亚硒酸钠对小麦幼苗中谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性以及谷胱甘肽含量的影响

用1.0 mg·L-1的亚硒酸钠根施小麦幼苗,测定亚硒酸钠对谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性以及还原性谷胱甘肽含量的结果表明,外源亚硒酸钠对麦苗地上部的谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性均有诱导作用,使麦苗体内的谷胱甘肽含量水平增加.     

钩虾胆碱酯酶（ChE）和谷胱甘肽转硫酶（GST）的敏感性和特异性比较研究

研究了有机磷农药甲地基嘧啶流磷,有机氯农药林丹,菊酯类农药氯菊酯,表面活性剂直链苯磺酸钠和重金属Zn对钩虾（Gammarus pulex L.)胆碱酯酶（ChE）和谷胱甘肽转硫酶（GST）活性变化以及毒性影响,结果表明,在暴露24h和48h后,仅有机磷农药甲基嘧硫磷显著抑制胆碱酯的酶的活性,在暴露48h后,有机氯农药林丹和菊酯类农药氯菊酯能显著提高谷胱甘肽转硫酶活性,在暴露24h后,仅梵在导致谷胱甘肽转硫酶明显升高,作为生物标志物,胆碱酯酶比谷胱甘肽转硫酶具有更高的特异性,这两种生物标志物较毒性试验方法具有更高的敏感性。     

小鼠金属硫蛋白-I在鱼腥藻7120中的融合表达及其纯化(英文)

为了提高小鼠金属硫蛋白-I(mMT-I)在鱼腥藻7120(Anabaena sp.PCC 7120)中的表达量、便于表达产物的分离纯化,构建了新的穿梭融合表达载体pKG-MT。通过pKG-MT,mMT-I cDNA在tac启动子的调控下,以与谷胱甘肽转硫酶(GST)C-末端相融合(GST-MT)的形式在鱼藻中表达。SDS-PAGE结果显示在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下GST-MT在鱼腥藻中表达。经谷胱甘肽亲合层析,从转基因藻中分离、纯化得到GST-MT,利用GSTC-末端的凝血酶酶切位点,用凝血酶对GST-MT进行柱上酶切,经Sephadex G50除去凝血酶得到mMT-I。SDS-PAGE表明纯化得到所要的目标产物;ELISA测定结果显示从每克转基因藻(鲜重)中可纯化得到0.9 mg mMT-I;原子吸收测定表明纯化得到的mMT-I的镉离子结合能力接近于天然MT。     

小鼠 金属硫蛋白—Ⅰ 鱼腥藻7120 融合表达 纯化

为了提高小鼠金属硫蛋白-Ⅰ（mMT-Ⅰ）在鱼腥藻7120（Anabaena sp.PCC7120)中的表达量便于表达产物的分离纯化。构建了新的穿梭融合表达载体pKG-MT。通过pKG-MT,mMT-ⅠcDNA在tac启动子的调控下,以与谷胱甘肽转硫酶9GST）C-末端相融合（GST-MT）的形式在鱼藻中表达,SDS-PAGE结果显示在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导下GST-MT在鱼腥藻中表达,经谷胱甘肽亲合层析,从转基因藻中分离,纯化得到GST-MT。利用GSTC-末端的凝血酶酶切位点,用凝血酶对GST-MT进行柱上酶切,经SephadexG50除去凝血酶得到mMT-I,SDS-PAGE表达纯化得到所要的目标产物;ELISA测定结果显示从每克转基因藻（鲜重）中可纯化得到0.9mgmMT-I;原子吸收测定表明纯化得到的mMT-I的镉离子结合能力接近于天然MT。     

小鼠金属硫蛋白-Ⅰ在鱼腥藻7120中的融合表达及其纯化

为了提高小鼠金属硫蛋白-Ⅰ(mMT-Ⅰ)在鱼腥藻7120(Anabaena sp.PCC 7120)中的表达量、便于表达产物的分离纯化,构建了新的穿梭融合表达载体pKG-MT.通过pKG-MT,mMT-Ⅰ cDNA在tac启动子的调控下,以与谷胱甘肽转硫酶(GST)C-末端相融合(GST-MT)的形式在鱼藻中表达.SDS-PAGE结果显示在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下GST-MT在鱼腥藻中表达.经谷胱甘肽亲合层析,从转基因藻中分离、纯化得到GST-MT.利用GSTC-末端的凝血酶酶切位点,用凝血酶对GST-MT进行柱上酶切,经Sephadex GS0除去凝血酶得到mMT-Ⅰ.SDS-PAGE表明纯化得到所要的目标产物;ELISA测定结果显示从每克转基因藻(鲜重)中可纯化得到0.9 mg mMT-Ⅰ;原子吸收测定表明纯化得到的mMT-Ⅰ的镉离子结合能力接近于天然MT.     

食用低硒地区粮食对豚鼠体内谷胱甘肽转硫酶和脂质过氧化物的影响

用低硒地区粮食饲养豚鼠105天,在其肝匀浆及其亚细胞级分中发现硒含量和谷胱甘肽过氧化物酶活性低于对照,二者呈正相关;脂质过氧化物水平和谷胱甘肽转硫酶活性在实验组则呈明显个体差异,其中3例与对照相同,4例脂质过氧化物水平高于对照,而谷胱甘肽转硫酶活性低于对照,二者呈负相关。     

壳聚糖固定化谷胱甘肽硫转移酶的研究

目的：利用壳聚糖固定日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶,并对固定化酶性质及体外催化活性进行研究。方法：利用大肠杆菌BL21(DE3)表达日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶,并从中粗提谷胱甘肽硫转移酶,将其固定在用戊二醛交联的壳聚糖载体上,对游离酶和固定酶的最适pH、温度,游离酶和固定化酶对底物1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)和谷胱甘肽(GSH)的亲和力,温度的稳定性进行了研究。结果：固定化酶活回收率可达41．6％,最适pH6．5～7．0,最适温度37℃,对底物(CDNB和GSH)的亲和力略有下降,对温度稳定性大大提高。在体外固定化酶有很好的催化解毒作用。     

谷胱甘肽硫转移酶(GST)的固定化及酶学特性研究

对谷胱甘肽硫转移酶的固定化、游离酶和固定化酶的酶学特性进行了研究,通过试验,确定谷胱甘肽硫转移酶的最佳固定化条件为先用2％壳聚糖吸附酶,然后再加戊二醛交联,交联用戊二醛浓度为1．2％,交联时间6h;游离酶的最适温度为45—55℃,最适pH值为6．5-7．0：固定化酶的最适温度为45-50℃,最适pH值为7．0;游离酶和固定化酶的最适酶促反应时间为30min。     

低盐胁迫对三疣梭子蟹组织中抗氧化酶和 AT P 酶活力的影响

设定半致死低盐试验组(盐度 7)和正常对照组(盐度 28)对三疣梭子蟹进行 48h 的胁迫, 检测半致死盐度胁迫下不同时间点三疣梭子蟹组织中抗氧化酶和 ATP 酶活力的变化。结果显示, 随着低盐处理时间的延长, 三疣梭子蟹肝胰腺、鳃、肌肉中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力均呈下降趋势, 极显著低于对照组(P<0.01), 各组织中 SOD、 CAT 活力大小顺序为肌肉 >肝胰腺>鳃; 肝胰腺、鳃中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽转硫酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)、Na+/K+-ATPase 酶和 Ca2+/Mg2+-ATPase 酶活力也都被抑制, 活力极显著下降(P<0.01); 而对照组在试验期间各组织酶活均较 平稳, 变化不大。试验结论表明 , 当盐度下降剧烈, 超出机体耐受范围时, 三疣梭子蟹生理机能被抑制, 酶活力反而下降。     

大豆荚壳杀根结线虫成分的分离及其对抗氧化酶活性的影响

采用液-液分配萃取方法,从大豆荚壳甲醇提取物中分离获得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水的萃取物,测定了其对南方根结线虫J2的毒杀活性,结果表明正丁醇萃取物比其它4种萃取物有更高的杀虫活性,24和48 h对线虫校正死亡率分别为57.76%和67.72%.将正丁醇萃取物通过硅胶柱层析和薄层层析,得到8个组分,通过杀虫活性试验,得到组分2和7为主要的杀虫活性组分,24和48 h对线虫校正死亡率分别为65.93%、66.65%和69.25%、68.51%.进一步就组分2和7对J2抗氧化酶活性的影响进行了研究,结果表明两种组分对谷胱甘肽转硫酶和过氧化氢酶活性都有一定的抑制作用,其中两种组分对过氧化氢酶活性的抑制效果差异不显著,组分7对谷胱甘肽转硫酶活性具有显著的抑制效果,24和48 h的抑制率分别可达72.36%和50.21%.说明大豆荚壳的杀线虫活性成分可能通过影响虫体内的氧化代谢,使线虫体内氧化和抗氧化作用失衡,最终导致线虫死亡.     

NaCl胁迫对海滨木槿抗氧化系统和渗透调节的影响

以盐生植物海滨木槿为材料,不同浓度NaCl胁迫对其抗氧化酶活性、抗氧化物质和渗透调节物质含量的影响进行分析。结果显示:随着NaCl浓度的升高,海滨木槿叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽转硫酶(GST)的活性先升高后降低,而过氧化氢酶(CAT)的活性呈持续下降趋势,但它们达到最高活性时的NaCl浓度不同;各处理的丙二醛(MDA)含量先下降后升高,但始终低于对照;抗氧化物质抗坏血酸(AsA)和谷胱甘肽(GSH)的含量均高于对照,且在200 mmol.L-1时达到最高;各处理渗透调节物质可溶性糖和脯氨酸(Pro)的含量均较对照增加且升幅较大。研究表明,海滨木槿在NaCl胁迫下具有较强的活性氧清除能力和渗透调节能力,从而表现出较强的耐盐性。     

一氧化氮对小麦叶片镍毒害的缓解作用

采用溶液培养法研究了重金属镍(Ni)对扬麦158(Triticum aestivumL)幼苗生长的影响及外源一氧化氮(NO)对Ni毒害的缓解作用。结果表明,100μmol/LNi处理显著抑制小麦幼苗生长,导致叶绿素含量下降,丙二醛(MDA)含量显著升高,且叶片过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽转硫酶(GST)等抗氧化酶活性升高。400μmol/L硝谱钠(SNP,NO供体)预处理2d,能够明显减轻Ni毒害,使叶绿素和MDA含量基本恢复至对照水平。NO可能是通过提高APX和GR等抗氧化酶的活性及谷胱甘肽含量而增强植株抗氧化能力,显著减轻由Ni导致的叶片Ca和Fe含量下降而增强小麦幼苗抵御Ni毒害的能力。     

NaCI胁迫对海滨木槿抗氧化系统和渗透调节的影响

以盐生植物海滨木槿为材料,不同浓度NaCl胁迫对其抗氧化酶活性、抗氧化物质和渗透调节物质含量的影响进行分析.结果显示随着NaCl浓度的升高,海滨木槿叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽转硫酶(GST)的活性先升高后降低,而过氧化氢酶(CAT)的活性呈持续下降趋势,但它们达到最高活性时的NaCl浓度不同;各处理的丙二醛(MDA)含量先下降后升高,但始终低于对照;抗氧化物质抗坏血酸(AsA)和谷胱甘肽(GSH)的含量均高于对照,且在200 mmol·L-1时达到最高;各处理渗透调节物质可溶性糖和脯氨酸(Pro)的含量均较对照增加且升幅较大.研究表明,海滨木槿在NaCl胁迫下具有较强的活性氧清除能力和渗透调节能力,从而表现出较强的耐盐性.     

外源一氧化氮对镉胁迫下绿豆幼苗根尖抗氧化酶的影响

采用水培法研究外源一氧化氮对镉(Cd)胁迫下绿豆幼苗根尖抗氧化酶活性的影响。结果表明:0.01mmol/L和0.1mmol/L一氧化氮供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)显著促进上胚轴生长,1mmol/LSNP则抑制绿豆幼苗生长。Cd单独处理抑制根尖抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性而刺激脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)、谷胱甘肽转硫酶(glutathione S-transferase,GST)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)和过氧化物酶(guaiacol peroxidase,POD)活性上升。0.1mmol/LSNP预处理能够明显缓解Cd对根生长的抑制,降低根尖中MDA含量,提高根尖APX和SOD活性,降低LOX和POD活性,但不影响GST和GR活性。     

人谷胱甘肽硫转化酶基因在链霉菌的高效表达

谷胱甘肽硫转化酶(GST)是一个具有广泛底物专一性,与一些化学致癌物代谢有关的酶的一个家族.它既有谷胱甘肽硫转化酶的活性,也有过氧化物酶的活性,能使谷胱甘肽分子上的巯基(SH)与广泛的亚硝基本类化合物结合,使这类致癌物转化成无毒的化合物.它亦能与细胞内源的一些阴离子化合物(如胆红素和亚铁血红素)结合并参与运输.在人体中,GST的缺乏常与新生儿非溶血性的胆红素积累而导致的病因有关,同时GST在保护生物体过氧化反应的损伤中也起着重要的作用.     

GST—talinl融合蛋白的原核表达及纯化

应用PCR方法扩增talinl的cDNA,并将其重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-1中,获取人源的GST—talinl融合蛋白,为下阶段深入的研究talinl的结构、功能、及其与之相互作用的蛋白打下基础。经酶切、序列鉴定．选择正确重组子,将其质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,用Glutathione Sepharose 4B柱纯化,western blot鉴定。克隆得到了一个2400bp的talinl的cDNA片断,重组质粒目的DNA测序正确,纯化出分子量约为121、6kD的融合蛋白。用基因工程方法使GST—talinl重组质粒在原核细胞表达并成功纯化出GST—talinl融合蛋白。     

人谷胱甘肽硫转化酶基因在链霉菌的高效表达

谷胱甘肽硫转化酶(GST)是一个具有广泛底物专一性,与一些化学致癌物代谢有关的酶的一个家族.它既有谷胱甘肽硫转化酶的活性,也有过氧化物酶的活性,能使谷胱甘肽分子上的巯基(SH)与广泛的亚硝基本类化合物结合,使这类致癌物转化成无毒的化合物.它亦能与细胞内源的一些阴离子化合物(如胆红素和亚铁血红素)结合并参与运输.在人体中,GST的缺乏常与新生儿非溶血性的胆红素积累而导致的病因有关,同时GST在保护生物体过氧化反应的损伤中也起着重要的作用.     

GST-talin1融合蛋白的原核表达及纯化

应用PCR方法扩增talin1的cDNA,并将其重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-1中,获取人源的GST-talin1融合蛋白,为下阶段深入的研究talin1的结构、功能、及其与之相互作用的蛋白打下基础.经酶切、序列鉴定,选择正确重组子,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用Glutathione Sepharose 4B柱纯化,western blot鉴定.克隆得到了一个2400bp的talin1的cDNA片断,重组质粒目的DNA测序正确,纯化出分子量约为121.6kD的融合蛋白.用基因工程方法使GST-talin1重组质粒在原核细胞表达并成功纯化出GST-talin1融合蛋白.     

硫素对冬小麦旗叶抗坏血酸-谷胱甘肽循环系统的影响

选用大穂型品种'兰考矮早8'和多穂型品种'豫麦49-198'为供试材料,设置3个施硫水平,通过遮雨棚中盆栽试验研究了不同施硫量对冬小麦旗叶中抗坏血酸-谷胱甘肽抗氧化循环系统的影响.结果表明: 2个小麦品种抗坏血酸-谷胱甘肽抗氧化循环系统测定指标变化趋势表现一致,其中在花后28 d旗叶抗坏血酸(AsA)含量和谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)表现有明显差异,但均表现为施硫处理高于对照,且达显著水平.2个品种花后旗叶中谷胱甘肽(GSH)含量、GSTs活性和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性变化均呈单峰曲线,在花后7～10 d达到高峰,后缓慢下降;AsA含量随生育进程推进逐步升高,至花后28 d达到高峰;花后旗叶中谷胱甘肽还原酶(GR)活性则随花后天数增加呈下降趋势.由此证明,施硫对小麦生育后期植株体内抗坏血酸-谷胱甘肽抗氧化循环系统有加强作用.     

重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备

用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段,直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定后,再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ位点之间,构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ,将此质粒导入大肠杆菌,经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ重组融合蛋白的表达,用谷胱甘肽偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ经亲合层析获得纯化的ＧＳＴ－ｈＦＡＳ蛋白,经凝血酶酶切和二次亲合层析去除ＧＳＴ部分,得到纯化的ＦＡＳ蛋白．用纯化的ＦＡＳ抗原免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体,经检测发现抗ＦＡＳ抗体能诱导Ｕ９３７细胞发生细胞凋亡