痢疾基因工程三价菌苗候选株的构建

通过DNA体内外同源重组, 用霍乱毒素B亚单位基因(ctxB)完全取代了福氏志贺氏2a T32株染色体上的asd基因, 获得了稳定表达CtxB的DAP依赖株FWL01. 随后, 用T32株的asd基因标记志贺氏宋内S7株的Ⅰ相大质粒, 并将其诱动至FWL01, 构成三价菌苗候选株FSW01. 在该菌苗候选株中, 表达宋内Ⅰ相O抗原的大质粒与宿主菌是平衡致死的. 因此, 该候选株在没有任何抗生素存在情况下, 能稳定地表达福氏 2a, 宋内O抗原和CtxB. 豚鼠眼角膜试验和HeLa细胞侵袭试验证明FSW01无毒, 家兔免疫试验证实了其有很好的免疫原性. 小鼠和猴体免疫保护试验显示该候选株对相应的有毒株攻击具有很好的保护效果.     

细菌毒素菌苗

<正>一、序言 本世纪四、五十年代,医务界盛行化疗,当时不少医生和生物学科学家以为从此可以控制并消灭传染病了,尤其是细菌传染病。但事实上并非如此,由于抗药菌株的不断出现,药价昂贵以及这些药物反复使用的困难,使传染病仍然是当今主要问题之一,尤其是一些发展中的国家,更是如此。因此,人们怀着强烈的愿望,要重新以预防接种为武器与传染病展开斗争。     

流行性脑脊髓膜炎菌苗

<正>一、一般情况 脑膜炎球菌在世界范围内引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)周期性的爆发流行。非洲的“脑膜炎带”发病率高达十万分之40～50,而发达国家的流脑发病率约为十万分之1～5。脑膜炎球菌根据其荚膜多糖的化学结构与免疫学特性可分成A、B、C、H、I、K、L、X、Y、Z、29E及W_(135)等12个血清群,除I、K二群外,其他十个血清群的结构已弄清,见表一,约90%的流脑是由A、B、C群菌株引起的。A群菌在亚洲与非洲是流脑的主要致病菌,B、C群则是引起欧洲与美洲的流脑主要致病菌。 1969年Gotsehlich等研制的A、C群多糖菌苗成功以来,这是第一个化学纯的细菌性菌苗。1975年美国批准A、C群多糖菌苗,法国Mexi—     

肠道菌苗的现状与展望

<正> 肠道菌苗目前有伤寒菌苗(包括TAB)、霍乱菌苗,大部分国家均在生产。这是两种截然不同的细菌,但因对人所致疾病都是肠道感染,所以归于一类。此外正在研制的有痢疾菌苗,大肠埃希氏菌菌苗等。有可能进行研制的还有鼠伤寒菌苗、付溶血弧菌菌苗。肠道传染病在第三世界国家中发病率和死亡率都很高,据世界卫生组织腹泻病控制计划(CDD)负责人Merson1981年报告,1980年全世界(主要是第三世界)七亿人口中(不包括中国)有400万人死于腹泻。最近的情况见下表。     

人用炭疽菌苗的研究进展

<正>炭疽是一种人兽共患的急性传染病,羊、牛、马等家畜易患本病,人由于接触炭疽病畜或屠宰、剥食而受染。炭疽的病原体是炭疽杆菌,是一种需氧芽胞杆菌。炭疽菌的毒力除决定于染色体基因外,还与两个编码质粒致病因子有关:一个是荚膜质粒(编码pxo2),主要是聚—D—谷氨酸,在体内能抑制细胞的吞噬作用,在体外能阻断菌体胞壁上的噬菌体受体,故常称为侵袭因子,有助于病菌在体内繁殖扩散和建立感染;另一个是炭疽毒素质粒(编码pxo1),由致死因子(LF)、水肿因子(EF)和保护性抗原(PA)三种成分组成。三种成分单独注射动物未证明有毒素活性,但若将LF加PA静脉注射可致死小白鼠、大白鼠和豚鼠。EF加PA皮内注射可引起豚鼠和家兔皮肤水肿。三种毒素成分的分子量在80～90KDa之间,可能PA结合     

伤寒减毒TY21a株口服活菌苗智利现场效果观察

<正>伤寒病现在仍然是世界上不发达地区的一个重要公共卫生问题,也对来访的发达国家旅游者造成威胁。实际上所有地区的伤寒病,发病率最高是在5—19年龄间的在校儿童。由于学龄儿童是一个容易掌握的人群,根据学校的免疫规划,控制疾病也就有了可能。直到目前,预防伤寒的标准制品是用于     

关于流感嗜血杆菌及其菌苗的研究

<正>流感嗜血杆菌是1892年由Pfeiffen从流感患者的鼻咽分泌物中分离出来的,是G~-短小杆菌,典型的流感嗜血杆菌具有荚膜是一种可溶性的型特异多糖,Pittman根据荚膜多糖的抗原的不同将共分为a、b、c、d、e,f等6个型,其中以b型的致病力最强,e和f次之。近年来又发现许多不可分型的菌株。本菌只有人类易患,主要通过呼吸道传播,一般冬季发病较多,成人基本上不发病,主要在婴幼儿中引起脑膜炎、肺炎、中耳炎、会厌炎及关节炎等,在麻疹,百日咳等病后常可由它引起继发性感染,在慢性气管炎病人痰中经常发现此类细菌。 一、流行病学概况 1.Michaels[1]1971年报导从1945—1970因流感嗜血杆菌(Hi)b型引起的脑膜炎病人增加了400%,而由脑膜炎双球菌引起的脑膜炎只在第二次世界大战后有二次小流行外,发病率一直较平稳,而由肺炎双球菌引起的脑膜炎发病率一直不高。Smith(2)1972年报导了从1942—1968年在哥伦比亚儿童医院住院病人中Hib引起的脑膜炎增加了399%。由于95%病人发生在5岁以下儿童中,因此,Smith称5岁以下儿童是这种疾病的“潜在的候选人”。panke[3]1972年报导在北卡萝利那洲观察的结果,在Mecklenheng county发生的由Hib引起的86例脑膜炎,最高发病年龄为3月到3岁的婴幼     

伤寒沙门氏菌口服活菌苗Ty21a Vi抗原阳性突变株的组建及特性

<正>伤寒至今仍然是发展中国家的主要卫生问题,尤其在学令儿童中的发病率很高,据估计,全世界每年伤寒病例超过3000万,死亡病例约50万。灭活全菌体菌苗大约已经使用75年,尽管几个现场结果表明该菌苗有效,但因其产生不良反应的频率较高使之作为一种公共卫生措施使用而受到限制。 Germanier和Frer叙述了称之为Ty21a的伤寒沙门氏突变株,它缺乏UDP-葡萄糖-4表异构酶,当口服免疫人群时,Ty21a株显示出良好的可耐受性,该菌苗现场效果表明对人群提供了良好的保护水平(67～95%),口服肠溶衣制剂3次剂量投服后至少可提供为期4年的保护作用。 近年已对纯化Vi抗原的效力进行了两个现场考核。Vi抗原是一种α-1、4-2-脱氧-2-N-乙基半乳糖胺糖醛酸的同聚物,这种酸性多糖荚膜在伤寒病人的临床分离物中即使不是全部世是大部分的分离物中表达出来。通常Vi是一种毒力因     

脑膜炎球菌菌苗研究进展

<正> 脑脊髓膜炎是全球性的流行病,发病急,病死率高。自1966年以来,在巴西、挪威、美国、越南、芬兰、英国、蒙古和中国等国都曾发生脑膜炎大流行,最高发病率在11-370/10万之间(1,2),病死率高达20％(3)。在非流行区脑膜炎球菌无症状带菌率为5-10％(4)。     

痢疾菌苗研究进展

痢疾是全世界范围内流行的肠道传染病。随着分子生物学技术的发展,迄今已构建了新一代预防痢疾的疫苗,其中包括:具有侵袭力和不具侵袭力的单价口服活菌苗候选株;它们与大肠杆菌、伤寒沙门氏菌和血清型不同的痢疾杆菌组成的双价和三价菌苗候选株;以及以脂多糖和核糖体为基础的不经胃肠的组分菌。猴体和人体试验证明它们安全有效。预计在未来的10年中,将会有一个或几个安全有效的痢疾疫苗投放市场。     

痢疾菌苗的研究现状与发展趋势

<正>从日本人志贺氏发现菌痢的病原到现在已经有近一百年的历史了。在整整一个世纪的时间里,全世界的有志之士从未间断过对痢疾菌苗的研究。这主要是因为它的感染剂量小,10个菌即可使没有免疫力的人患病,而伤寒则起码要10000个菌。它不但可以通过食物和水传播,而且可以经过人与人的接触传播,在发展中国家,由于卫生条件不好,至今菌痢仍是一个主要的公共卫生问题,年发病率很高,最高的可达20万/10万人口。我国的菌痢,据近两年疫情报告的统计也均居首位:1988年为190/10万,1989年为140/30万。相比之下发达国家则较低,为50/10万。迫切需要一种有效的预防制品对之进行免疫。可惜的是,前人的努力均以失败而告终。志贺氏发现菌痢的病原之后,即曾以之制成菌苗,给一万多人做了注射免疫,但因灭活不全,菌苗中尚有毒菌,结果有不少人得了该病;苏联从1924年即用痢疾死菌苗口服免疫,直到50年代初在     

制造化学菌苗的方法学

<正>化学菌苗是用病原微生物的保护性抗原制备的免疫制品。保护性抗原是诱导对抗病原菌某种致病作用的特异性抗体的抗原物质。保护性抗原通常具有聚合物性质,在机能上是病原菌的致病性因子,宿主在进化中产生对此类因子的特异性免疫应答力。应强调指出并非所有的致病性因子都能视为保护性抗原,虽然后者必定是一种致病性因子。用保护性抗原制造菌苗是在特异性预防传染病方面最合理和有前途的趋向之一。与颗粒化学菌苗不同,化学菌苗不含杂质,并且容易检定和控制。     

福氏2a宋内氏双价痢疾菌苗候选株的生物表型及稳定性鉴定

志贺氏痢疾是我国常见病、多发病。根据我国主要流行型别特点,构建f侵袭表型阳性的福氏人来内氏双价痢疾菌苗。2株议价菌苗候选株生物表型及其稳定性研究结果：（1）O抗原表达,候选株能良好表达福氏Za及来内氏双价0抗原,用针对保护性表位单抗2E6及SSD3所做的FAS表明,福氏Za抗原表达为亲株FS－15的86．8％一121．0％,来内氏为兀．4％～119．0％;经液体传代20代后,双价O抗原表达稳定率均在95％以上。（2）IPa表达,WesTen1Dlot结果表明,候选株能表达侵袭相关蛋白IPaA、IPaB、IPaC、IPaD,经液体连续传20代后,侵袭蛋白的…     

肺炎链球菌及其多糖菌苗

<正>一、一般情况 肺炎链球菌(Strep Pneuwmoniac)又名肺炎双球菌,为链球菌科的链球菌属中的一种。为1881年由巴斯德首先分离出,之后美国Stornberg也报导了。肺炎链球菌对成人主要引起大叶性肺炎,对婴幼儿引起中耳炎。它引起的肺炎是一种呼吸道常见的急性传染病,在化脓性脑脊髓膜炎的病原中,它也是首要的病原菌。在正常人的口腔及鼻咽腔内,此菌经常存在形成带菌状态。在机体抵抗力下降时引起疾病,尤其是老年人及免疫缺陷病人,脾切除及脾功能障碍的病人,对本菌的感受性更高。可能与患者体内补体替代途径中某种成分的缺陷有关。 肺炎链球菌为革兰氏阳性,有荚膜,矛头状的双球菌,常排成直的短链,在含血清的肉水中弥漫地散在生长。在血琼脂上的菌落呈光滑型,其周围有一狭窄溶血环?-hemolysis为相对厌氧菌。有些菌株从临床标本分离时需要二氧化碳,加热     

预防幼畜腹泻双价工程菌苗株的构建及表达

Bam HI部分酶切表达K99抗原的重组质粒pMGK99,将其与相同酶切的含有F41菌毛基因的片段相连接,构建了载有两种抗原基因的质粒pMG611。通过转化大肠杆菌K12HB101、RRI和c600,得到HBlOl(pMG611)、RRl(pMG611)和C600(pMG611)菌株。经甘露糖抗性血凝试验、玻片凝集试验和western blot分析证明K99和F4l两种菌毛抗原在每株菌中均获表达。sDs—PAGE结果表明所表达K99和F4l菌毛亚单位的分子量与其各自野生株所产生的相同,分别是17200和29800Da,ELIsA测定HB101(pMG611)菌株表达K99和K41菌毛抗原的水平与相应出发菌株相同,而高于其野生株。本实验对质粒pMG611表达K99和F41菌毛抗原的影响因素也进行了研究。     

菌苗进展

<正> 关于细菌感染,有种种的免疫机制和免疫反应。近年来,伴随现代生物化学和分子生物学的进展,对于细菌感染的研究更加深入,并且制造出新的和更有效的菌苗。 实际工作的医生面临着一种新菌苗的数量比任何时候都增长的形势,迫使他们对那些新菌苗做严格的选择,选出其中有限数量的符合流行病学需要的有效和安全的菌苗。 菌苗就它们的抗原性、免疫反应、接种反应和安全性来说,可分为性质不同的四大类:1.类毒素。2.菌体抗原(Whole—cellAntigens)。3.减毒活菌苗。4.化学组分菌苗(fractionated Vaccines)。     

以沙门氏菌为基础的菌苗

<正>伤寒杆菌是引起人类严重疾病伤寒的病原菌,为了构建有用的伤寒菌苗,人们在实验室和现场试验中已负出了很多心血。总的来说,非肠道使用死伤寒杆菌是一种有效的菌苗,但副作用比较常见,有时还比较严重。这个问题促使人们想构建和试验口服菌苗,由于死的伤寒杆菌作为口服菌苗时没有保护作用,所以,人们设计和制备了许多无毒的,带有突变的伤寒杆衍生株,并对其中的一些菌株在现场试验中作出了评价。     

纯化炭疽菌苗的研究进展

一、绪言二、纯化菌苗的制备及检定 1.菌种选择 2.培养基种类 3.接种培养 4.检定三、纯化菌苗的人群接种反应和效果四、结语 参考文献 一、绪言 早在1904年Bail最先发现炭疽病灶的炎症性水肿渗出液,用于注射实验动物后,对炭疽毒菌再感染有特异性保护作用。这种现象以后被许多人所证实(Okuda,1923;Matsumoto,1924;Hruska,1926;Urbain和Ross,1926,1927;     

新菌苗的研究使用动向

<正>二十世纪七十年代是生物制品工作取得重大进展的十年。在这十年里全世界范围内消灭了天花。由于免疫学和分子遗传学以及其它各种有关学科的发展,在研制新的生物     

结合菌苗的免疫学特征

<正>细菌多糖(PS)菌苗在小于18月龄的婴儿和患有免疫缺陷的成年人中不能产生抗体保护,而这类人群却最易遭受包胶菌的侵袭。另外,在健康人群中,多糖菌苗也难以诱导恒定的、增强的和高滴度的抗体反应,也不能启动IgG记忆应答。为了增强PS抗原的免疫原性,发展了多糖——蛋白结合菌苗。