长江中下游褶纹冠蚌10个群体COⅠ基因序列变异分析

以线粒体COⅠ基因为分子标记,对长江中下游褶纹冠蚌(Cristaria plicata)10个群体共200个个体的遗传多样性进行了研究。获得了620bp的同源序列,A+T的平均含量为60.1%,明显高于G+C含量(39.9%),有105个核苷酸变异位点,占全部碱基数的17%,转换和颠换之比达到8.7,检测到了58个单倍型(GenBank登录号:EU698893～EU698950),Hap-5是主体单倍型,占总个体数的41%。褶纹冠蚌鄱阳湖群体(PY)平均核苷酸差异数和核苷酸多样性指数均最高,分别为25.426和0.04101,太湖群体(TH)和衢州群体(QZ)遗传多样性参数较低。基于群体间遗传距离构建的NJ系统树中,洪泽湖内的3个群体与巢湖群体首先聚为一支,然后与由钱塘江群体、太湖群体、衢州群体和洪湖群体聚成的分支聚在一起,而后与洞庭湖群体聚在一起,最外侧一支为鄱阳湖群体。分子方差分析(AMOVA)得出群体间的遗传分化指数(Fst)为0.2081(P<0.001),说明我国褶纹冠蚌不同群体间存在一定的遗传分化。     

褶纹冠蚌精子发生的研究

光镜和透射电镜研究结果表明：褶纹冠蚌精子发生是非同步的,精子发生经历了一系列重要的形态和结构变化,主要包括：核逐步延长、染色质浓缩、线粒体逐渐发达与融合、胞质消除以及鞭毛的形成。精原细胞胞质中含有许多致密的轴纤丝,它们后来形成鞭毛轴丝。精母细胞质中含有线粒体、中心粒、内质网和电子透明的囊泡。精细胞分化为４个时期。成熟精子属原始类型,由头部、中段和尾部三部分组成。多核结构和细胞间桥自始至终存在于精子     

褶纹冠蚌精子的超微结构研究

利用电镜褶纹冠蚌精子的形态和结构作了研究,结果表明：精子全长约40-43μm,由头部、中段和鞭毛组成。头部呈子弹头形,长约2.6μm,直径约1.5μm,内含细胞核,核属浓缩型,外被核膜,5个球形的线粒体构成了精子的中段,中段长约0.6μm,最大直径约1.8μm。近端中心粒位于核基部的凹陷处,并通过致密的无定形的基质与远端中心粒相连,远端中心粒与鞭毛领之间通过硬功夫个围中心粒器紧密相连,鞭毛长约37-40μm。精子顶体退化,仅由几个顶体囊泡组成。     

褶纹冠蚌珍珠囊发育的研究

以褶纹冠蚌(Cristaria plicata Leach)为实验对象,应用光学显微技术和扫描电子显微技术研究珍珠囊的发育,结果表明在水温16℃左右时约需30d形成具有单层上皮细胞的珍珠囊,6个月后稳定分泌珍珠质。构成珍珠囊的上皮细胞从高柱状逐渐变成扁平状或立方形,细胞的碳酸酐酶污性也日益增强。大部分移植细胞小片的结缔组织与母蚌的结缔组织共同成层排列在珍珠囊腔外围。游走细胞在珍珠囊的早期发育阶段十分活跃。本文还阐明了珍珠囊液是存在于上皮细胞与珍珠表面之间的一薄层流体状物质。碳酸钙结晶的核化(nucleation)和初期生长都发生在珍珠囊液中。     

淡水育珠蚌褶纹冠蚌血细胞的初步研究

国外关于海产双壳贝血细胞形态与功能的研究虽然较多,但对于淡水育珠蚌褶纹冠蚌的血细胞却无研究报道,国内关于软体动物血细胞的研究甚少,对于育珠蚌血细胞只笼统地称之为游走细胞,颗粒细胞等,对它们的种类和形态无详细的描述。为此作者对褶纹冠蚌的血细胞进行了形态学的初步观察,以期对今后的研究工作提供参考。     

褶纹冠蚌线粒体基因组全序列分析

采用LA-PCR(Long amplification polymerase chain reaction )扩增方法首次获得褶纹冠蚌(Cristaria plicata)线粒体基因组全序列。分析表明:序列全长15 712 bp, 包括13个蛋白质基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和26个长度为2~328 bp的非编码区。A、T、C、G碱基组成分别为36.54%、27.22%、23.22%、13.02%。大部分基因在L链编码, 其中ND3~ND5、ND4L、COI~COIII、ATP6、ATP8、tRNA^Asp和tRNA^His在H链编码。基因排列与同科的射线佩饰真珠蚌(Lampsilis ornata)一致, 与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)在COII和12S rRNA之间存在差异。13个蛋白质基因具有I(AUU、AUC)、V(GUG)、M (AUA、AUG)3种起始密码子, 除ND2终止密码子为不完整的T, 其余基因均为典型的UAA或UAG。22个tRNA中, 除tRNA^Thr、tRNA^Lys、tRNA^Ser(UCN)、tRNA^Asp、tRNA^Arg、tRNA^Tyr和tRNA^Met之外, 其他15个tRNA都具有典型三叶草结构。与其他淡水双壳贝类一样, 褶纹冠蚌具有ATP8基因, 该基因可能与细胞质的渗透压平衡有关。     

褶纹冠蚌精子球的形态和超微结构观察

利用光镜和电镜技术研究了褶纹冠蚌精子球的形态和超微结构.结果表明:精子球呈球形,直径约65-70μm,容纳2300多个精子.从外向内,精子球由非细胞层、表面层和内部区组成.非细胞层薄,厚约0.6μm,易碎.表面层厚约7.5μm,被分隔成许多辐射状排列的小室,单个精子头部位于小室内,指向精子球的中央,而精子的单个鞭毛由精子球的表面伸出.精子质膜在鞭毛领处与表面层相连,相邻精子间无细胞质桥相连.内部区呈球状,内含絮状物质.精子球从雄蚌出水管排出后,位于精子球外周的鞭毛沿固定方向不停地摆动,精子球翻滚着向前运动,且单个精子依次从精子球上脱落下来,最后精子球成为一中空的球,历时120h.       

褶纹冠蚌外套膜组织培养的分泌物的偏光显微镜…

以淡水育珠贝中珍珠形成较快的褶纹冠蚌为材料,用相差显微镜观察组织培养的外套膜的分泌物的形成和变化,用偏光显微镜观察分泌物的双折射现象,并与活体外套膜的分泌物、贝壳的角质层、棱柱层、珍珠层的双折射现象进行比较。结果表明：离体培养的外套膜细胞不仅能产生活体细胞相同的分泌物,而且分泌物还能在培养过程中形成结晶,并逐渐生长。发现外套膜的不同部位分区培养所形成的分泌物的性状与结晶性质和活体有一致性,表明组织     

氨对褶纹冠蚌钩介幼虫及稚蚌的急性毒性

为探究氨对蚌类早期生活史阶段的毒性效应,研究分别以褶纹冠蚌(Cristaria plicata)的钩介幼虫及稚蚌为实验对象开展了24h和48h的急性毒性实验。结果表明:氨对褶纹冠蚌钩介幼虫的24h半致死浓度(LC₅₀)为0.63 mg NH₃-N/L (NH₃,分子氨)和78 mg TAN_7.0,20℃/L (TAN_7.0,20℃,pH 7.0水温20℃时即标准化的总氨氮);氨对褶纹冠蚌稚蚌的48h LC₅₀为0.60 mg NH₃-N/L和104 mg TAN_7.0,20℃/L;上述阈值高于已有研究中氨对其他淡水蚌类的毒性阈值;褶纹冠蚌钩介幼虫对氨氮的耐受性低于稚蚌,二者均低于幼蚌,因此褶纹冠蚌更早期生活史阶段对氨的耐受性更低。相关研究结果可完善氨对蚌类毒性的理解,为水体氮管理策略的制定和蚌类保护提供一定科学依据。     

褶纹冠蚌光珠与骨珠珍珠囊差异的研究

运用多种组织化学方法和电镜技术研究了褶纹冠蚌光珠和骨珠珍珠囊表皮细胞的形态结构、分泌物性质和功能等方面的差异。结果表明：骨珠珍珠囊表皮细胞合成和分泌珍珠前体物质的能力较光珠的强,故骨珠的形成速度比光珠快;光珠和骨珠珍珠囊表皮细胞合成和分泌的蛋白质的差异决定了光珠和骨珠的形成;光珠和骨珠珍珠囊表皮细胞的形态结构特征差异可作为检验和预测人工培育珍珠质量的细胞学标准。     

安徽长江流域黄鳝6个地理种群的遗传变异研究

采用线粒体细胞色素b(Cyt b)为分子标记,研究了安徽长江流域黄鳝6个地理种群(当涂、无为、繁昌、贵池、怀宁和望江)共180尾个体的遗传变异关系。结果显示,在1087 bp序列中共检测到变异位点101个,单倍型68个,碱基组成中A+T的含量大于G+C的含量。6个地理种群的单倍型多样性(0.623~0.940)较高,核苷酸多样性(0.001 78~0.019 04)较低。群体分化指数(Fst:0.026 12~0.947 07)、基因流(Nm:0.027 94~18.6400)和分子变异分析(AMOVA)结果表明,安徽长江流域黄鳝一些地理种群间存在着明显的遗传分化。单倍型系统进化树和进化网络图表明:6个地理种群分为2个大的进化支,当涂与繁昌种群为一支,其余4个种群为另一支。地理隔离和黄鳝有限的迁移能力可能是造成种群遗传分化的原因。     

褶纹冠蚌α2M基因的组织分布及原核表达

α2-巨球蛋白(alpha-2 Macrogloblin,α2M)是存在于无脊椎动物和脊椎动物血浆中的一类广谱性蛋白酶抑制因子。本文利用RT-PCR方法分析了α2M基因mRNA在褶纹冠蚌不同组织的表达及在嗜水汽单胞菌刺激后褶纹冠蚌血细胞中的表达变化。结果表明,α2M仅在血细胞中有表达,而在外套膜、闭壳肌、肝胰腺和鳃组织中均无表达。注射嗜水气单胞菌6h、12h、24h后,褶纹冠蚌血细胞中α2M的mRNA表达水平显著升高,表明α2M是褶纹冠蚌基础免疫系统中的重要组成部分。选择褶纹冠蚌α2M基因包含有受体结合区片段的第1369～1589氨基酸设计含有酶切位点的表达引物,构建重组表达质粒,经过IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE分析表达产物。结果表明重组的α2M在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta-gami(DE3)中获得了表达,产物为40.81KDa的融合蛋白。     

云南省日本三角涡虫不同地理种群mtDNA CO I基因序列分析及其系统发育

对采自中国云南省的日本三角涡虫(Dugesia japonica)13个地理种群的细胞色素C氧化酶I亚基基因(CO I)的部分片段进行PCR扩增、克隆和测序,以采自河南省的日本三角涡虫Luoyang种群为外群,用Clustal X 1.80、MEGA 4.0、PAUP*4.0、MrBayes 3.1.1等程序对其进行序列分析和系统树构建.结果表明:13种群的CO I基因片段A+T的含量差异很小,稳定在67.1%～68.8%之间,明显高于G+C的含量.序列间的成对遗传距离介于0.000～0.199之间,其中Yuxi、Dali2、Lincang1 3个种群间的遗传距离最小,为0;Puer和Xishuang种群间的遗传距离最大,为0.199.最大简约树和贝叶斯树拓扑结构基本一致,均以较高支持率聚为两支.结合云南省的地形地貌及丰富的水系特征,推测云南省日本三角涡虫可能是中部起源,扩散至边缘,也可能相反.究竟哪种推测更为可靠,尚待进一步研究.     

Genetic Diversity of Daphnia pulex in the Middle and Lower Reaches of the Yangtze River

Increased human activities and environmental changes may lead to genetic diversity variations of Cladocerans in water. Daphnia pulex are distributed throughout the world and often regarded as a model organism. The 16S rDNA, cytochrome c oxidase subunit I (COI), and 18S genes were used as molecular marks. The genetic diversity and phylogeny of D. pulex obtained from 10 water bodies in the middle and lower reaches of the Yangtze River were studied. For 16S rDNA, COI gene, and 18S gene, the A+T content (65.4%, 58.4%, and 54.6%) was significantly higher than the G+C content (34.6%, 41.6% and 45.4%). This result was consistent with higher A and T contents among invertebrates. Based on the genetic distances of 16S rDNA and COI genes, the genetic differences of D. pulex from 10 water bodies located in the middle and lower reaches of the Yangtze River in China was minimal (0%–0.8% for 16S rDNA and 0%–1.5% for COI gene). However, D. pulex evolved into two branches in the phylogenetic trees, which coincided with its geographical distribution. Compared with D. pulex from other countries, the average genetic distance of D. pulex obtained from 10 water bodies in the middle and lower reaches of the Yangtze River reached 9.1%–10.5%, thereby indicating that D. pulex may have evolved into different subspecies.     

A catalase from the freshwater mussel Cristaria plicata with cloning, identification and protein characterization

Catalase is an important antioxidant protein which can protect organisms against various oxidative stresses by eliminating hydrogen peroxide. The catalase cDNA of Cristaria plicata (cpCAT) was cloned from the haemocytes using degenerate primers by the method of 3' and 5' rapid amplification of cDNA ends PCR. The gene is 4863 bp long and has a total of two introns and three exons. The precise size and location of the introns and exons have been determined. In addition the full-length cDNA of cpCAT contained 2618 bp, The cDNA contained a 5' untranslated region (UTR) of 136 nucleotides, the 3' UTR of 979 bp with a canonical polyadenylation signal sequence AATAAA and a polyA tail, and an open reading frame (ORF) of 1503 bp, encoding 501 amino acid residues with 56.86 kDa predicted molecular weight. The theoretical isoelectric point was 6.77. BLAST analysis showed that the deduced amino acid sequence of cpCAT had significant homology to catalases from animals, plants and bacteria. The deduced amino acid sequence of cpCAT had characteristic features of catalase family such as catalytic site motif (61FNRERIPERVVHAKGAG77), heme-ligand signature motif (351RLYSYSDTH359), two glycosylation sites (N145, N436), NADPH binding site and the three catalytic amino acid residues (His72, Asn145 and Tyr355). It had no signal peptide. The phylogenetic tree indicated that cpCAT gene was very close to the gene of scallops, Chlamys farreri. The enzymatic activity of purified recombinant cpCAT was 11194.4 ± 40.4 U/mg, it might resist against H(2)O(2). The recombinant enzyme held higher thermal stability, the optimum temperature was 25 °C, it retained more than 82% activity between 25 and 60 °C. The stability of the recombinant enzyme were higher between pH 5 and 10, and the optimal pH value was 7.0. When cpCAT was treated with 2-4 moL/L urea and 1%-3% SDS, the activity was also stable, it kept more than 80% activity.     

长江中游草鱼天然种群的生化遗传结构及变异

采用淀粉或聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分析了长江中游武汉江段草鱼天然种群(n=81)中10种同工酶约28个基因座位的遗传变异型。该种群的多态座位比例为16.7%,平均杂合度为0.0739。而Utter和Folmar(1978)曾报道美国的5个草鱼人工繁殖种群的多态座位比例及平均杂合度分别为6%和0.021。比较结果表明,近交很可能是导致草鱼人工繁殖种群中遗传变异性降低的主要原因。我们认为生产上采用数量大、来源广的亲鱼进行人工繁殖,并定期用天然种群更换或补充繁殖用亲鱼很可能是保持或增加鱼类人工繁殖种群遗传变异性的一种有效手段。     

5种寄生蚌螨COI基因片段序列及系统发育分析

采用PCR技术对5种寄生蚌螨COI基因片段进行序列测定.序列分析的结果表明,比对后的序列总长度均为658 bp;其中A、G、C、T 4种碱基的平均含量分别为34.6%、20.2%、14.3%、30.9%,平均嘧啶含量（65.5%）明显高于嘌呤含量（34.5%）,说明碱基存在偏向性.弯弓蚌螨Unionicola arcuata与Y纹蚌螨U.ypsilophora 的种间遗传差异为26.4%,达到属间分类水平,结果支持Vidrine将沃蚌螨亚属从寄蚌螨亚属中分离的修订;螫爪蚌螨U.chelata与敏捷蚌螨U.agilex之间遗传差异为23.3%,达到属间分类水平,结果支持文春根等将敏捷蚌螨与其姊妹种腰蚌螨U.lumbaria放入韦蚌螨亚属中的修订.以营自由生活的厚蚌螨U.crassipes作为外类群,使用PAUP4.0b 10软件中的最大似然法（ML）和邻接法（NJ）构建系统树,结果显示：在5种寄生蚌螨中敏捷蚌螨可能是最早从祖先种分化出来的种;弯弓蚌螨与Y纹蚌螨可能起源于蚌螨属的同一个祖先.