康氏木霉(Trichoderma koningii)纤维素酶系中β-葡萄糖苷酶的提纯与性质

从康氏木霉培养抽提液扣分离提纯了β-葡萄糖苷酶。提纯步骤通过DEAE SephadexA-50、SE Sephadex C-50和Sephadex G-75柱层析三步纯化。提纯后比潘提高766倍,回收率为25.8%。经硷性和酸性Disc 电泳以及SDS 凝胶电泳鉴定均为单一带。用SDS 凝胶电泳测得该酶的分子量为77000。用加温、改变pH 或化学变性剂(SDS)处理均能使酶失活并且改变该酶的凝胶电泳行为,揭示该酶有亚基存在的可能性。用底物(纤维二糖)或竞争性抑制剂(葡萄糖酸δ-内酯)能保护该酶使其酶活和电泳行为基本上不改变或变化较小。δ-内酯的K(?)比K_m 要小二到三个数量级,它很可能是该酶底物过渡态中间物的类似物。     

绿色木霉纤维素酶系中C1酶的提纯与性质

从绿色木霉(Trichoderma viride) X2-85的麸曲抽提液中,分离出纤维素酶系中的C1酶,经纯化后,用聚丙烯酰胺凝腔电泳和超速离心鉴定,都为均一蛋白。在我们的实验条件下,它对羧甲基纤维素、3-葡萄糖苷及纤维二糖,都不表现活性。该酶能降解徽晶纤维紊、磷酸膨胀纤维素和脱脂棉,主要产物是纤维二糖。用Sephadex G一100凝胶过滤和SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量,分别为54,000和55,000。其沉降系数为4.18。     

pNPG法测定纤维素酶系中β-葡萄糖苷酶

本文报道快速测定β-葡萄糖昔酶活力的方法。此法以pNPG为底物,利用β－葡萄糖苷酶将其分解成pNP及葡萄糖,而pNP在碱性条件下显色的原理测定酶活。通过对各测定条件的研究,确定了测定方法。     

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)UV III纤维素酶合成的诱导与阻遏

拟康氏木霉 (T .pseudokoningii)TH经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株UVIII,纤维素酶产量显著提高。研究表明 ,UVIII对诱导物的敏感性增加了 10 0倍 ,并且对葡萄糖的吸收能力明显下降 ,导致部分解除了葡萄糖阻遏作用 ,这可能都是该突变株产酶提高的原因     

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)UV Ⅲ纤维素酶合成的诱导与阻遏

拟康氏木霉（T．pseudokoningii)TH经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖遏突变株UVⅢ,纤维素酶产量显著提高。研究表明,UVⅢ对诱导物的敏感性增加了100倍,并且对葡萄糖的吸收能力明显下降,导致部分解除了葡萄糖阻遏作用,这可能都是该突变株产酶提高的原因。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的提纯与性质

从黑曲霉Aspergillus niger,发酵液中分离提纯了β-葡萄糖苷酶。提纯步骤通过(NH₄)₂SO₄分级沉淀,DEAE-Sephadex A-50和Sephadex G-100等三步纯化,得到凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。该酶的最适pH4.5,最适温度60℃,Km为0.44(pNPG),并有较好的热稳定性。用SDS-凝胶电泳法和凝胶色谱法测得该酶的分子量为120 000。     

拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)UV III产纤维素酶液体发酵研究

以拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)TH为出发菌株,经紫外诱变荻得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株uV III,其液体发酵最适产酶培养基为(w/V)豆皮粉3%,硝酸铵0.6%,磷酸二氢钠0.65%,硫酸镁0.25%,氯化钙0.15%,pH5.0;最佳发酵条件为30℃,125r/min发酵7d CMCase活力可达103.55 IU/mL,滤纸酶活可达5.51 IU/mL,β一葡萄糖苷酶活可达0 96IU/mL,分别比出发菌株TH提高了1.40、2.34、0.60倍.     

康氏木霉纤维素酶系中C_x酶多分子型的分离纯化及某些性质

从康氐木霉(Trichoderma k(?)ningii)白色变异株As 3.4001的粗酶制剂中,获得了纤维素酶系中的一组C_x酶(C_(x1) C_(x2) C_(x3) C_(x4))。分离步骤包括Sephadex G-75凝胶过滤,DEAESephadex A-50离子交换层析,ConA-Sepharose亲合层析,SE-Sephadex C-50离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳。C_(x1)与C_(x2)的分子量不同而所带电荷相同,它们的分子量各自为44,500和34,000。C_(x2)—C_(x4)的分子量相同而所带电荷不同。纯化的C_(x1)—C_(x4)经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单带。比较它们对羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的糖化力及液化力表明在作用方式的随机性上C_(x2)>C_(x3)>C_(x1)>C_(x4)。     

康氏木霉(Trichoderma koningii)纤维素酶系中的Cx酶的定位

本文研究了康氏木霉Cx酶的定位。用超声和差速离心法得出Cx酶活力大量存在于培养液的上清液,一部分附着于细胞表面,少量存在于菌丝细胞内。用电镜细胞化学法得出Cx酶位于菌丝细胞壁的表面,较易脱落;有时发现位于质膜内侧与细胞壁之间。     

康氏木霉纤维素酶系中Cx酶多分子型的分离纯化及某些性质

从康氐木霉(Trichoderma kkoningii) 白色变异株 AS 3．4001的粗酶制剂中,获得了纤维素酶系中的一组C_x酶(C_xt C_xz C_z3 C_z4)。分离步骤包括Sephadcx G-75凝胶过滤,DEAE-Sephadex A-50离子交换层析,ConA-Sepharnse亲合层析,SE—Sephadcx C-50离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳。C_xt 与C_xt 的分子量不同而所带电荷相同,它们的分子量各自为44,500和34,000。C_xz—C_x4 的分子量相同而所带电荷不同。纯化的C_xt—C_z4“经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单带。比较它们对羧甲基纤维素钠(CMC—Na)的糖化力及液化力表明在作用方式的随机性上C_xz>C_z3>C_z1>C_x4。     

康氏木霉AS3.4001 纤维素酶系的研究

康氏木霉白色变异株AS 3.4001的纤维素酶系经系列分离纯化,获得6个聚丙烯酰安凝胶电泳均一的组分(组分I-V及β一葡萄糖苷酶)。组分1能单独作用于天然纤维素棉花,水解不溶性纤维素,如滤纸、纤维素粉及磷酸膨张纤维素较可溶性纤维素羧甲基纤维素钠 CMC-Na)更为容易,水解产物为纤维二糖及痕迹量葡萄糖。     

康氏木霉C1酶的简捷提纯法及酶性质的研究

康氏木霉(Trichoderma Koningii)白色变异菌株AS 3．4001的粗酶制剂,经Sephadcx G-75凝胶过滤柱脱盐并除去大量杂蛋白,然后通过DEAE—scphadcx A一50离子交换层析,用0—0.5M Nacl梯度冼脱即得c。酶纯品。全程序仅需二天时间。 经聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS电泳鉴定均为单一带。此酶的分子量用SDS电泳及凝胶过滤法测定分别为58,000和5 2,000,用等电聚焦测其等电点为pH4 0。作用最适pH也为q o。此酶有较好的稳定性,在酸性pH(2 2)、碱性pH(8 0)及中性(水)中均能保持较长时间而不丧失活力。     

康氏木霉β-葡萄糖苷酶的结晶与电镜观察

将已分离提纯的康氏木霉β-葡萄糖苷酶用逐步降低浓度的硫酸铵溶液在一2℃抽提,然后在4—7℃放置11天后在饱和度为50％、45％和40％的抽出液中均出现结晶。利用戊二醛固定和草酸双氧铀负染技术在电子显微镜下观察了β-葡萄糖苷酶结晶,在放大11万倍左右时可看到晶体内酶分子的有序排列。对一葡萄糖苷酶结晶进行选区电子衍射,出现六角形的点阵图。点阵图的排列位置与结晶酶的电子显微镜照片一致。说明该酶的确形成结晶。平面晶格大小为56x 96五o     

绿色木霉耐热β-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质研究

旨在对绿色木霉-葡萄糖苷酶进行分离纯化并研究其酶学性质。对绿色木霉GIM3.139进行摇瓶发酵,经离心超滤和Sephadex G-200凝胶层析,得到纯化后的β-葡萄糖苷酶,并研究其酶学性质。结果显示,分离纯化组分经PAGE电泳检测达到电泳纯,研究发现,该酶最适反应温度为80℃,热稳定性好,在70-95℃时能长时间保持较高活力,最适p H值为6.5,耐酸碱稳定性好。金属离子中,Fe3+、Mg2+、K+对β-葡萄糖苷酶的活性起抑制作用,其中Fe3+对该酶的抑制作用最为明显,Fe2+、Mn2+对β-葡萄糖苷酶的活性起激活作用,其中Mn2+对β-葡萄糖苷酶的激活作用最为明显。有机溶剂中,甲醇、丙酮对该酶起到激活作用,其中甲醇的激活作用最明显,而乙酸乙酯对该酶具有明显的抑制作用。分离纯化得到了电泳纯的β-葡萄糖苷酶,并掌握了其基本的酶学性质。     

黑曲霉β—葡萄糖苷酶的提纯与性质

从黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ发酵液中分离提纯了β－葡萄糖苷酶。提纯步骤通过（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００等三步纯化,得到凝胶电泳均一的β－葡萄糖苷酶。     

康氏木霉B—7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ２经多种理化诱变因子及空间微重力辐射等因素的处理,选育到１株高活力纤维素酶变异株Ｂ－７。其固体培养物的纤维素酶,以滤纸为底物酶活力为３４μ／ｇ,以羧甲基纤维素（ＣＭＣ）为底物酶力为１４７２μ／ｇ。与野生菌８５４－Ｂ２相比,产酶活力水平分别提高５倍和７倍多。酶在滤纸上作用的最适条件为ｐＨ４．５－５．０,温度５５－６０℃;２５℃,保温２４ｈ,ｐＨ稳定范围为ｐＨ４．０－６．５;７     

康氏木霉B－7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究

野生型康氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｋｏｎｉｎｇｉ）８５４－Ｂ２经多种理化诱变因子及空间微重力辐射等因素的处理,选育到１株高活力纤维素酶变异株Ｂ－７。其固体培养物的纤维素酶,以滤纸为底物酶活力为３４μ／ｇ,以羧甲基纤维素（ＣＭＣ）为底物酶力为１４７２μ／ｇ。与野生菌８５４－Ｂ２相比,产酶活力水平分别提高５倍和７倍多。酶在滤纸上作用的最适条件为ｐＨ４．５—５．０,温度５５—６０°Ｃ;２５°Ｃ,保温２４ｈ,ｐＨ稳定范围为ｐＨ４．０—６．５;７０°Ｃ保温３０分钟,剩余酶活力３４．４％。     

海枣曲霉β—葡萄糖苷酶的提纯与性质

A beta-glucosidase has been purified to electrophoretically homogeneity from the wheat bran culture of Aspergillus phoenicis by PEG 6000-phosphate biphasic separation, column chromatography on Sephadex G-100, DEAE-Sephadex A-50 and SE-Sephadex C-50. The enzyme showed optimal activity at pH 5.0 and 60 degrees C. It was stable in the pH range of 4.0-7.5 and up to 55 degrees C. The enzyme activity was strongly inhibited by Ag+ and Hg2+. The molecular weight of the enzyme was 118000 as determined by SDS-PAGE and 195000 by gradient-PAGE. The isoelectric point was pI 3.95 as determined by PAGIF.     

拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）UV Ⅲ产纤维素酶液体发酵研究

以拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii)TH为出发菌株,经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株UV Ⅲ,其液体发酵最适产酶培养基为（W／V）：豆皮粉3％,硝酸铵0．6％,磷酸二氢钠0．65％,硫酸镁0．25％,氯化钙0．15％,pH5.0;最佳发酵条件为：30℃,125r/min。发酵7d CMCase活力可达103．55IU／mL,滤纸酶活可达5．51IU／mL,β-葡萄糖苷酶活可达0．96IU／mL,分别比出发菌株TH提高了1．40、2．34、0．60倍。     

黑曲霉与里氏木霉固态混合发酵产β-葡萄糖苷酶

对黑曲霉NL02与里氏木霉RUT-C30固态混合发酵产β-葡萄糖苷酶的发酵培养基进行优化,研究培养基含水率、C源、N源、接种量、温度和2种菌种不同延长接种时间与接种比例对β-葡萄糖苷酶活力的影响。研究表明：麸皮17.5 g、玉米芯7.5 g、（NH4）2SO4 0.40 g、尿素0.37 g、黑曲霉孢子接入量为107个接种到250 mL三角瓶中,温度30 ℃、摇床转速100 r/min时,里氏木霉以105个孢子与黑曲霉同时接入,每克干曲所得β-葡萄糖苷酶的活力为132.45 IU,较黑曲霉单独培养时的104.35 IU提高了26.94%。