小麦原生质体分离过程中生理状态的变化

酶解处理使小麦对肉原生质体膜流动性降低,膜脂过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）积累,说明脱璧过程对细胞有伤害作用,损伤位点可能发生在膜上。胚性愈伤组织的具有分裂能力的原生质体,不表现上述变化。酶解脱壁还使超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性上升;过氧化物酶（ＰＯＸ）在叶肉原生质体中活性下降,在胚性愈伤组织来源的原生质体中活性上升。以上结果表明：在原生质体分离过程中,细胞的生理特性发生了变化;膜损伤的发生可能与原生质体能否进入正常分裂状态有关。     

抗坏血酸对花生原生质体分离过程中膜损伤的保护作用

酶解处理使花生叶肉细胞原生质体膜脂质过氧化产物丙二醛(MDA)积累,添加抗坏血酸(ASA)能降低MDA的积累。未添加ASA时,酶解初期,过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性上升,说明原生质体存在各种抵御不良变化的机制,但酶解时间加长,POD活性下降。添加ASA能使超氧化物歧化酶(SOD)活性明显上升。试验结果说明:在原生质体分离过程中会导致膜损伤,细胞自身存在一个响应的防御机制,添加ASA能降低酶解过程对原生质膜的损伤。     

花楸体细胞胚发生过程中抗氧化酶活性的变化

花楸体细胞胚发生过程中,胚性愈伤组织可溶性蛋白含量高于其他类型的愈伤组织,非胚性愈伤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性均高于其他类型的愈伤组织;SOD、POD活性均在胚性细胞向球形胚转化时下降,球形胚向心形胚发育时下降,心形胚向鱼雷形胚和鱼雷形胚向子叶形胚发育时再升高;CAT活性变化规律与SOD和POD活性变化不同,从胚性细胞到鱼雷形胚的3个发育时间内表现为下降-升高-下降的趋势,鱼雷形胚向子叶胚发育时略有回升。据此认为,SOD酶活性降低似可作为花楸胚性细胞分化以及胚胎早期发育的一个判断指标。     

香果树体细胞胚胎发生过程中4种同工酶的研究

用非变性聚丙烯凝胶电泳技术对香果树体细胞胚胎发生及形态建成过程中过氧化物酶(POD)、酯酶(EST)、淀粉酶(AMY)和超氧化物歧化酶(SOD)4种同工酶进行分析.结果表明:香果树体细胞胚胎发生及形态建成过程中,POD、EST、AMY和SOD活性变化与胚性愈伤组织的诱导及体细胞胚的发生发育密切相关.非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织酶谱差异明显,胚性愈伤组织中EST和AMY同工酶酶带多且活性高,非胚性愈伤组织中缺乏EST和AMY同工酶表达,AMY同工酶可作为胚性细胞分化和发育的重要标志.香果树体细胞胚形态建成过程中,球形胚时期的AMY、POD、EST同_T酶活性最强,表明这一时期生理代谢旺盛,是体细胞胚形态建成的关键时期;POD、AMY和SOD 3种同工酶的酶谱及表达强弱在形态建成的不同时期呈现有规律的变化,可作为香果树体细胞胚发生发育特定时期的参考标记. 与胚性愈伤组织的诱导及体细胞胚的发生发育密切相关.非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织酶谱差异明显,胚性愈伤组织中EST和AMY同工酶酶带多且活性高,非胚性愈伤组织中缺乏EST和AMY同工酶表达,AMY同工酶町作为胚性细胞分化和发育的重要标志.香果树体细胞胚形态建成过程 ,球形胚时期的AMY、POD、EST同_T酶活性最强,表明这一时期生理代谢旺盛,是体细胞胚形态建成的关键时期;POD、AMY和SOD 3种同工酶的酶谱及表达强弱在形态建成的不同时期呈现有规律的变化,可作为香果树体细胞胚发生发育特定时期的参考标记. 与胚性愈伤组织的诱导及体细胞胚的发生发育密切相关.非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织     

楸树体细胞胚胎发生过程中4种同工酶分析

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对楸树体细胞胚胎发生过程中的酯酶(EST)、过氧化物酶(POD)、淀粉酶(AMY)及ATP酶4种同工酶进行分析。结果表明,EST及POD同工酶酶带在楸树体细胞胚胎发生不同时期呈现规律性变化,胚性愈伤组织中EST、POD同工酶酶带较非胚性愈伤组织多且表达活跃,子叶胚时期活性最强,表明这一时期细胞内代谢旺盛。EST、POD、AMY及ATP同工酶在楸树胚性与非胚性愈伤组织中谱带差异明显,表明这4种同工酶与体胚发生具有密切关系,可以作为楸树胚性愈伤组织和体胚发生的重要标志。     

花烛体细胞胚胎发生过程中相关生理生化特征研究

以花烛品种Amigo为材料,研究了悬浮培养条件下花烛体细胞胚胎发生过程中相关生理生化特征。结果表明:POD、CAT在胚性愈伤组织阶段维持较高活性,而SOD在体胚发育后期阶段活性较高;可溶性蛋白质含量在胚性愈伤组织阶段出现高峰;可溶性糖含量变化表现为先上升后下降的趋势,而淀粉含量表现为先下降后上升的趋势;SDS-PAGE电泳分析表明,胚性愈伤组织阶段蛋白质表达量高,种类多,并出现多种特异蛋白。分析认为胚性愈伤组织阶段是调控花烛体细胞胚胎发生过程的关键阶段。     

抗坏血酸对沙打旺原生质体分离和培养中膜损伤及相关酶活性的影响

抗坏血酸（ＡＳＡ） 能减轻沙打旺原生质体的褐化,改善原生质体的培养状况。ＡＳＡ的作用可能与它增强原生质体抗过氧化能力有关。酶解处理诱导原生质体超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 和抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）活性升高,但培养过程使ＡＰＸ 活性明显下降,原生质体清除过氧化物能力减弱,膜脂过氧化产物丙二醛（ ＭＤＡ） 积累增加,膜发生损伤。向酶溶液和培养基中添加ＡＳＡ 可显著提高ＳＯＤ 尤其是ＡＰＸ 活性,减轻膜脂过氧化,增强原生质体的存活力,促进原生质体的分裂和细胞克隆的形成。所有处理中过氧化氢酶（ＣＡＴ） 活性变化不大,表明它在原生质体清除过氧化物过程中不具主要作用。     

低温锻炼过程中柑桔原生质体抗冻性的变化

在低温锻炼过程中,柑桔原生质体抗冻性逐步提高,至第１２ｄ达最大,随后缓慢降低。同一品种胚性愈伤组织的原生质体的抗冻性比叶肉原生质体强。     

低温锻炼过程中柑桔原生质体抗冻性的变化(简报)

在低温锻炼过程中，柑桔原生质体抗冻性逐步提高，至第12d达最大，随后缓慢降低。同一品种胚性愈伤组织的原生质体的抗冻性比叶肉原生质体强。     

连香树胚性与非胚性愈伤组织生理生化差异及同工酶分析

本研究以连香树未成熟种子子叶胚诱导产生的胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织为原材料,测定了两者的可溶性蛋白质、可溶性糖及游离脯氨酸的含量,并利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(polyacrylamide gelelectrophoresis, PAGE)对两者的过氧化物酶(peroxidase, POD)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、淀粉酶(amylase, AMY)同工酶进行了分析。比较发现胚性愈伤组织在可溶性蛋白质和游离脯氨酸的含量上均极显著高于非胚性愈伤组织。在可溶性糖含量上,胚性愈伤组织也显著地高于非胚性愈伤组织。胚性愈伤组织具有较高的代谢活性,为进一步胚性分化提供物质和能量基础。POD、SOD和AMY同工酶在连香树胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织中酶带差异明显,表明这3种酶的活性与胚性愈伤组织的诱导密切相关,酶谱的差异可作为体细胞胚胎发生的参考标记。     

影响谷子原生质体看护培养的一些因素

研究了谷子原生质体看护培养中一些问题。结果表明：不同种植物愈伤组织做看护细胞对谷子原生质体培养植板率有不同的影响。用光头稗草愈伤组织对谷子胚性、非胚性或中间型愈伤组织的原生质体进行看护培养,以对胚性愈伤组织原生质体的效果最好。看护培养主要是作用于原生质体形成完整细胞后的生长发育,试验没有观察到明显的看护细胞数量效应。     

疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的建立及其原生质体的培养和植株再生

云南疣粒野生稻的成熟种子经55℃温度处理3d打破休眠后,在诱导培养基上诱导出愈伤组织。挑选胚性愈伤组织置于液体培养基中振荡培养,经3个月的继代培养,建立胚性细胞悬浮系。悬浮细胞经酶解、去壁后获得大量原生质体,固体包埋后添加液体培养基进行原生质体培养。在培养过程中调节培养体系的渗透压,获得小愈伤组织;经增殖后在分化培养基上诱导产生胚状体,成功得到疣粒野生稻的原生质体再生植株。     

红豆草体细胞胚胎发生早期过氧化物酶和酯酶同工酶酶谱变化

红豆草下胚轴切段接种于含1mg/l BA,1mg/l KT的LS培养基上,通过筛选和繁殖由一块外植体而来的淡黄色愈伤组织,而得到生理状态比较一致具有较高胚性发生能力的非胚性愈伤组织,将其转移到含1mg/l BA的LS培养基上后可诱导体细胞胚眙发生。在体细胞胚胎发生早期发现过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶酶谱均有规律性变化。过氧化物酶同工酶酶谱在胚性培养的第10天,两条明显的A_1、A_2带消失。酯酶同工酶各酶带之间酶活性比例在胚性培养过程中变化很大,培养后期酶带变得不明显或酶带数下降。说明胚性发生过程遗传信息的表达有选择性并为激素所调控。     

体细胞胚发生的生化基础

在胚性细胞分化和分裂过程中ATP酶活性和分布的动态变化表明,这些胚性细胞进行着旺盛的主动物质吸收和活跃的新陈代谢过程。在多种植物的体细胞胚发生中过氧化物酶的活性与同工酶的种类都高于对照,而且在大麦中发现过氧化物酶、酯酶和酸性磷酸酶同工酶的结合应用可以作为体细胞胚发生的标志酶。胚性愈伤组织中可溶性蛋白质含量与组分远高于或多于非胚性愈伤组织。大多数材料中都存在45kD-55kD的胚胎发生特异性蛋白质组分。而且在体细胞胚发生中蛋白质和核酸代谢动态呈规律性变化,首先是RNA合成速率增加,继而是蛋白质的迅速合成,并在胚性细胞分化和发育过程中一直保持相对较高水平,其中mRNA种类丰富,不同发育时期mRNA种类不同,因此转译形成多种蛋白质。DNA的代谢相对较稳定,但在胚性细胞系中DNA合成量仍高于非胚性细胞系。加入蛋白质或核酸合成抑制剂,不仅抑制了蛋白质和核酸的合成,同时也抑制了体细胞胚的发生与发育,而且抑制剂加和时间愈早,影响愈严重。由此表明,蛋白质与核酸的合成为体细胞胚的分化和发育奠定了分子基础。     

枸杞体细胞胚发生中外源Ca2+的作用

脱分化的枸杞叶片外植体愈伤组织转入含有2,4-D的MS培养基上分化培养后有大量胚性细胞的分化和体细胞胚发生;加入一定量的外源Ca2 或45Ca2 ,明显地提高了胚性愈伤组织中体细胞胚发生的频率;加入Ca2 的鳌合剂EGTA则显著降低了体细胞胚发生频率;胚性愈伤组织中CaM的水平在多细胞原胚期和球形胚期显著升高,加入外源Ca2 后CaM含量几乎成倍增加;胚性愈伤组织中蛋白质组分与活性都远远多于或高于非胚性愈伤组织,加Ca2 后蛋白质组分种类也增加.     

影响谷子原生质体看护培养的一些因素

研究了谷子原生质体看护培养中的一些问题。结果表明：不同种植物愈伤组织做看护细胞对谷子原生质体培养植板率有不同的影响。用光头种草愈伤组织对谷子胚性、非胚性或中间型意伤组织的原生质体进行看护培养,以对胚性意伤组织原生质体的效果最好。看护培养主要是作用于原生质体形成完整细胞后的生长发育。试验没有观察到明显的看护细胞数量效应。     

谷子胚性愈伤组织粘液提取物对原生质体培养的影响

将谷子胚性愈伤组织粘液提取物以谷子原生质体培养基中,其对原生质体培养的影响表明该提取物有助于原生质体形成的细胞壁;并且该类有粘液的愈伤的原生质体游离所需的酶液的愈伤组织的原生质体游离所需的酶液浓度低,处理时间短。由原生质休形成这完整细胞的数量在一定范围内与谷子原生质体培养的植板率相对应。通过增加形成完整细胞的数量较大幅度地提高原生持体培养的植板率。     

苜蓿组织培养中球形胚发生时特异蛋白质和同工酶分析

试验在苜蓿组织培养中,对球形胚形成过程中特异蛋白质表达的模式、过氧化物酶及酯酶同工酶酶谱变化进行研究,结果表明：苜蓿组织培养中从胚性愈伤组织到球形胚发育的进程中,顺序消失和出现了11种中小分子量多肽;过氧化物酶同工酶酶谱发生了显著的变化;酯酶同工酶酶谱变化不大,但其总活力对于维持体细胞胚胎发生是必须的。     

胶烟草叶肉原生质体的植株再生及转化试验

胶烟草叶肉原生质体经培养得到的愈伤组织在含0.5-1.5mg/1 2,4-D的MS培养基上培养40-50天后可形成体细胞胚,2,4-D的浓度在1 mg/1时诱导频率最高,可达45%。体细胞胚在无激素的MS琼脂培养基中即可形成完整植株。通过愈伤组织分化过程中的组织学观察发现,在胚状体形成过程中细胞内淀粉粒呈一动态变化,推测胚状体邻近的愈伤组织细胞在胚状体发育提供营养方面可能起重要作用。利用根癌农杆菌改建的Ti质粒对胶烟草原生质体进行遗传转化,在无激素的MS培养基上筛选得到基因4的转化细胞克隆。电泳法证明T-DNA胭脂碱合成酶基因在转化细胞内表达。     

水稻愈伤组织内部胚性细胞的形成及发育

发育成胚状体的水稻愈伤组织表面胚性细胞, 在继代过程中被非胚性细胞旺盛的分裂所包围, 渐渐形成内部胚性细胞。其形态结构与表面胚性细胞相同, 但周围缺乏表面细胞下面的一层至几层含丰富的淀粉粒的细胞。内部胚性细胞形成团后先在以处形成突起, 产生根冠原, 逐渐形成根而突出愈伤组织。内部胚性细胞可向四周同时但不同步形成根冠原。未见芽或胚状体从内部胚性细胞产生。推测胚性愈伤组织失支胚胎发生能力及分化能力可能部分地与胚性细胞部分裂或分裂不旺盛、而非胚性细胞分裂旺盛从而使胚性细胞被包围、稀释有关。