羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖莱多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC50分别为390,362,402,421mg／L;药物浓度为300mg／L和500mg／L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G2／M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G2／M期细胞阻滞有关。     

羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖(Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS)诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western blot法测定Caspase-3酶原的变化; RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达。结果显示:SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC_(50)分别为375,355,178和60mg/L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征:细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5-300mg/L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带;而500mg/L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖（Sargassum Fusforme Polysaccharides．SFPS）诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率：通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡：应用Westernblot法测定Caspase-3酶原的变化：RT—PCR检测Caspase-3mRNA表达。结果显示：SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC50分别为375,355,178和60mg／L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征：细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5—300mg／L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带：而500mg／L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一．而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

羊栖菜多糖通过激活Caspase途径诱导Lovo细胞凋亡

研究了羊栖菜多糖（Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS）诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性变化。MTT法检测SFPS对lovo细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western印迹法测定caspase-3酶原和caspase-9的变化;RToPCR检测caspase-3 mRNA表达;caspase-3,caspase-8、caspase-9活性检测试剂盒观察caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性改变。结果显示,SFPS对lovo细胞增殖有显著抑制作用,经形态变化、DNA条带和流式细胞分析,可见明显的细胞凋亡特征。SFPS处理lovo细胞后,发现caspase-3酶原蛋白表达降低,caspase-3 mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。而在检测蛋白中,也发现caspase-9被激活进而形成具有活性的片段。另外,caspase的活性检测也进一步发现caspase-3、caspase-9的活性逐步增高。实验结果提示SFPS在体外诱导lovo胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,并且是通过激活启动caspase-9,进而激活下游效应caspase-3的级联反应来实现的。     

复方木鸡冲剂诱导人白血病细胞HL-60凋亡机制研究

目的:探讨复方木鸡冲剂诱导人白血病细胞HL-60细胞凋亡的作用和机制,为相关中药开发提供实验资料.方法:用MTT法检测复方木鸡冲剂对HL-60细胞增殖活性的影响,光镜下观察细胞形态的变化;流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡,并分析细胞周期;免疫细胞化学法检测Bcl-2、caspase-3、p21WAF1的表达.结果:MTT法显示复方木鸡冲剂能抑制HL-60细胞的生长,细胞呈凋亡形态学变化.流式细胞仪检测结果为细胞凋亡率明显增高,出现GO/G1期阻滞.Bcl-2表达降低,caspase-3表达增高,p21WAF1表达强阳性.结论:复方木鸡冲剂明显抑制HL-60细胞的生长,其抗肿瘤的机制与诱导肿瘤细胞凋亡、促进细胞分化有关.     

三氧化二砷通过线粒体途径诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的:研究三氧化二砷(Arsenic trioxide,ATO)对人白血病HL-60细胞凋亡的影响,并以线粒体通路为靶点探讨其可能的机制。方法:采用1μg/m L、5μg/m L及10μg/m LATO处理HL-60细胞24小时后,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过细胞内MDA与GSH含量检测反映氧化应激水平,采用免疫印迹法检测凋亡相关分子表达,并通过免疫荧光染色检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平。结果:5μg/m L及10μg/m L ATO可显著诱导人白血病HL-60细胞凋亡,并显著增加其氧化应激水平,增加促凋亡分子Bax和Caspase-3的表达,而抑制抗凋亡分子Bcl-2的表达,降低HL-60细胞线粒体膜电位的水平。结论:一定剂量的ATO可诱导人白血病HL-60细胞凋亡,而这一作用可能是通过诱导线粒体相关性凋亡信号通路激活实现。     

新生牛肝中三种低分子化合物牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的:研究三种新生牛肝源低分子化合物:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL-60白血病细胞增殖的抑制作用并探讨其调控机理.方法:用MTT法分别检测三种活性成分作用后HL-60细胞和正常人淋巴细胞的存活率.分别用琼脂糖凝胶电泳,顺磁共振ESR技术,免疫组化法测定其对HL-60细胞的核DNA、氧自由基活性和细胞周期蛋白水平的影响.结果:三种化合物能够有效地抑制HL-60细胞的增殖,而对正常的人淋巴细胞的生长没有抑制作用;三种化合物使HL-60细胞的核DNA产生30 kb片段,使HL-60细胞内的氧自由基活性降至痕量水平,并下调HL-60的p45/skp2的水平,而上调p27/kip的水平.结论:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽能够通过调控细胞周期蛋白的水平而选择性的抑制肿瘤细胞的增殖.     

Caspase-3 mRNA反义核苷酸对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡的影响

目的观察caspase-3 mRNA反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞凋亡的抑制作用,筛选有效ASODN。方法用脂质体介导法将针对caspase-3 mRNA不同序列的4条ASODN导入HL-60细胞中,γ-射线照射。应用电泳法检测DNA梯状条带;Hoechst 33258-碘化丙啶染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量。结果以caspase-3 mRNA5’非编码区(-62至-46位)与编码起始区(-1至16位)ASODN转染,当转染终浓度≥3μmol/L时,DNA电泳梯状条带消失,流式细胞术亦未见明显的亚二倍体峰;荧光染色分析,凋亡细胞百分率比未转染对照组和错配寡核苷酸对照组显著降低(P<0.01),且随转染终浓度的增加,凋亡抑制率显著增加。另外,5’非编码区ASODN的抑制作用显著强于编码起始区ASODN(P<0.05)。结论caspase-3 mRNA ASODN可抑制γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡,作用有序列特异性及剂量依赖性。该结果为细胞过度凋亡相关疾病的基因治疗提供了实验基础。     

HL-60细胞诱导分化与细胞膜流动性变化研究

 本实验以二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)为诱导剂,诱导人早幼粒白血病细胞系HL-60沿粒系统成熟分化。动态观察了诱导后1—6天HL-60的形态、功能成熟度改变、膜流动性和增殖活性的变化。结果表明,早幼粒细胞由诱导前的78％降至5％,杆核与分叶核细胞由6％和1.5％分别增加至32.5％和5.5％。NBT(Nitroblue tetrazolium,四唑氮蓝)还原试验显示其功能亦渐超成熟。诱导后HL-60 DNA合成速率明显降低(降低40～75％),膜脂流动度亦显著降低(降低30％,P<0.01)。提示诱导分化后的HL-60细胞不仅获得了与正常成熟粒细胞相似的形态功能特征,同时还失去了膜流动性增高及快速繁殖增生的恶性特征。     

人早幼粒白血病细胞(HL-60)的表面超微结构及其在诱导分化过程中的变化

应用扫描电镜技术,结合超薄切片和组织化学方法,观察分析了人早幼粒白血病细胞(HL-60)的表面形态结构。扫描电镜下,HL-60细胞最明显的表面形态特征是绝大多数(约90%)具有丝状伪足。丝状伪足呈丝状、指状或圆棒状,其平均长度为4—6μ,直径约为0.25—0.3μ。丝状伪足具有明显特征性分布,常以成簇或成束状态分布在细胞的周围或一侧。超薄切片和组织化学反应结果显示,丝状伪足的内部结构主要是微丝和糖原颗粒。大多数HL-60细胞具皱褶而极少数细胞显示微绒??毛。用维生素A酸处理HL-60细胞6天后,有些细胞的丝状伪足消失,其细胞表面变得不规则,出现大型钝形伪足。由于丝状伪足与大型钝形伪足的成分基本相同,以及钝形伪足的出现伴随丝状伪足的减少,故推测钝形伪足可能来自丝状伪足。文中讨论了HL-60细胞形态结构与生理功能的关系。     

Isoverbascoside对HL-60细胞的诱导分化和细胞毒作用

不同时间、不同浓度的isoverbascoside体外处理HL-60细胞,以形态改变(光镜和透射电镜观察)、功能分化(化学发光检测吞噬能力)、恶性度降低(裸鼠成瘤试验)等指标观察其诱导分化作用;以台盼蓝拒染作用和电镜下形态变化确定其细胞毒作用;用流式细胞术测定其对HL-60细胞周期的影响。20—25μmol/L Isov 1—3天诱导HL-60细胞向粒系方向分化,细胞吞噬能力提高,裸鼠成瘤性降低。30—35μmol/L Isov 2—3天对HL-60细胞有强烈的细胞毒作用。20μmol/L Isov处理12h可引起HL-60细胞的G_1期阻滞,在72h时引起HL-60细胞的G_2/M期的阻滞。     

维生素A类化合物和二甲基亚砜诱导人早幼粒白血病细胞(HL-60)分化的显微与亚显微结构研究

用光镜和电镜技术研究了HL-60细胞在诱导分化过程中的显微与亚显微结构变化,10~(-6)M的维A酸处理6天,细胞按粒系途径定向分化,其核质比例降低,核浓缩、分叶,核仁减少或消失。经RA处理的细胞在电镜下出现下列明显的变化:细胞核浓缩和分叶,异染色质区域增加,约46%细胞显示出类似成熟粒细胞核的亚显微形态特征,胞质中嗜天青颗粒减少,特异颗粒显著增加,两种颗粒的比率发生明显变化;细胞质中微管、微丝的量增加;多聚和单个分散的游离核糖体减少,有些??细胞胞质空泡化;出现主要以微丝为筑架的大型钝形伪足和不规则的表面突起。上述这些变化似可作为HL-60细胞形态分化的标志。维A酸诱导HL-60细胞形态分化具有明显的时间效应关系。1.4%DMSO对HL-60细胞分化的诱导作用类似于10~(-6)MRA,而等剂量的(10~(-6)M)R Ⅰ、RⅡ其作用弱于RA。     

去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

体外实验证明１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,可诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。提取加药组细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的ＤＮＡ“梯子”,同时加药组细胞出现核固缩、碎裂及胞浆浓缩等形态学变化。流式细胞测试结合形态学观察,特别是细胞超微结构观察,证明去甲斑蝥素诱导的Ｋ５６２细胞凋亡大部分发生在细胞周期的Ｍ期,也有部分发生在间期。免疫细胞化学结果表明,１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,与对照组相比,加药组细胞中ｂｃｌ┐２蛋白表达增强,而Ｂａｘ蛋白表达减弱,两组间有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。     

CD11b/DNA双参数流式细胞术检测HL-60细胞分化的细胞周期

目的采用双参数流式细胞术研究全反式维甲酸(alltransretinoidacid,ATRA)诱导人类急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞分化的细胞周期。方法HL-60细胞经分化诱导剂ATRA(终浓度为1μmol/L)诱导不同时间点后,利用CD11b/DNA双参数流式细胞术同时检测分化细胞表面抗原CD11b的表达及分化细胞DNA含量。结果HL-60细胞经ATRA诱导后,细胞表面分化抗原CD11b表达明显升高,细胞阻滞于G0/G1期,且CD11b阳性细胞主要位于G0/G1期。结论CD11b/DNA双参数流式细胞术能简便,快速,直观地检测细胞分化的细胞周期。     

三尖杉酯碱诱导HL-60细胞程序性死亡过程中的细胞质和细胞核出泡与染色质凝集

本文利用视频显微影像反差增强技术(VideoEnhancement Contrast,VEC)对三尖杉酯碱诱导的单个HL-60活细胞程序死亡(Apo-ptosis,Apo)全过程进行了观察,结果表明每个Apo细胞在染色质凝集前都要发生细胞核的出泡,而每一个核出泡又都是由相应的质出泡所诱导的,但并不是每个质出泡都能诱导核出泡,质出泡的次数远远高于核出泡,提示核、质出泡可能与染色质凝集有关,并且核、质出泡是程序死亡细胞形成Apo小体所必需的。进一步研究则说明核、质出泡与微丝解聚和重组有关。核、质出泡虽可加速细胞程序死亡过程中的染色质凝集,但并不是程序死亡细胞染色质凝集所必需的,提示HL-60细胞程序死亡过程中的核变化和质变化可能是相对独立的。     

马尾松树皮提取物体外诱导人肝癌细胞凋亡的一过性检测分析

目的研究马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract, PMBE)对人肝癌细胞BEL-7402的体外诱导凋亡作用.方法运用"一过性细胞处理法",从形态、生化和分子水平检测细胞凋亡与否.结果 160μg/ml PMBE处理BEL-7402细胞24h后,凝胶电泳呈现DNA ladder,荧光镜检发现"核皱缩、边集或碎裂",流式细胞分析可见明显"凋亡峰".结论 PMBE能明显诱导体外培养的BEL-7402细胞凋亡;"一过性细胞处理法"能快速鉴定"凋亡"并测定"凋亡率",实现了定性与定量的统一.     

天花粉蛋白诱发白血病细胞K562凋亡的研究

天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS),是一种从栝楼块根内提取的核糖体失活蛋白,具有流产、抗肿瘤和抗HIV等多种生物活性。本文利用FACS检测到天花粉蛋白可使K562白血病细胞产生明显的凋亡小峰、DNA区带电泳成典型的“梯状”条带,电镜检测可观察到明显的细胞凋亡形态。这些结果表明天花粉蛋白可以诱发K562白血病细胞产生凋亡。