双歧杆菌培养基的优化

针对双歧杆菌的营养需要,分别采用单因素试验和正交试验,优化培养基成分及用量。得出最优培养基(CPT)配比:大豆蛋白胨1.67%,酪蛋白胨0.83%,乳糖0.5%,酵母浸出粉0.5%,低聚糖0.7%,胡萝卜汁15%。最后测定双歧杆菌在最优培养基中的生长曲线,并同时测定pH和吸光值的变化,确定培养终止时间为12h,菌数可达2.18×109CFU/mL,且发酵培养基具有极显著的增菌效果(p<0.01)。     

长双歧杆菌发酵培养基的优化

目的对长双歧杆菌液态发酵培养基进行优化。方法以长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）为发酵菌株,以MRS培养基为基础培养基,以发酵液活菌数为指标,通过单因素添加实验考察发酵培养基的碳源和氮源的种类,并验证优化后培养基的效果。结果优化后培养基的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酪蛋白胨、牛肉蛋白胨、水解乳蛋白,发酵液活菌数达到2．09×10^9CFU／mL,比原MRS培养基（1．22×10^9CFU／mL）提高了71．30％。结论优化后培养基优于原MRS基础培养基,可应用于长双歧杆菌的液态发酵。     

响应面法优化蝙蝠蛾拟青霉发酵培养基配方

为了提高虫草无性型蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)菌丝体中的腺苷含量,采用响应面法对其液体发酵培养基配方进行了优化。首先采用Plackett-Burman设计法对影响蝙蝠蛾拟青霉腺苷收率的8个相关因素进行了筛选,从中确定其主要影响因子为马铃薯和蚕蛹粉。然后用最陡爬坡试验逼近上述2个因素的最大响应区域,并通过中心组合设计和响应面分析法,确定了主要影响因子的最佳浓度。优化后的培养基组成为:马铃薯8.25%,蔗糖1%,玉米粉1%,蛋白胨0.5%,蚕蛹粉0.81%,KH2PO40.1%,MgSO4.7H2O 0.1%,(NH4)2 SO40.1%。该配方所产生的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中腺苷含量由优化前的2.15 mg/g(干重)提高到3.44 mg/g(干重)。     

两歧双歧杆菌86321生长特性的研究

目的研究两歧双歧杆菌86321的生长特性,为该菌生理功能研究和高效发酵剂的研制提供理论依据。方法通过生长曲线、产酸量、最适厌氧方式、最适pH、最适培养温度及最适接种量等一系列实验,对两歧双歧杆菌86321进行生长特性的研究。结果两歧双歧杆菌86321在BL培养基中培养时间可缩短至16 h,最高活菌数的lg值达到9.5;其最适厌氧方式为自然厌氧法或密封法,装液量视实际情况而定;在pH7.08.0生长良好,最适初始pH为8.0;在3742℃生长良好,最适温度为37℃;综合总菌量和生产成本,确定最适接种量为7%（v/v）。结论用BL培养基可以大大提高两歧双歧杆菌86321的产量。细菌产量的高低和发酵速度的快慢与菌种活力、厌氧方式、培养温度及pH等因素密切相关。     

一株携带质粒的人两歧双歧杆菌的分离与鉴定

目的:分离携带天然质粒的人双歧杆菌.方法:用自制的改良型Blb双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离双歧杆菌,对初步质粒检测阳性的单菌落通过糖发酵试验、(G C)mol%测定和16S rDNA序列分析,进行菌株鉴定.结果:筛选到一株携带天然质粒的人双歧杆菌,编号B200304,在1.0%琼脂糖凝胶上,测得质粒的相对分子质量约为22 kb.通过对该菌株的形态学观察和糖发酵试验等生理生化特征研究,证明该菌株为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum);HPLC法测得其(G C)mol%为55.6,16SrDNA序列分析进一步证实该菌株为两歧双歧杆菌.结论:分离得到一株携带天然质粒的人两歧双歧杆菌新菌株.     

响应面法优化提高萎缩芽孢杆菌E20303抑制马铃薯干腐病病原菌活性的研究

【背景】萎缩芽孢杆菌E20303可以有效地抑制马铃薯干腐病病原菌的活性,而响应面法可在较少的试验次数下优化生防菌发酵培养基配方与发酵条件,获得的最优组合将为马铃薯干腐病生防菌剂的制备与应用提供参考。【目的】以分离自青海察尔汗盐湖湖泥中且对马铃薯干腐病病原菌具有较高抑菌活性的萎缩芽孢杆菌E20303为研究对象,利用响应面法对其培养基配方和发酵条件进行优化,以期提高其对马铃薯干腐病病原菌的抑菌活性。【方法】采用单因素试验、中心组合设计试验及响应面法设计优化萎缩芽孢杆菌E20303发酵培养基配方及发酵条件。【结果】培养基最优发酵配方(g/L):淀粉10.72、酵母粉23.60、七水合硫酸镁16.00、碳酸钙1.14、磷酸二氢钾8.00和磷酸氢二钾16.00,优化后抑菌率由46.51%提高至62.00%;最优发酵条件为装液量102.89 mL、pH 8.64、温度28.73℃、转速200 r/min、培养时间3 d、接种量2%,优化后抑菌率由51.15%提高至72.51%。【结论】实验获得了对马铃薯干腐病病原菌的抑菌活性明显提高的萎缩芽孢杆菌E20303发酵配方及发酵条件,为马铃薯干腐病生防制...     

苏云金芽孢杆菌培养基优化及间歇发酵

对苏云金芽孢杆菌的培养基配方进行室内摇瓶优化筛选,首先用摇瓶培养筛选到Ⅱ号培养基,在此配方的基础上,将培养基组分划分为氮源、碳源及无机盐三因素,采用三因素二水平正交旋转组合设计的方法进行培养基优化组合研究,建立其芽孢产量依氮源、碳源、无机盐的响应面方程。借助此方程获得响应面最佳点即培养基各组分的最佳配比。实验结果表明,该方法是苏云金芽孢杆菌培养基优化中十分简便、实用、快速的途径。此外,对其间歇发酵过程也进行了初步考察。     

发酵麸皮多糖酶辅助提取工艺优化及其生物活性研究

通过响应面法优化提取发酵麸皮多糖的工艺,并评价其体外益生和抗氧化活性。以发酵麸皮多糖的得率为响应值,采用纤维素酶酶解与水浴浸提相结合的方法提取发酵麸皮多糖,以纤维素酶添加量、料液比、水浴浸提温度、水浴浸提时间为试验因素建立数学模型,筛选最佳提取工艺条件。通过测定还原力、DPPH和·OH自由基的清除能力对比发酵和未发酵麸皮多糖的体外抗氧化活性,并通过测定嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌的生长对比发酵和未发酵麸皮多糖的体外益生活性。结果表明,发酵麸皮多糖最佳提取工艺为:料液比1∶16(w/v),酶添加量1 000 U/g,水浴浸提温度90℃,水浴浸提时间60 min,在此条件下发酵麸皮多糖的得率实测值为73. 35%。发酵麸皮多糖具有较强的DPPH和·OH自由基的清除能力,可促进嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和两歧双歧杆菌的生长。     

红色诺卡菌固体培养基配方的优化

应用响应面优化设计法优化固体培养基配方,增大红色诺卡菌的固体培养细胞生物量。首先用Plackett-Burman法从现有培养基组分中找到影响红色诺卡菌细胞生物量的关键因素,再通过最陡爬坡法确定细胞生物量最大的配方,用作中心组合设计(Central Composite Design, CCD)实验的基础起始值,拟合数学模型方程,最后找到最优组分的组合。优化的配方转移至企业实施放大实验,对结果进行验证和比较。试验结果表明,培养基各组分中影响红色诺卡菌细胞生物量的关键因素为蛋白胨、NaCl、牛肉膏;最优固体培养基配方:蛋白胨42 g/L、牛肉膏8 g/L、NaCl 1.2 g/L、甘油10 mL/L、Na_2HPO_4·12H_2O 0.3 g/L、琼脂20 g/L。在细胞生物量方面最优固体培养基配方比原配方高104%。响应面优化设计可用于提高红色诺卡菌细胞生物量固体培养基的优化,也为红色诺卡菌培养条件、液体发酵的优化研究提供参考。     

利用响应面法优化Bacillus natto TK-1产脂肽发酵培养基

用响应面法对Bacillus natto TK-1发酵产脂肽的培养基进行了优化。首先用Plackett-Burman法筛选出三个影响较大的重要因素,分别为：蛋白胨、酵母粉、CaCl2 ,然后进行最陡爬坡实验逼近最佳响应面区域,最后通过Box-Behnken设计,利用SAS软件进行回归分析,得到各因素的最佳浓度。在优化培养基条件下,发酵液的溶血圈直径较初始培养基提高了29.3 %,脂肽的产量提高了约30%。     

低pH处理对两歧双歧杆菌KLDS2.0603黏附能力的影响

【目的】确定低pH处理对两歧双歧杆菌KLDS2.0603黏附能力及其表面物理化学性质的影响。【方法】将两歧双歧杆菌KLDS2.0603菌体在不同低pH的PBS溶液中处理一定时间后,采用平板菌落计数法和直接镜检法,测定其经历不同pH的酸性环境后的黏附能力,及其表面疏水性和自动聚集能力。【结果】不同pH的PBS溶液处理后的双歧杆菌菌体,其黏附能力均不同程度下降,除pH 5.0的处理组外,其余处理组均显著低于空白组。此外,经不同pH的PBS溶液处理后,仅pH 3.0和3.5的两处理组,双歧杆菌表面疏水性显著提高。除pH 1.0、1.5和5.0的处理组外,其余处理组的自动聚集能力均显著下降。【结论】低pH的酸性环境会降低两歧双歧杆菌KLDS2.0603的黏附能力,并且双歧杆菌的自动聚集能力和表面疏水性也发生相应变化。除pH 3.0和3.5的处理组外,三者之间呈现一定的正相关性。     

双歧杆菌防治鼠伤寒沙门菌感染的实验研究

目的　以小鼠为模型,研究双歧杆菌在体内对鼠伤寒沙门菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ,ＳＴＭ） 感染的防治作用。方法　分别用大剂量悉复欢、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ 、生理盐水（ＮＳ） 给三组小鼠灌胃,再用ＳＴＭ 攻击,观察小鼠经上述不同处理前后肠道双歧杆菌数量和ＳＴＭ 攻击后粪便ＳＴＭ 培养阳性率,阳性标本ＳＴＭ 分离值及小鼠ＳＴＭ 感染率;同时用双歧杆菌、悉复欢、双歧杆菌加悉复欢分别治疗ＳＴＭ 感染的小鼠,观察并比较疗效。结果　１． 大剂量悉复欢使用可使小鼠肠道内双歧杆菌明显降低,而双歧杆菌灌胃则肠道双歧杆菌明显增多。双歧杆菌灌胃的小鼠粪便ＳＴＭ培养阳性率、阳性粪便ＳＴＭ 值明显低于用大剂量悉复欢和ＮＳ 的小鼠,小鼠ＳＴＭ 感染发病率也明显较低。２． 对于ＳＴＭ 感染鼠,双歧杆菌与悉复欢联合治疗效果最好。结论　１． 双歧杆菌在体内对ＳＴＭ 有拮抗作用;能预防和减少ＳＴＭ 感染发生;２． 在ＳＴＭ 感染时,先用悉复欢,再用双歧杆菌可以达到预期疗效,双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染有辅助治疗作用。     

酪酸菌对肠道有益菌的增殖作用和共生关系研究

目的通过体外液体培养证明,酪酸菌能与双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和粪链球菌这些肠道有益菌共生.方法在双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和粪链球菌的培养基中,加入1/3比例的酪酸菌发酵提取物,进行室温培养24 h.结果3种菌的活菌含量分别比对照组提高了24.00%、42.57%和6.76%.结论表明酪酸菌对肠道有益菌具有增殖作用.     

Novel Bifidobacterium promoters selected through microarray analysis lead to constitutive high-level gene expression

For the development of a food-grade expression system for Bifidobacterium, a strong promoter leading to high-level expression of cloned gene is a prerequisite. For this purpose, a promoter screening host-vector system for Bifidobacterium has been established using β-glucosidase from Bifidobacterium lactis as a reporter and Bifidobacterium bifidum BGN4 as a host, which is β-glucosidase negative strain. Seven putative promoters showing constitutive high-level expression were selected through microarray analysis based on the genome sequence of B. bifidum BGN4. They were cloned into upstream of β-glucosidase gene and transformed into Escherichia coli DH5α and B. bifidum BGN4. Promoter activities were analyzed both in E. coli and B. bifidum BGN4 by measuring β-glucosidase activity. β-Glucosidase activities in all of the transformants showed growth-associated characteristics. Among them, P919 was the strongest in B. bifidum BGN4 and showed maximum activity at 18 h, while P895 was the strongest in E. coli DH5α at 7 h. This study shows that novel strong promoters such as P919 can be used for high-level expression of foreign genes in Bifidobacterium and will be useful for the construction of an efficient food-grade expression system.     

双歧杆菌脂磷壁酸和总DNA对小鼠免疫功能的影响

目的比较双歧杆菌2种组分即双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）和总DNA的免疫调节作用。方法分别提取和制备双歧杆菌LTA和总DNA。采用淋巴细胞转化法和溶血空斑法分别研究它们对小鼠细胞和体液免疫的调节作用。结果与对照组比较,双歧杆菌和总DNA对T细胞和B细胞都有明显的刺激作用（P〈0．05或P〈0．01）,但是LTA的作用更强（P〈0．01）。结论双歧杆菌细胞壁的LTA和细胞核的总DNA均具有免疫调节作用,但前者效能优于后者。     

人源双歧杆菌的分离纯化及鉴定

利用改良的乳酸细菌（MRS）培养基从健康人群的粪便中进行双歧杆菌的分离筛选。结果表明：在添加有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（X-Gal）的MRS培养基上双歧杆菌的菌落呈典型的乳白色并带有蓝色,其他菌株的菌落呈白色或深蓝色。实验共分离出10株疑似菌株,经生理生化试验和Biolog自动微生物分析系统鉴定,结果发现其中4株为双歧杆菌,这4株菌中有3株为两歧双歧杆菌,1株为长双歧杆菌。和传统MBS培养基相比较,改良MRS培养基能显著提高筛选效率。     

Immunochemical studies on the lipoteichoic acids of Bifidobacterium bifidum subsp. pennsylvanicum

Antisera to lipoteichoic acid of Bifidobacterium bifidum subsp. pennsylvanicum were obtained by injecting lipoteichoic acid/methylated BSA complexes into rabbits. Precipitin tests showed that the glycerol phosphate backbone is primarily responsible for serological specificity while the polysaccharide part of the molecule plays a minor role. Whole cells of B. bifidum subsp. pennsylvanicum were capable of absorbing antibodies, indicating the presence of lipoteichoic acid (14% of the total content) at or near the bacterial surface. Cross-reactivity with strains of the genera Bifidobacterium and Lactobacillus was tested using absorption of antiserum by whole bacteria and reactivity of phenol extracts. The results indicated that lipoteichoic acid is a common antigen within the genus Bifidobacterium. The cross-reactivity with the lactobacilli tested was very low.     

Optimal thermotolerance of Bifidobacterium bifidum in gellan-alginate microparticles

The purpose of this research was to encapsulate Bifidobacterium bifidum using gellan, sodium alginate and prebiotics as coating materials, and to maximize the thermotolerance of the probiotics with an optimal combination of the coating materials. The optimal ratio of the coating materials for the microparticles under heat treatments (75 degrees C, 1 min) was obtained by using the response surface method and the sequential quadratic programming technique. Optimization results indicated that 2% sodium alginate mixed with 1% gellan gum as coating materials would produce the highest thermotolerance in terms of B. bifidum count. The verification experiment yielded a result close to the predicted values, with no significant difference (P > 0.05). The results of heat treatments also demonstrated that the addition of gellan gum in the walls of probiotic microcapsules provided improved protection for B. bifidum. These probiotic counts remained at 10(5)-10(6) CFU/g for the microcapsules stored for 2 months, then treated in heat and in simulated gastric fluid.