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测定RNA序列的化学裂解直读法 总被引:1,自引:0,他引:1
1979年Peattie在Maxam和Gilbert的DNA化学裂解序列测定直读法的基础上,建立了RNA的化学裂解直读法。该法利用几种不同化学试剂,在~(32)P末端标记的RNA链上进行碱基特异性的、限制性的修饰。经苯胺作用后,RNA分子在修饰部位断裂。凝胶电泳分离和放射自显影后,可以从G.A>G、C>U和U四组区带上直接读出RNA的序列。该法快速、微量、不需特殊酶试剂。不受被测RNA二级结构影响,因而比较准确,现已逐 相似文献
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一种新型反义RNA技术:RNA错折叠 总被引:2,自引:0,他引:2
反义RNA技术的发现对现代医疗技术的发展有着重要的作用,常规的反义RNA技术是设计出与靶RNA互补的寡核苷酸,通过它与靶RNA结合来干扰转录或翻译过程,使蛋白质不能被表达出来。目前,一项新的技术——寡核苷酸导向的RNA错折叠将反义RNA技术进一步简化,从另一个角度丰富了反义RNA技术。 相似文献
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在生理和药理的动物实验中,常常以呼吸频率的改变为指标来观察刺激或药物对呼吸的影响.呼吸频率的变化可以做为呼吸功能改变的一项重要参数.可见,快速、准确地记录呼吸 相似文献
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一种优化的植物组织RNA原位杂交技术 总被引:7,自引:1,他引:7
一种优化的植物组织RNA原位杂交技术①陈绍荣毕学知吕应堂杨弘远(武汉大学生命科学学院,武汉430072)AOptimizedinSituRNAHybridizationTechniqueinPlantTisuesCHENShaorongBIXuezh... 相似文献
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一种有效的花粉线粒体RNA分离技术 总被引:3,自引:0,他引:3
线粒体有自己的基因组和独特的表达系统,对其研究可以了解RNA编码及核与线粒体之间协同调控等机制,进而阐明呼吸作用、植物细胞质雄性不育等生命现象[1,2]。因此线粒体基因组结构及其表达是目前生命科学研究中一个很活跃的研究领域。由于花粉是世代交替的关键阶段,雄性不育仅表现花粉不育而其他营养器官正常,因此研究花粉线粒体基因表达显得尤为重要。花粉线粒体基因表达研究中重要的步骤之一是分离线粒体RNA(mtRNA)。目前仅见营养器官mtR-NA[3],而未见花粉(特别是不同发育时期的花粉)mtRNA提取技术… 相似文献
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端粒是染色体末端的特化结构,由简单呈串联线性排列的核酸重复序列及相关蛋白质组成。其核酸序列具有高度的保守性,均富含GC。在人类为TTAGGG的高度重复序列具有维持基因组完整性的作用。端粒功能异常会导致染色体失去稳定性,促进肿瘤的发生和发展。以往认为端粒附近区域不具有转录活性,但最近在Science杂志上Azzalin等首次报道了该区域可以转录一种非编码RNA,即端粒RNA(telomeric RNA)。该分子具有特殊的UUAGGG重复序列,在调控端粒长度和端粒酶活性上具有重要作用,在发育、衰老和肿瘤发生发展等研究中已成为热点。该文将对近期有关端粒RNA的研究进展予以综述。 相似文献
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赵惠智 《中国生物工程杂志》1986,6(2):18-27
近十余年,由于重组DNA技术的问世和应用,迅速兴起和发展的生物工程已涉足十遗传工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、工业、农业、医学、食品、化工及能源等各个方面,取得了长足的进展,并已开始向第二代生物工程迈进,去开发应用人们曾经期望而又尚未实现的愿望。 相似文献
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世纪之交的蛋白质序列测定技术 总被引:8,自引:0,他引:8
对蛋白质序列测定技术的发展过程作了简要回顾,介绍了近年在该方法学领域的主要进展,其中包括N-端顺序测定的微量化、毛细管HPLC与毛细管电泳的应用,新的C-端化学降解测序方法,以及快原子轰击(FAB)、电喷雾(ESI)和基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)质谱在蛋白质序列测定中的应用,还对世纪之交该领域的发展趋势作了扼要的展望。 相似文献
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RNA结合蛋白通过特异识别RNA底物发挥重要的生物学作用。指数富集的配体系统进化(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术是一种体外筛选核酸底物的基本方法,SELEX技术通过重复多轮筛选从随机核酸序列库中筛选出特异性与靶物质高度亲和的核酸底物,本研究将利用该技术与二代高通量测序(NGS)相结合,体外合成含有20个随机碱基的RNA文库,将所要研究的蛋白构建到带有可被链亲和酶素磁珠捕获的SBP标记的载体上去,显著提高筛选效率,仅需1轮筛选即可获得所需RNA底物motif。通过该方法获得了人的hn RNP A1的UP1结构域特异识别AGG和AG二种RNA序列,并通过EMSA实验证实其可以与获得的RNA motif结合。这一方法的建立对于研究RNA结合蛋白识别底物的序列特异性,并进一步了解其在生物体内的调控机制有重要意义。 相似文献
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一种从RNA Blot杂交膜上脱除探针的改进方法 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨脱除RNA Blot膜上的杂交探针的方法,解决杂交中RNA Blot膜重复使用的问题。方法:经NBT/BCIP化学显色的RNA Blot杂交膜先用二甲基甲酰胺在60℃处理90min,然后用脱探针溶液(50%去离子甲酰胺、50mmol/L Tris—HCl pH7.5、5%SDS)在80℃处理90min,经过处理的膜再次用于下一轮的杂交。结果:用这一改进的方法,可以完全脱除杂交膜上的地高辛标记的cDNA探针,RNA Blot膜可以重复杂交5轮以上,杂交带仍然保持清晰锐利。结论:该改进方法操作简便,能有效地脱除杂交膜上的地高辛标记的cDNA探针。 相似文献
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基因芯片是大规模表达谱分析的有力工具 ,有助于阐明疾病发生的分子机制及发现新的诊治靶标。但常规方法需要大量RNA ,每张芯片需要 5 0~ 2 0 0 μg总RNA ,2~ 5 μgmRNA。许多珍贵难得样本都不能满足这一要求 ,成为限制芯片广泛应用的瓶颈。结合模板转移效应 ,优化了基于T7的RNA线性扩增技术 ,可从 3μg以下总RNA得到足量的反义RNA ,克服了这一难题。同一RNA样本的自身比较试验结果显示反义RNA标记的芯片与总RNA、mRNA标记的芯片假阳性率相似。同一对RNA样本的表达谱分析也显示反义RNA标记的芯片与总RNA、mRNA标记的芯片无明显差异。 相似文献
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女贞(Ligustrum Cornpactum)叶片的核酸提取物,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),出现两条低分子量的核酸带,DNase 1及RNase A处理证实两条核酸带均为RNA,初步测得迁移率较小的RNA的分子量约为0.7×10~5道尔顿,5'末端标记,双相及双方向PAGE分析证实,该RNA是存在于女贞叶片细胞内的一种小分子闭环RNA(简称psc RNA),不同离子强度下的RNase A处理揭示,psc RNA分子内有大量碱基互补结构,从点杂交结果推断psc RNA的一级结构中,不含绝大多数闭环类病毒RNA所共同具有的中心保守区段,在本实验的条件下pscRNA不能感染爪哇三七,女贞叶片汁液和按照提取,纯化病毒粒子的程序制备的溶液。在电镜下均没有观察到病毒颗粒,结果表明,女贞叶片细胞中存在一种无蛋白质外壳包被的、具有次量分子内碱基互辅结构的共价闭合环状RNA分子,在其它两种植物中,亦初步检测到此类闭环RNA分子,讨论了此种闭环RNA分子的意义。 相似文献
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本文简要地讨论了传统模糊增强算法的原理,并详细讨论了这种算法所存在的缺陷。针对传统模糊增强算法的缺陷,本文提出了一种改进的模糊增强算法。实验证明,改进的的算法在图象的处理质量上得到了提高。 相似文献
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用一种改进的电泳方法测定抗冻蛋白的分子量 总被引:14,自引:2,他引:14
针对抗冻蛋白分子量较小的特点,该文采用了一种改进的Tricine-SDS-PAGE法测定其分子量。采用三层胶系统并在电极缓冲液中以Tricine代替Glycine。 相似文献