行定量检测方法,本研究选用美国白蛾Hyphantria cunea核型多角体病毒的polyhedrin基因为目的基因,经引物设计、PCR 扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品DNA进行检测,构建出美国白蛾核型多角体病毒SYBR GreenⅠ荧光定量标准曲线。统计学分析显示标准品浓度的对数值与Ct 值之间存在良好的线性关系（R=0.998）。该方法的检测灵敏度为10¹～10²拷贝/μL,线性范围达5个数量级,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间的变异系数均小于3%。根据已建立的方法对不同感染时间段的感病幼虫进行检测,每毫克幼虫样本内病毒polyhedrin基因拷贝数增殖倍数对数值与感染时间（d）呈正相关（R=0.987）。这些结果表明,建立的美国白蛾核型多角体病毒荧光定量 PCR检测方法是可靠的,具有灵敏度高、重复性好等特点,可为昆虫核型多角体病毒体内增殖动态研究及昆虫病毒的标准化生产提供参考。     

黄淮麦区小麦品种(系)的ISSR位点遗传多样性分析

选用11个ISSR引物,对黄淮麦区96个小麦推广品种（系）进行遗传多样性分析。共检测到96个多态性位点,每个引物多态性位点数平均为8．7个,变幅为3～23个;ISSR引物的多态性信息含量PIC变幅为0．601～0．941,平均0．791,表明ISSR具有较强的品种间区分能力,是研究小麦种质资源遗传多样性的有效分子标记技术之一。96个品种（系）间,Nei’s遗传相似系数变化范围为0．53～0．91,平均为0．60,品种间遗传相似性变幅较大,表明黄淮麦区不同小麦品种（系）间存在着不同程度的遗传多样性差异。根据品种间遗传相似系数聚类,96份材料被聚成8大类群,共14个亚类,类群与系谱和原产地无关。     

蛹虫草原基分化的差异蛋白质组学研究

蛹虫草子实体形成及发育的蛋白分子机制尚不清楚,本研究引入SWATH非标记定量蛋白质组学技术,对蛹虫草Cordyceps militaris 905菌株的菌丝体（mycelium,My）、原基（primordium,Po）、生长期子实体（developmental fruiting body,DF）和成熟期子实体（mature fruiting body,MF）进行了比较蛋白质组学分析。经搜库比对,从蛹虫草的My、Po、DF和MF中依次鉴定蛋白1 136个、1 090个、1 018个和997个（global FDR 1%）,经维恩分析后获得C. militaris 905蛹虫草表达蛋白1 578个。在此基础上,SWATH非标记技术定量蛋白1 109个。本研究获得了蛹虫草Po期与My期、DF期与Po期、MF期与DF期的差异表达蛋白,依次为115个、352个和104个,并对菌丝体分化形成原基的差异表达蛋白进行了重点解析。GO注释结果表明,Po期与My期差异表达蛋白以有机含氮类化合物代谢为主,其中AMP（活性成分虫草素合成的中间产物）从头生物合成途径富集最为显著。约1/5的差异表达蛋白参与氧化还原反应,还原酶活性的蛋白在原基中几乎都上调表达,而氧化功能的蛋白受到抑制,表明蛹虫草原基分化可能受到氧化应激的诱导。蛋白互作网络分析结果进一步表明,氧化还原反应与核苷类物质代谢相关联,可能通过影响AMP从头生物合成途径来调控虫草素的生物合成。对蛹虫草子实体系统的蛋白质组学研究和解析有利于揭示子实体形成的蛋白分子机制,为蛹虫草的基础和栽培研究提供了理论支撑。     

鹅掌楸属（Liriodendron L．）种质‘优酉’的遗传背景研究

应用光学显微镜和扫描电子显微镜,以鹅掌楸[Liriodendron chinense（Hemsl．）Sarg．]、北美鹅掌楸（L.tutipifera L．）及杂种鹅掌楸（L．chinense×L．tulipifera）为对照,对重庆酉阳鹅掌楸（Liriodendron sp．）种源‘优酉’（‘Youyou’）的外部形态特征、叶表皮微形态结构特征和花粉形态特征进行观察比较,并利用RAPD标记技术对‘优酉’的遗传关系进行了分析。结果表明,鹅掌楸属各树种在外部形态上存在差别,但在叶表皮和花粉形态特征上表现出明显的一致性,‘优酉’的各形态特征与鹅掌楸有较多相似性。RAPD标记分析结果表明,‘优酉’的遗传距离与鹅掌楸和北美鹅掌楸较远,但与鹅掌楸的遗传关系相对较近。推测‘优酉’可能是由较原始的鹅掌楸向较进化的北美鹅掌楸过渡的1个中间类型。‘优酉’生长速度快、观赏价值高,可直接用于园林绿化及林木种植。     

悬钩子属植物的RAPD分析

用RAPD标记技术对13个黑莓（blackberry）、树莓（raspberry）品种和5个野生悬钩子种类（Rubus spp．）的26个居群的遗传多样性进行了分析。用15个寡聚核苷酸随机引物共扩增出条带131条,其中多态性条带118条,占扩增条带总数的90％,表明悬钩子属植物种间和品种间存在丰富的遗传多样性。通过聚类分析可将供试的26个居群分为4组,其中A组有粗叶悬钩子（R．alceaefolius Poir．）、山莓（R．corchorifolius L．）、插田泡（R．coreanus Miq．）、掌叶覆盆子（R．chingii Hu）、‘威廉姆特’、‘托拉咪’、‘泰勒’、‘金克维’、‘布里斯托’、‘宝森’7号、‘布莱兹’及其实生苗、‘基奥瓦’、‘萨尼’、‘黑布特’等15个居群;B组包括‘宝森’1号～‘宝森’6号和‘马林’、‘乔克多’等8个居群;C组包括‘赫尔’和‘切斯特’的2个居群;D组仅有蓬藁（R．hirsutus Thunb．）1种。这一聚类结果与传统形态学分类结果基本吻合。     

影响木薯次生胚状体发生及植株再生因素的研究

研究了在外植体的不同发育阶段中,碳源以及不同的生长激素配比对木薯次生胚状体诱导及植株再生的影响。结果表明：以固体成熟培养基上生长１５ｄ的胚状体子叶为外植体,次生胚状体的产量最高,达２９．３个成熟胚状体／１个外植体。在次生胚状体的诱导阶段,以麦芽糖（４０ｇ／Ｌ）代替蔗糖作碳源,能同时提高次生胚状体的产量（３２．５个胚次体／１个外植体）及植株再生频率（７４．３％）。２,４－Ｄ与ＰＰ３３３;（０．１ｍｇ／Ｌ）配合能提高植株再生频率到７７．６％。２,４－Ｄ与ＢＡＰ（２ｍｇ／Ｌ）或激动素（２．０ｍｇ／Ｌ）配合则大大降低了胚状体诱导及植株再生频率。     

辣椒属种间杂种F_1植株的细胞遗传学研究

本文分析了南京早椒（ＣａｐｓｉｃｕｍｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓＬ．ｖａｒ．ＣｏｎｏｉｄｅｅｓＢａｉｌｅｙ）和Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ二亲本及Ｆ１杂种花粉母细胞减数分裂终变期和中期Ｉ染色体配对的构型。结果表明：二亲本花粉母细胞减数分裂染色体配对均正常,为１２个二价体（双单倍体２ｎ＝２４）。Ｆ１杂种花粉母细胞减数分裂染色体配对很不规则。其平均频率分别为单价体０．０３６,二价体９．１８,三价体０．０３６,四价体０．８０,六价体０．３８。南京早椒和Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ染色体间存在着相互易位,因此,二亲本间彼此有差异。单价体出现极少,这可断定南京早椒与Ｃ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ染色体间是部分同源的,但染色体组结构上存在着差异。由于染色体结构上差异,所以Ｆ１杂种的育性较低。     

水稻离体授粉的胚胎学研究

采用2个水稻（Oryza sativa L.)品种“春江05”（早粳）和“95046”（晚粳）,对离体授粉过程中的胚胎学进行了详细的研究。结果表明：（1）2个品种均胡离体授粉结实,平均结实率为52．1％,其中28．4％胚胎发育正常,2．2％胚胎发育异常,21．5％愈伤组织化;（2）离体授粉时的胚胎发育途径和体内自然发育基本相同,中是合子和初生胚乳核首次启动分裂及以后的发育均较延缓,但最终也能萌发成幼苗。（3）观察到具细长胚柄的原胚及液泡化原胚等异常的胚胎类型;（4）子房内形成的愈伤组织分为致密和松散两种类型,二均可化出不定芽和不定根,还对离体授粉的方法,离体授粉中正常和异常的胚胎发育途径进行了讨论。     

高脂饮食对小鼠脂质代谢和leptin基因表达水平的影响

目的建立高脂饮食诱导小鼠肥胖模型,分析高脂饲料对小鼠脂质代谢和leptin基因表达水平的影响。方法用高脂饲料饲喂小鼠,每周定时称重和断尾采血一次,分别测定血清中血糖、胆固醇、甘油三酯、胰岛素和leptin的浓度;5周后,分离、称重小鼠体脂并提取腹部脂肪组织RNA,半定量RT-PCR分析leptin基因表达水平。结果从第2周开始,实验组小鼠体重明显高于对照组小鼠,4周后,体重差异显著（P〈0．05）;血清中血糖、胆固醇、甘油三酯、胰岛素和leptin的含量随体重增加明显增高,4周后,差异显著（P〈0．05）;实验组体脂含量明显高于对照组（P〈0．05）,半定量RT-PCR分析表明,肥胖小鼠脂肪组织leptin基因表达水平高于对照组（P〈0．05）。结论高脂饮食诱导可建立小鼠肥胖模型,并能够引起高胰岛素和高leptin血症,为进一步研究肥胖的发病机制奠定基础。     

豌豆卷须肌动蛋白Ⅱ类异型体cDNA克隆的序列分析

分析１５个豌豆卷须肌动蛋白ｃＤＮＡ 克隆的限制性内切酶图谱,发现在豌豆卷须中至少存在三类肌动蛋白异型体,分别命名为Ⅰ类（ＰＥＡｃ Ⅰ）、Ⅱ类（ＰＥＡｃ Ⅱ）和Ⅲ类（ＰＥＡｃ Ⅲ）异型体．三类异型体的克隆数目分别为１０、４和１个,表明三类异型体在豌豆卷须中的表达是不同的,很可能具有组织或发育阶段的特异性．对Ⅱ类异型体的三个ｃＤＮＡ 克隆ＰＥＡｃ３、ＰＥＡｃ９和ＰＥＡｃ１１进行了全序列测定,所测定的序列已被ＧｅｎＢａｎｋ 数据库所接受．测序结果表明,ＰＥＡｃ３、ＰＥＡｃ９和ＰＥＡｃ１１的序列长度分别为１５５０、１６８０和１０９１个核苷酸,其中编码区长１１３４个核苷酸,编码的氨基酸长度为３７７（ＰＥＡｃ１１缺少编码氨基端前９６个氨基酸的核苷酸序列）．三个克隆的核苷酸序列完全相同,差别仅在于３′非翻译区的长度不同,即ｐｏｌｙ（Ａ）的加入位点不同．这说明它们可能是由同一基因转录而来,但转录后的加工过程不同．豌豆卷须中肌动蛋白基因ｐｏｌｙ（Ａ）加入位点的使用,可能与组织或发育的特异性表达有关．此外,豌豆卷须肌动蛋白三类异型体之间的核苷酸序列同源性为８０％ ,氨基酸序列同源性为９４％ ．     

草河口林场红松人工林遗传多样性的ISSR分析

应用ISSR分子标记技术对本溪草河口林场的红松（Pinus koraiensis）人工林两个种群的60个个体进行遗传多样性分析。14个ISSR引物共检测到90个位点,其中多态位点65个,多态位点比率0.722 2。Nei指数统计结果表明,红松人工林的遗传多样性喜鹊沟种群（0.278 9）大于烈士墓种群（0.271 2）,Shannon指数统计结果与Nei指数相同。研究证实草河口林场红松人工林保存了较多的遗传多样性。