RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿（ＡＧＰＣ）一步法提取病毒ＲＮＡ,并依据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＦＲＳＶＲＮＡ方法,应用此法对ＨＦＲＳＶ感染的ＶｅｒｏＥ６细胞培养液及ＨＦＲＳ患者血清中的病毒ＲＮＡ进行检测。结果显示,感染细胞培养液及３５例ＨＦＲＳ患者血清均为阳性,正常的ＶｅｒｏＥ６     

戊型肝炎病毒(HEV)合成肽及基因重组抗原免疫反应性研究

用ＯＲＦ２、ＯＲＦ３合成肽抗原（１～１０号）及基因工程重组的ＯＲＦ２抗原（１和２号）分别建立了酶联免疫方法（ＥＩＡ）,检测６０份戊型肝炎病人血清中ＨＥＶＩｇＧ及ＩｇＭ１０个合成肽抗原（Ｓｐ１－Ｓｐ１０）及２个重组抗原（Ｒｅ１、Ｒｅ２）,均和ＨＥＶ阳性血清发生特异反应,但阳性率和反应强度差别很大。以Ｒｅ１（ＯＲＦ２,４０２～６６０）检测的抗体阳性率最高,为９６．７％（５８／６０）;Ｓｐ６（ＯＲＦ３,８８～１２３）次之,为９３．３％（５６／６０）;以上两种抗原混合使用阳性率为１００％（６０／６０）。Ｓｐ６、Ｒｅ１及这两种抗原混合使用检测抗ＨＥＶＩｇＭ,阳性率分别为１８．３％（１１／６０）、６６．７％（４０／６０）和６６．７％（４０／６０）。研究结果表明：合成肽６号（Ｓｐ６）及重组抗原１号（Ｒｅ１）是制备戊肝抗体诊断试剂的理想抗原。     

戊型肝炎病毒（HEV）合成肽及基因重组抗的免疫反应性研究

用ＯＲＦ２、ＯＲＦ３合成肽抗原（１－１０号）及基因工程重组的ＯＲＦ２抗原（１和２号）分别建立了酶联免疫方法（ＥＩＡ）,检测６０份戊型肝炎病人血清中ＨＥＶＩｇＧ及ＩｇＭ１０个合成肽抗原及２人重组抗原,均和ＨＥＶ阳性血清发生特异反应,但阳性率和反应强度差别很大。以Ｒｅｌ（ＯＲＦ２,４０２－６６０）检测的抗体阳性率最高,为９６．７％;Ｓｐ６（ＯＲＦ３,８８－１２３）次之,为９３．３％（５６／６０）;以上     

肾综合征出血热（HFRS）患者尸检肝组织中的病毒抗原－免疫组织化学研究

应用敏感的免疫组织化学多重ＰＡＰ法,观察了ＨＦＲＳ（肾综合征出血热）病毒抗原在ＨＦＲＳ患者尸检肝组织的定位,结果发现１８例尸检肝组织中．１５例肝细胞病毒抗原阳性,２例肝组织血管中白细胞也存在病毒抗原、４例肝内胆管为ＨＦＲＳ病毒抗原阳性,主要分布于肝内大胆管,小叶间胆管和小胆管的上皮细胞中,ＨＦＲＳ病毒抗原阳性物质呈地颗粒状,定位于胆管上皮细胞核上区的胞质中。     

斑点杂交检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

本研究用非放射性标记物—地高辛碱性磷酸酶标记肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）ｃＤＮＡ制备探针,检测恙螨、鼠肺中ＨＦＲＳＶＲＮＡ的ＲＴＰＣＲ扩增产物中目的片段。结果表明：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体螨５０只组、１０只组,游离螨５０只组、１０只组,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ,抗原阴性鼠肺１０００ｍｇ检测结果为阳性,呈现明显紫褐色斑点,而ＲＴＰＣＲ检测时未能扩增出ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠肺１０００ｍｇ和游离螨１０只组中的目的条带。实验结果说明,斑点杂交检测方法比ＲＴＰＣＲ敏感。     

人单核细胞系U_（937）和T细胞系HSB_2细胞的HSV－1感染

用ＨＳＶ－１接种人单核细胞传代株Ｕ＿（９３７）和Ｔ淋巴细胞传代株ＨＳＢ＿２细胞,通过对病毒滴度、细胞增殖与病变、病毒抗原表达及病毒ＤＮＡ的动态观察,研究了ＨＳＶ－１感染两种细胞的特点。结果发现接种病毒后,Ｕ（９３７）细胞仅允许病毒短时间低滴度复制,培养上清中病毒滴度在１２天内降至测不出水平,细胞经过１～２周后增殖受抑、死亡增多,然后又逐渐恢复;用ＬＰＳ持续刺激则能提高病毒感染滴度,延长感染时间,形成短期持续感染。ＨＳＢ＿２细胞允许病毒复制至较高滴度,呈现急性杀细胞性感染;用ＰＨＡ持续刺激也不改变细胞感染的特点。     

HFRS患者特异性IgA,IgE抗体及其免疫复合物测定

为进一步研究ＨＦＲＳ免疫损伤机制,用ＥＬＩＳＡ法同步测定了１０８例不同临床型、不同病日、病期ＨＦＲＳ患者血清中特异性ＩｇＡ、ＩｇＥ抗体以及ＨＦＲＳ病毒特异性ＩｇＡ、ＩｇＥ型ＣＩＣ的水平及检出率。发现ＨＦＲＳＩｇＡ型抗体在轻型病例高于中、重型病例;ＨＦＲＳＩｇＥ型抗体及ＩｇＥ型ＣＩＣ在重型病例高于中、轻型病例。上述差异在病程早期（发热、休克少尿期,或是３～８病日）尤为突出。ＩｇＡ型ＣＩＣ则未见到上述差异。     

肾综合征出血热Ⅱ型疫苗(L99株)免疫效果及对Ⅰ型病毒攻击的保护作用

为探讨Ⅱ型肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）疫苗的实际流行病学免疫效果及对姬鼠型ＨＦＲＳ的交叉保护作用,我们选择混合型疫区为研究现场,应用Ⅱ型ＨＦＲＳ疫苗（Ｌ９９株）进行人群接种观察,研究结果表明,该疫苗对以家鼠型为主的混合型疫区具有明显的保护效果,保护率为１００％,接种组家鼠型和姬鼠型ＨＦＲＳ的理论发病数和实际发病数间均具有显著性差异（Ｐ值分别为Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,由此可见,Ⅱ型ＨＦＲＳ苗（Ｌ９９株）除适合家鼠型疫区外,还可在混合型疫区和姬鼠型疫区推广使用     

一种新的免疫—PCR系统的建立和应用研究

把ＰＣＲ技术作为指示系统引入免疫检测中,建立了免疫－ＰＣＲ技术。在本研究中,以ＰＥＩ作交联剂,首次成功地将特异性抗体直接与ＤＮＡ交联,构建了三种Ａｂ－ＤＮＡ基因探针,组成新的免疫－ＰＣＲ检测系统。此三种特异性Ａｂ－ＮＤＡ探针可用于检测三种相应抗原。检测ＨＳＡ抗原的最低含量可达１０＾－１８ｍｇ／ｍｌ,灵敏度比ＥＬＩＳＡ高１０＾６倍。     

肾综合征出血热Ⅱ型疫苗（L99株）免疫效果及Ⅰ型病毒攻击的？…

为探讨Ⅱ型肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）疫苗的实际流行病学免疫效果及对姬鼠型ＨＦＲＳ的交叉保护作用，，我们选择混合型疫区为研究现场，应用Ⅱ型ＨＦＲＳ疫苗（Ｌ９９株）进行人群接种观察，研究结果表明，该疫苗对以家鼠型为主的混合型疫区具有明显的保护效果，保护率为１００％，接种组家鼠型和姬鼠型ＨＦＲＳ的理论发病娄笔实际发病数间均具有显著性差异，由此可见，Ⅱ型ＨＦＲＳ苗（Ｌ９９株）除适合有鼠型疫区外，还可在混合     

用原位分子杂交和免疫组化研究肾综合征出血热肾组织中的病毒感染

应用原位分子杂交和免疫组化技术研究了陕西、沈阳、上海、江西、广州等地收集的３６例肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）尸检肾组织中的病毒ＲＮＡ和抗原的定位和分布。病毒ＲＮＡ检测３４例,２８例阳性;抗原检测３４例,３０例阳性,病毒ＲＮＡ及其抗原主要定位于细胞胞浆中。西安及沈阳地区的病例,病毒ＲＮＡ和抗原阳性部位主要是肾小管上皮细胞,较少出现血管阳性。上海、江西和广州地区病例病毒ＲＮＡ主要出现于肾间质血管和少数病例的个别肾小球毛细血管和肾小管上皮细胞;病毒抗原分布于肾间质血管和肾小管上皮中。１例（广州病例）肾血管平滑肌细胞检测到空泡状病毒ＮＰ抗原。另外在３例西安病例和９例上海病例肾远曲小管和集合管上皮中检测到ＮＰ和ＨＡ阳性的病毒包涵体。结果说明ＨＦＲＳ病毒可感染肾脏中肾小管上皮和血管内皮,并在肾小管上皮细胞产生包涵体。不同地区病例肾脏中病毒感染的部位不同,可能与不同地区病例所感染的病毒毒株或血清型不同有关。肾小管上皮细胞和血管内皮的损伤除病毒直接作用外,还可能有免疫因素参与。     

非洲猪瘟病毒j5R膜蛋白的电脑预测和实验证实

蛋白多肽二级结构的电脑预测表明,非洲猪瘟病毒（ Ａｆｒｉｃａｎ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ , Ａ Ｓ Ｆ Ｖ）ｊ５ Ｒ阅读框编码１２ ．９ ｋ Ｄａ 膜蛋白。该蛋白的 Ｃ 末端含有一个潜在抗原决定簇,针对其合成肽的抗体能在 Ａ Ｓ Ｆ Ｖ 感染细胞和病毒颗粒中检测到２３ 或２５ ｋ Ｄａ（ 取决于不同毒株） 特异蛋白。免疫荧光试验显示,ｊ５ Ｒ 蛋白主要位于感染细胞的病毒复制部位。油水两相分离和细胞分级分离试验结果证明ｊ５ Ｒ 蛋白是膜相关蛋白     

原位分子杂交法检测恙螨体内肾综合征出血热病毒核酸的研究

为探讨肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）在恙螨体内的分布和定位,采用原位分子杂交技术检测恙螨体内ＨＦＲＳＶＲＮＡ。结果发现：原位分子杂交技术的检出阳性率较ＩＦＡＴ高;ＨＦＲＳＶ阳性信号颗粒呈弥散分布,多见于恙螨幼虫和若虫的腹部组织细胞内,该部位是恙螨的卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞。前体组织细胞内少见;个别幼虫和若虫的前足和中足细胞内亦可见到ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号。在原位分子杂交中,若虫组织细胞内的ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号较幼虫密集而且量多,表明ＨＦＲＳＶ在恙螨体内可传递并有增殖现象     

汉滩病毒感染体外培养神经元损伤及抗体对其保护作用

用体外培养的昆明小鼠胚胎脑皮质神经元,感染汉滩病毒后,　检测原癌基因ＦＯＳ的表达,加入ＨＦＲＳ病人恢复期血清,观察其对神经元的保护作用。将病毒　感染的神经元经免疫组化染色,检测原癌基因ＦＯＳ的快速表达;在病毒感染的神经元内加入Ｈ　ＦＲＳ病人恢复期血清,使用ＭＴＴ比色试验检测神经元存活情况。病毒感染的神经元ＦＯＳ表达明　显　增高,与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．００１）;　ＨＦＲＳ病人恢复期血清保护病毒感染的神经元　组　与感染对照组神经元活性明显不同,有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。　ＨＴＮＶ感染体外培养的神经元　,会使细胞内产生ＦＯＳ的快速表达,ＨＦＲＳ病人恢复期血清对病毒感染的神经元有一定的保护　作用。     

以人工合成多肽为抗原的戊型肝炎病毒抗体检测方法的建立和评价

酶联法是ＨＥＶ感染的主要检测方法,多采用基因表达产物为抗原。近来由于人工合成多肽抗原克服了基因重组抗原制备复杂、非特异结构多、难以纯化的缺点,已广泛用于多种病毒感染的检测。根据已发表的ＨＥＶ氨基酸序列的保守性及亲水性等特点,设计合成了两个多肽ＥＳＰ１和ＥＳＰ２,分别位于ＯＲＦ２和ＯＲＦ３区,以此为混合抗原建立了检测ＨＥＶ抗体的间接ＥＬＬＳＡ法,与市售优质试剂比较,其阳性符合率为９７．７５％,阴性符合率为９９．４３％,总符合率为９８．８６％。该方法灵敏度高、特异性强、安全快速,是检测ＨＥＶ感染和流行病学调查的理想方法。     

Epstein—Barr病毒BCRF1基因重组质粒的构建及其在真核细胞中的表达

应用基因重组技术,把编码ＥＢ病毒早期蛋白的ＢＣＲＦ１基因重组于真核表达载体ｐＳＧ５中,并使该基因在乳地鼠肾（ＢＨＫ）传代细胞中获得良好表达,表达率为０．５％。血清学实验证实,鼻咽癌、类风湿性关节炎病人和正常人血清中均不同程度地含有ＩｇＧ／ＢＣＲＦ１抗体,抗体阳性率分别为９２％、８６％和７７％,几何平均滴度（ＧＭＴ）分别是１：１６．３５、１：１４．７２和１：１０．１５。两组病人和正常人血清中ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１抗体阳性率和滴度之间有较大差别,它们的阳性率分别是７４％、７１％和１２％,ＧＭＴ分别是１：１２．３２,１：１０．５６和１：２．３５。还证实,鼻咽癌和类风湿性关节炎病人血清中ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１和ＩｇＡ／ＥＡ（早期抗原）抗体阳性率和滴度间有很好的相关性,此为首次报导。重组表达质粒ｐＳＧ５－ＢＣＲＦ１的构建和表达为进一步研究ＢＣＲＦ１基因在病毒感染和肿瘤免疫中的作用创造了条件。本文就质粒的构建和３组血清中ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１、ＩｇＡ／ＢＣＲＦ１、ＩｇＡ／ＥＡ和ＩｇＧ／ＢＣＲＦ１抗体间的关系和有关问题进行了讨论。     

抗ToRCH—IgM型抗体临床对比检测研究

ＴｏＲＣＨ系列病原微生物（包括弓形虫Ｔｏｘ、风疹病毒ＲｕＶ、巨细胞病毒ＣＭＶ、单纯疱疹病毒ＨＳＶ　　Ⅰ／Ⅱ等）是一组具有致畸作用的病原体,孕妇感染可导致流产　、早产、畸形甚至死胎。目前ＴｏＲＣＨ　ＩｇＭ型抗体的检测都在不同程度上受到非特异性的干扰,采用有效方法消除干扰对ＴｏＲＣＨ　ＩｇＭ型抗体检测的准确性至关重要。为此我们对比了多种消除ＩｇＭ检测中非特异性干扰　的方法,并以最佳方法对２５６例女性献血者、１４３例正常妊娠和６１例异常妊娠标本进行ＴｏＲＣＨ　　ＩｇＭ抗体的对比检测。结果显示健康人群中ＴｏＲＣＨ活动性感染率较高,健康孕妇ＴｏＲＣＨ　ＩｇＭ的　总阳性率高达２３．１％（其中Ｔｏｘ５．６％、ＣＭＶ９．８％、ＲｕＶ８．４％、ＨＳＶ４．９％）;而异常妊娠则显著上升　（　ｐ＜０．０１）,其中Ｔｏｘ、ＣＭＶ、ＲｕＶＩｇＭ阳性率上升明显（ｐ＜０．０５）,分别为１９．７％、２６．２％、２４．６％　。　由此可见孕期ＴｏＲＣＨ病原微生物活动感染是致异常妊娠的主要因素之一,应严密监视孕期ＴｏＲ　ＣＨ病原微生物活动性感染,特别是弓形虫、风疹病毒和巨细胞病毒的感染。     

呼吸道合胞病毒包膜糖蛋白的抗体反应及临床意义

随着病毒免疫学研究的不断深入,呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）包膜糖蛋白的抗体反应在ＲＳＶ发病中的作用越来越引人们的重视。动物实验已证明体液免疫具有一定的保护作用,但在人类材料较少。本文综述了Ａ、Ｂ两亚型ＲＳＶ外膜Ｇ、Ｆ糖蛋白的特异抗原组分,抗体反应的相互联系和在抗ＲＳＶ感染的作用。     

新型戊型肝炎诊断试剂盒的研制及其应用

用ＨＥＶＯＲＦ３合成肽及ＯＲＦ２重组抗原研制成新型ＨＥＶＥＩＡ诊断试剂盒。与ＧｅｎｌａｂｓＨＥＶＥＩＡ检测比较,灵敏度和特异性均达１００％（６０／６０）。三批试剂精密性测定均＜１０％。该试剂盒置４℃８个月或３７℃４ｄ保持稳定。检测不同肝炎患者ＨＥＶ抗体,发现急性非甲非乙非丙肝炎中有６３．２％,甲肝有１３．４％,乙肝有８．３％,丙肝有６．６％,正常人群为２．９％。所研制的戊型肝炎诊断试剂盒,灵敏度高,特异性强,精密性好,稳定性合格。适用于戊型肝炎诊断及戊肝病毒感染的流行病学调查     

应用反转录——套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病…

采用５’端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍－酚一步法（胍酚法）提了病毒ＲＮＡ,进行反转录－套式ＰＣＲ,检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个ＰＦＵ病毒的ＲＮＡ〉比磁珠法敏感１０倍,整个检测过程在５小时完成。应用该方法对１３７份汉滩型和汉城型ＨＦＲＳ病人血清进行检测分型,总阳性率达６０．５０％。其中,病程在７日以内（急性期）的从血清仍