组胺H4 受体在胃腺癌组织中的表达及临床意义

目的:研究胃癌腺癌(gastric adenocarcinoma,GAC)中组胺H4受体的表达水平及其临床意义。方法:60例GAC组织(病例组)与配对癌旁组织(adjacent normal tissue,ANT)中应用免疫组织化学技术检测组胺H4受体的表达,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测组胺H4受体mRNA的表达,统计分析组胺H4受体表达与临床病理特征之间的关系。结果:①胃腺癌组织中组胺H4受体蛋白的阳性表达率(11.7%)显著低于癌旁正常组织(96.7%)。②胃腺癌组织中组胺H4受体mRNA水平较癌旁组织明显降低(p<0.001)。③组胺H4受体蛋白和mRNA表达异常和肿瘤的病理分级有相关性(p=0.0027和p=0.0011),也与有无胃周淋巴结转移有关(p<0.001和p=0.0049)。结论:组胺H4受体在胃腺癌组织有表达异常,表达量与病理分期相关。组胺H4受体表达异常和组胺水平紊乱可能在胃癌发生发展过程中有重要作用。     

组胺H4受体在胃腺癌组织中的表达及临床意义

目的：研究胃癌腺癌（gastric adenocarcinoma,GAC）中组胺H4受体的表达水平及其临床意义。方法：60例GAC组织（病例组）与配对癌旁组织（adjacent normal tissue,ANT）中应用免疫组织化学技术检测组胺H4受体的表达,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测组胺H4受体mRNA的表达,统计分析组胺H4受体表达与临床病理特征之间的关系。结果：①胃腺癌组织中组胺H4受体蛋白的阳性表达率（11.7%）显著低于癌旁正常组织（96.7%）。②胃腺癌组织中组胺H4受体mRNA水平较癌旁组织明显降低（p〈0.001）。③组胺H4受体蛋白和mRNA表达异常和肿瘤的病理分级有相关性（p=0.0027和p=0.0011）,也与有无胃周淋巴结转移有关（p〈0.001和p=0.0049）。结论：组胺H4受体在胃腺癌组织有表达异常,表达量与病理分期相关。组胺H4受体表达异常和组胺水平紊乱可能在胃癌发生发展过程中有重要作用。     

siRNA介导的MKK4表达抑制研究

采用脂质体转染方法,将3对(siRNA ID#64447、siRNA ID#64539和siRNA ID#186583)人工合成的MKK4基因特异的小分子干扰RNA(siRNA)分别导入小鼠成肌细胞C2C12中.实时荧光定量PCR结果表明,转染了siRNA ID#64447的细胞,其MKK4 mRNA的表达水平下调得最多,约为85%.试验获得了能够高效下调MKK4基因表达的siRNA.     

巴马香猪和杜长大猪的PDK4基因的克隆及组织表达分析

为了获得广西巴马香猪和杜长大猪丙酮酸脱氢酶激酶4 (PDK4)基因编码区序列(CDS),并研究PDK4基因在广西巴马香猪和杜长大猪不同组织中的mRNA表达差异,本研究利用基因克隆技术分别从巴马香猪和杜长大猪的背最长肌组织中提取总RNA,PCR扩增出PDK4基因CDS,并进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测PDK4基因在这两品种猪不同组织中m RNA的相对表达量。结果表明:本研究分别成功克隆获得巴马香猪和杜长大猪PDK4基因CDS,长度为1 224 bp,这两品种猪的PDK4基因CDS同源性为100%,与GenBank报道的普通猪、人、鼠、马、羊的同源性分别为100%、91.0%、85.5%、92.3%、93.0%。基于PDK4基因碱基同源性构建的物种系统进化树可知,巴马猪和杜长大猪遗传距离是最近的,最远的是小鼠。两品种猪PDK4氨基酸组成中亮氨酸含量较高,占总氨基酸数的10.8%,同时发现PDK4蛋白具有较强的亲水性。巴马香猪和杜长大猪PDK4蛋白的高级结构中均包含有α螺旋、无规卷曲和延伸链。实时荧光定量PCR结果显示,巴马香猪和杜长大猪的不同组织PDK4基因表达量最高的为腹脂,最低的是脾。巴马香猪背最长肌中PDK4基因表达水平极显著高于杜长大猪,而杜长大猪的皮脂、腹脂、肝、脾以及肾中PDK4基因表达水平极显著高于巴马香猪。本试验成功克隆了巴马香猪和杜长猪的PDK4基因,并且检测了该基因在两品种猪不同组织中的基因表达水平的差异,为今后深入探讨PDK4基因在地方猪种脂质代谢和脂肪沉积方面发挥的作用奠定工作基础。     

猪RegIIIγ在小肠表达的特征及细胞类型

RegⅢγ是一种新型的抗菌肽,主要在哺乳动物的肠道和皮肤表达,具有抗菌、抗炎、调节免疫反应和促进细胞增殖等生理功能。为了解猪RegⅢγ在肠道的表达特点,我们通过荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和免疫组化分别确定了猪RegⅢγmRNA和蛋白在仔猪肠道的表达水平以及在肠道表达的细胞类型。结果表明RegⅢγmRNA和蛋白质在十二指肠、空肠和回肠三个部位的表达水平无明显差异;除mRNA水平在断奶后有一个明显下降外,mRNA和蛋白质表达水平呈现随着周龄的增加而升高的趋势。免疫组化分析表明RegⅢγ蛋白主要在肠粘膜吸收性上皮细胞和Paneth细胞内表达。     

核干细胞因子在食管癌组织中的表达及意义

目的:探讨核干细胞因子在食管癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学法检测50例食管癌组织及癌旁组织中核干细胞因子蛋白表达,并分析核干细胞因子与临床病理特征的相关性,随机收集30例食管癌患者的癌组织及癌旁组织,采用荧光定量PCR方法方法检测核干细胞因子mRNA表达情况;结果:免疫组化分析表明,核干细胞因子蛋白在食管癌中阳性表达率为92.0％(46/50).癌旁组织中核干细胞因子表达阳性率为16.0％(8/50),差异有显著性(P＜0.05);核干细胞因子阳性表达率与患者的年龄、性别、肿瘤大小及淋巴结转移无关,与肿瘤的分化程度有关(P＜0.05);荧光定量PCR结果显示,食管癌组织中核干细胞因子mRNA表达水平明显高于癌旁正常对照组织.结论:核干细胞因子在食管癌的发生、发展中起着重要作用,可以作为反映食管癌生物学行为的有效指标.     

Lef-1基因在棕色和白色羊驼皮肤差异表达

本实验旨在研究Lef-1在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色间的关系.采用实时荧光定量PCR、Western blotting以及免疫组织化学方法,研究白色和棕色羊驼皮肤中的mRNA、蛋白表达水平和定位.实时荧光定量PCR结果显示,Lef-1在棕色羊驼皮肤组织相对基因表达量是3.3727±0.1989,在白色羊驼皮肤组织是1.0003±0.0227; Western blotting结果显示,在羊驼皮肤组织总蛋白中存在分子量约44 KD与兔抗Lef-1多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,棕色羊驼平均蛋白表达量显著高于白色羊驼;免疫组织化学结果显示,在棕色羊驼皮肤组织中多表达在毛球部、表皮也有分布,在白色羊驼皮肤组织中多表达在表皮,在棕色和白色羊驼皮肤组织中外根鞘都有较强表达.结果显示Lef-1在棕色和白色羊驼皮肤的定位和含量存在差异,提示Lef-1可能影响了羊驼被毛颜色的形成.     

L-selectin配体在输卵管妊娠中母胎界面的表达

目的:探讨L-selectin配体(HECA-452和MECA-79)与输卵管妊娠的关系.方法:运用免疫组化和实时荧光定量PCR的方法,检测16例输卵管妊娠患者的胚囊种植部位标本(A组)、16例胚囊种植旁部位标本(B组)和4例正常假孕输卵管标本中的HECA-452和MECA-79的表达情况.结果:免疫组化结果显示HECA-452在A组中染色强阳性、中度阳性和弱阳性分别为56.25%、31.25和12.5%,而在B组中仅为31.25%的弱阳性,而阴性占68.75%,A组中的HECA-452的染色阳性率和阳性程度明显高于B组.MECA-79染色在A组中弱阳性(25%),B组中均为阴性(100%).HECA-452和MECA-79在C组中均阴性.HECA-452 mRNA在A组中的表达明显高于B组,两者有统计学差异(P＜0.001).结论:L-selectin配体HECA-452和MECA-79在输卵管妊娠的母胎界面上有表达,L-selectin系统可能参与榆卵管妊娠的发生.     

五指山猪不同组织中肌细胞生成素基因Myf4及生肌调节因子Myf6的表达

本文通过运用Real-time PCR技术,检测肌细胞生成素基因Myf4和生肌调节因子Myf6在出生后的第30天、第210天、第360天(出生到体成熟)的五指山猪肌肉组织中的表达变化,以及Myf4、Myf6在体成熟五指山猪肌肉、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠组织中mRNA相对表达情况。结果表明:Myf4及Myf6基因在五指山猪出生后在肌肉组织中的mRNA表达水平随着五指山猪的生长年龄生长而显著增长(p<0.05);Myf4及Myf6基因在成年五指山猪以上8种组织中均有表达,其中在肌肉组织中相对表达量最高。本研究结果将为五指山猪肌肉生长发育及矮小性状形成机理提供参考。     

猪Opn4基因cDNA克隆与表达分析

为揭示猪Opn4基因的结构并研究其在猪视网膜中昼夜表达差异与生长各阶段表达规律, 文章克隆了猪Opn4基因全长CDS区序列, 定量检测了Opn4基因在猪视网膜中昼夜的表达量以及其在不同生长阶段的表达量。结果表明, Opn4基因编码区序列为1 437 bp, 编码478个氨基酸, 分子式为C2398H3705N623O651S23; Opn4基因在白昼的表达量极显著高于夜晚(P<0.01); Opn4基因在出生前34 d胎儿视网膜中表达量最低(P<0.01); 1日龄时表达量最高(P<0.01); 1月龄、4月龄、84月龄猪视网膜中Opn4表达量差异不显著(P>0.05)。以上结果提示, Opn4基因可参与调控猪的生物节律, 并且Opn4主要参与出生后猪对外界光照的应答。     

KCTD10基因的表达、抗体制备及其在常见细胞系中的表达

人类KCTD10(channe l tetram erisation dom a in-conta in ing 10)基因属于PD IP1(polym erase de lta-interactingprote in 1)基因家族。最近的研究表明,小鼠KCTD10能同时和PCNA以及DNA聚合酶δ相互作用,并受肿瘤坏死因子α诱导;可能在诸如DNA修复、DNA复制、细胞周期调控以及人类的多种疾病中发挥重要作用,但对其确切功能和作用机制研究不多。克隆人的KCTD10基因到pQE-N3原核表达载体,在原核细胞株BL21(DE3)中表达并获得融合表达产物。获得的融合蛋白产物通过免疫新西兰大白兔获得兔抗KCTD10多克隆抗体。采用western印迹技术,用该抗体检测KCTD10基因的原核和真核表达产物,证明该抗体有较好的针对KCTD10蛋白的专一性,可用于对KCTD10的结构与功能研究。同时利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系的表达情况,发现在N IH3T3细胞系中表达较高,而在HeLa、HepG2、SW 480、PanC1、MCF7等癌细胞系中表达较低,由此推测KCTD10可能在癌症的发生中起到一定的作用。     

FGF5在青年羊驼背部和耳部皮肤中的表达和定位

羊驼是毛用型经济动物,其耳部和背部的毛发品质和生长周期存在差异. 据研究成纤维细胞生长因子5（fibroblast growth factor 5, FGF5）在多种哺乳动物中影响毛发长度. FGF5基因的突变导致小鼠、狗和猫隐性的长发表型,其也参与了家兔绒毛长度的变异. 本实验旨在研究FGF5在青年羊驼皮肤中的表达和定位,以及在羊驼背部和耳部皮肤中的差异比较,探讨其在羊驼毛发生长发育过程中的作用及其相关机制. 实验采用实时荧光定量PCR、Western印迹和免疫组织化学等技术,对FGF5在青年羊驼背部和耳部皮肤中的mRNA、蛋白表达水平和定位进行了研究. 实时荧光定量PCR结果显示,FGF5在青年羊驼耳部皮肤组织中相对基因表达量是羊驼背部皮肤组织的25265倍(P<001); Western印迹结果显示,羊驼皮肤组织粗蛋白提取物中存在与兔抗FGF5多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,羊驼耳部皮肤平均蛋白表达量显著高于背部;免疫组织化学结果显示,FGF5在羊驼皮肤的毛根鞘,毛母质细胞和毛髓质等部位均表达,根据光密度值得出,该蛋白在羊驼背部和耳部皮肤中的表达差异极显著（P<001）. 试验结果提示FGF5可能抑制了羊驼毛发的生长.     

Expression and localization of angiogenin in placenta: enhanced levels at term over first trimester villi

Human angiogenin, a 14-kDa non-glycosylated polypeptide with both angiogenic and ribonucleolytic activities, is implicated in angiogenesis, a complex process of proliferation and formation of new capillary blood vessels from existing blood vessels. Placental growth requires extensive angiogenesis, which develops its vascular structure in both fetal chorionic villi and maternal deciduas. In this study, we investigated the expression profiles of angiogenin in placental villi from early and late gestation at both mRNA and protein levels using explant cultures in vitro followed by RT-PCR, immunoblot, and immunohistochemical analyses. From functionally active placental explants, angiogenin was detected in conditioned media of all the samples from first trimester and term group. The mean levels of angiogenin produced by term villi were found to be 2.6-, 2.1-, and 2.2-fold higher (P < 0.01) than first trimester villi at 24, 48, and 72 hr of culture, respectively. Expression profiles of angiogenin from term and first trimester villi seem to agree with its mRNA levels and immunoblot analysis; the expression in term villi was twice that in first trimester villi. The presence of angiogenin in placental villi and upregulation of its production towards term indicate that angiogenin production by the placenta is specific to the developmental stage. In conclusion, the observed changes in the localization and mRNA expression of angiogenin during placental development raise the possibility that it is involved in morphological and angiogenic changes in this endocrine organ vital to the successful fetal outcome during pregnancy.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后纹状体和海马区瞬时受体电位通道蛋白4的表达增加

实验在大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(middle cerebral arterv occlusion,MCAO)模型上采用Western Blot方法检测脑缺血再灌注不同时程(6h、12h、1d、3d)脑组织中瞬时受体电位通道蛋白4(transient receptor potential channel4,TRPC4)的表达情况,并与正常对照组相比,结果显示,12 h、1 d、3 d组纹状体、海马区域TRPC4含量明显高于正常组(P<0.05)。采用免疫组织化学定位检测,显示TRPC4主要表达在神经元细胞膜上;免疫组化阳性细胞统计分析显示,在不同时程缺血组中纹状体、海马区域TRPC4的表达与正常组相比有所增加,其中纹状体、海马区缺血再灌注1 d、3 d组缺血同侧1RPC4阳性细胞升高显著(P<0.05)。脑缺血再灌注损伤后TRPC4相对含量增加,提示TRPC4可能参与脑缺血引起的急性和迟发性神经元损伤。     

p16INK4a在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响

本研究旨在检测肿瘤抑制基因p16INK4a(inhibitor of cyclin-dependent kinase 4a)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨p16INK4a在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕小鼠及孕小鼠第2、3、4、5、7天子宫内膜p16INK4a mRNA和蛋白的表达;子宫角注射p16INK4a抗体观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示孕小鼠子宫内膜组织p16INK4amRNA的表达高于未孕小鼠,且随着妊娠天数的增加呈现表达逐渐增强的趋势,到妊娠第5天达到最高,后渐降.免疫组织化学分析显示p16INK4a蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射p16INK4a抗体后胚泡着床数明显减少.以上结果提示,P161INK4a在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与胚泡着床.     

小鼠MKP4基因组织、细胞表达谱研究

为了探讨MKP4基因mRNA在正常雄性C57小鼠的组织表达分布及其在3T3-L1脂肪细胞诱导进程中的表达谱。采用经典诱导分化方案诱导3T3-L1前脂肪细胞,分别收集前脂肪细胞、诱导分化day0、day2、day5、day8和day9的细胞,同时取正常C57雄性小鼠(鼠龄12周,数量n=3)多处组织如心、胰、肝、脂肪、脑、肾及睾丸等,并提取组织、细胞总RNA,RT-QPCR(荧光染料法)检测MKP4基因mRNA表达水平。结果显示MKP4基因在C57小鼠体内存在较广的表达谱,在肝脏、脂肪的表达量最高,其次为脑组织,其它组织存在低度表达;在3T3-L1前脂肪细胞、诱导分化day0、day2中表达极低,在day5中表达骤然升高,随后表达相对增高,于day9表达水平趋于平稳。MKP4基因组织表达谱结果表明其在维持正常生理功能可能发挥一定的作用,在胰岛素敏感相关组织肝脏、脂肪中表达量较高,提示可能参与胰岛素抵抗(IR)的发生与发展过程。此外,MKP4在3T3-L1前脂肪细胞诱导进程中表达上调,表明MKP4可能参与了脂质积累、肥胖等代谢疾病的发生与发展。     

羽衣甘蓝BoMAPK4原核表达、抗体制备及蛋白表达分析

以羽衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala）自交不亲和系（S_13-bS_13-b ）为材料,提取柱头RNA,利用RT-PCR分离羽衣甘蓝柱头丝裂原活化蛋白激酶4（MAPK4）基因。结果表明：获得的BoMAPK4 cDNA含有一个 1 122 bp开放阅读框,编码373个氨基酸,具有丝氨酸/苏氨酸结构域,无信号肽和跨膜结构。羽衣甘蓝BoMAPK4与油菜（B. napus）BnMAPK4、芜菁（B. rapa）BrMAPK4、拟南芥（Arabidopsis thaliana）AtMAPK4的氨基酸序列一致性分别为99.7%、99.5%、95.4%。将BoMAPK4编码区的序列构建到原核表达载体pET-14b上,并转化到BL21（DE3）大肠杆菌（Escherichia coli）中进行原核表达。SDS-PAGE结果显示,在分子量大小约45 kDa处有BoMAPK4重组蛋白特异性表达。利用亲和层析的方法获得高纯度的重组BoMAPK4蛋白。利用获得的重组BoMAPK4蛋白免疫小鼠,制备BoMAPK4的多克隆抗体。提取羽衣甘蓝萼片、花瓣、花药、柱头、花柱和子房的总蛋白,利用免疫印迹的方法进行蛋白表达检测,结果发现BoMAPK4在花瓣、花药和子房中表达的较少,在萼片和花柱中表达的较多,在柱头中的表达量最高。这些研究为探讨BoMAPK4的生物学功能奠定了基础。     

紧密连接蛋白claudin-4 在肾透明细胞癌中的表达及预后意义

目的:探讨claudin-4在肾透明细胞癌中的表达及与临床病理特征及预后的相关性。方法:应用免疫组织化学技术检测50例肾透明细胞癌组织及10例正常肾组织标本中claudin-4的表达情况,并分析与临床病理参数的相关性;随机选取其中4例肾透明细胞癌患者癌组织及4例正常肾新鲜组织,Western blot检测claudin-4的表达情况,并与免疫组化检测结果进行相关性分析;结合随访结果分析claudin-4的表达水平与患者无疾病生存期的关系。结果:Claudin-4在肾透明细胞癌组织中的表达显著高于肾正常组织(P<0.05),表达水平与肿瘤的直径、TNM分期、临床分期及淋巴结转移相关;Western blot结果也表明claudin-4在肾透明细胞癌组织中的表达显著高于肾正常组织(P<0.01),与免疫组化结果呈显著正相关(r2=0.748,P<0.01);Kaplan-Meier分析显示claudin-4高表达组患者的患者无疾病生存期为20.7个月,显著低于低表达组的30.8个月。COX多因素比例风险模型分析显示,claudin-4的表达不是肾透明细胞癌的独立预后因素(RR值=1.686,95%CI 0.174~16.311,P=0.652)。结论:claudin-4蛋白表达上调可能促进肾透明细胞癌的发生和发展,有可能作为肾透明细胞癌潜在的治疗靶点及影响不良预后的指标。     

KLF4在内毒素血症小鼠中的表达模式及其意义

目的探讨Kruppel样因子4（Kruppel-like factor 4,KLF4）在内毒素血症小鼠中的表达模式及意义。方法运用实时荧光PCR技术和Western blot技术,分别从mRNA水平和蛋白水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4的表达;运用生物信息学技术,对启动子区含有KLF4的结合位点的炎症介质基因进行了预测;运用RT-PCR技术,从mRNA水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL1β的表达模式。结果内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4 mRNA的表达下凋,KLF4蛋白的表达先下凋后升高;IL-18、IL-15、IL-12、IL-18、IL-10等炎症介质基因的启动子区均含有KLF4的结合元件,这些炎症基因的表达可能直接受到KLF4的调控;内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL-IB的表达模式与KLF4的表达模式呈相反趋势。结论内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4表达下调,KLF4在炎症介质基因表达调控中可能具有重要作用。     

萘胁迫下秋茄MnSOD基因和C4H基因的实时定量表达分析

研究首次探讨了萘胁迫下红树植物秋茄不同组织C₄H基因和MnSOD基因的表达特征.研究结果表明,两个基因在叶茎根中的表达量有明显的差异,C₄H基因在叶茎中的表达量明显大于根,MnSOD基因的表达量为叶最大,茎次之,根最小.在5个不同浓度的萘胁迫下,C₄H基因和MnSOD基因的表达普遍被诱导,转录水平都随着处理浓度的升高而增强,而且在叶组织中的表达量和萘处理浓度表现出明显的相关关系,相关系数分别达到0.846和0.902(p<0.05),而在根和茎中并不具有显著的相关关系.在萘胁迫下秋茄叶子是最敏感的部位,而C₄H基因和MnSOD基因在叶子中的表达量则为指示萘胁迫强度的良好生物学指标.