比色法快速测定乳酸菌谷氨酸脱羧酶活力及其应用

基于Berthelot显色测定ω-氨基酸的反应 ,探讨了比色法快速测定谷氨酸脱羧酶活力的测定条件。结果表明 ,该方法灵敏度较高 ,重现性好 ,成本低 ,快捷 ,可替代氨基酸分析仪分析法。对乳酸菌谷氨酸脱羧酶提取液的适宜反应底物体系为 0.2mol LMacIlvaine ,pH4.7,内含 0.1mmol LPLP (5 磷酸吡哆醛 ) ,10mmol L底物L MSG (L 谷氨酸钠 )。 2 0 0 μL底物溶液和 1～ 1 0 0 μL酶液在 3 0℃反应 ,然后冰浴中加入 2 0 0 μ/L 0.     

NaCl对水稻谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的胁迫作用

在ＮａＣｌ的胁迫下,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的ＮａＣｌ浓度的升高而降低;游离ＮＨ４＾＋在叶中积累,在根中未见明显变化。与根相比,叶对ＮａＣｌ的胁迫作用更为敏感。叶的ＮＡＤＨ－ＧＯＧＡＴ和ＮＡＤＨ－ＧＤＨ活性在ＮａＣｌ胁迫降低的程度明显大于根。无论是否有ＮａＣｌ存在,根的ＮＡＤＨ－ＧＤＨ活性明显高于叶。ＧＳ／ＧＤＨ比值分析提示,对对照下,根中的ＮＨ４＾存在,根的ＮＡ     

林肯链霉菌谷氨酸合酶的纯化和性质

采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤和吸附层析等方法 ,分离纯化了林肯链霉菌谷氨酸合酶 ,电泳鉴定为单一组分 .这是链霉菌中的第 1例 .谷氨酸合酶很不稳定 ,向酶缓冲液中加入α -KG ,PMSF ,EDTA ,β 巯基乙醇和甘油可以大大提高其稳定性 .测得全酶分子量为 1 38ku ,亚基分子量为 81和 5 7ku ,表明该酶由2个不相同的亚基构成 .吸收光谱在 380和 440nm附近没有吸收峰 ,表明该酶是不含铁的非黄素蛋白质 .该酶反应的最适 pH为 7 .2 ,最适温度为 30℃ .该酶对NADH ,α KG和L -Gln的表观Km 值分别为 5. 2 1× 1 0 ^-5 ,4. 1 7× 1 0 ^-4 和 4. 35× 1 0 ^-4 mol/L .以NADPH代替NADH作电子供体 ,该酶仍表现出部分活力 .反应产物Glu和NAD⁺,部分金属离子、氨基酸及三羧酸循环中间物对该酶活力有不同程度的抑制作用 .     

测定二化螟胆碱酯酶活力的快速方法

<正> 有机磷酸酯和氨基甲酸酯杀虫剂在昆虫体内主要作用于神经系统,抑制胆碱酯酶的活性,导致神经传导的阻抑而引起昆虫中毒死亡。研究其毒理机制,胆碱酯酶活力是重要指标之一。其测定方法发展甚快,Guilbault(1970)已系统介绍。Ellman(1961)提出的     

秸秆纤维素分解菌的酶活力测定

目的:测定秸秆纤维素分解菌的酶活力。方法:从土壤中分离出具有分解纤维素能力的菌株,采用刚果红染色法进行粗选,得到7株透明圈较大的菌株。将这7株菌株液体发酵培养6d,再分别用滤纸分解度观察、羧甲基纤维素酶活法(CMC)、滤纸酶活法(FPA)和天然纤维素酶活法测定其酶活力。结果:在7株菌株中,F-1、F-2、F-3、F-5的酶活力测定结果与其溶解圈的测定结果、滤纸分解结果基本相同。且天然纤维素酶活力高的菌株,其CMC酶活、FPA酶活也高,滤纸分解效果也比较明显。结论:CMC法、FPA法和天然纤维素酶活法适于测定秸秆纤维素分解菌的酶活力。     

水稻种子萌发期间谷氨酰胺合成酶和NADH-谷氨酸合酶的变化

测定了水稻种子不同萌发时期胚乳、胚芽鞘和幼根的谷氨酰胺合成酶（GS）和依赖于NADH的谷氨酸合酶（NADH－GOGAT）活性变化。胚乳和胚芽鞘的GS活性在萌发过程中升高,幼根的GS活性则有所降低。NADH－GOGAT的活性变化趋势与GS相同。Native-PAGE活性染色表明,在萌发阶段的水稻种子胚乳和幼根里,始终只观察到一种GS活性带。但是,在水稻种子萌发3d后,在胚芽鞘中除继续检测到GS1的活性外,还可以观察到GS2的活性。蛋白质印迹显示,水稻种子胚乳中的GS（GSe)和GS1和GSra一样是一种胞质型GS。实验结果提示,这些不同组织中的GS与NADH－GOGAT构成的循环途径也许是水稻种子萌发时氨同化的主要途径。     

浑球红细菌谷氨酸合酶小亚单位基因的序列分析

本文测定了浑球红细胞菌Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ谷氨酸合酶小亚单位基因及其５’端和３‘端的序列,全长为２３８７ｂｐ。序列分析表明Ｒ．ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ｇｌｔＤ基因全长为１２４２ｂｐ。从核苷酸序列推测其蛋白质分子量约为４４ｋＤ。Ｒ．ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ｇｌｔＤ基因与Ａｚｏａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ和Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ的ｇｌｔＤ基因ＤＮＡ序列有     

大鼠脑组织中一氧化氮合酶测定

在含有一氧化氮合酶(NOS)底物左族精氨酸(L-Arg), 辅助因子还原性辅酶Ⅱ(NADPH)、四氢生物蝶呤(BH₄)、黄素单核苷酸(FMN), 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)以及Ca²⁺、钙调蛋白等溶液中加入大鼠脑组织匀浆离心上清液, 组成酶反应体系. 37℃温育80min, 应用N-(1-萘基)-乙二胺、对氨基苯磺酸的重氮、偶氮反应测定酶反应体系中一定时间内NO代谢产物NO^-₂浓度变化, 建立一种简便的NOS活性测定方法. 反应体系最佳pH为7.4, K_m=0.1mmol/L, 体系内NO^-₂生成量与加入样品量之间有良好线性关系(r=0.998). 此方法简单、方便、重复性好, 批内CV为3.69%, 批间CV为5.16%. 10只健康大鼠脑组织中NOS活性为(39.61±7.64)nmol/(min·g).     

中国根霉12#纤溶酶活力单位的测定活力单位的测定

主要阐述了根霉纤溶酶活性（效价）的测定方法,采用血纤维蛋白平板法,在以尿激酶为参照标准的情况下,给出了根霉纤维酶提纯各步骤的活性情况。     

抑制表达谷氨酸合酶基因对水稻碳氮代谢的影响

提高水稻的氮素利用率对农业生产极为重要,水稻谷氨酸合酶（GOGAT,EC1．4．1．14）被认为具有提高水稻氮素利用率的潜力,但该酶在水稻中的功能以及其对碳氮代谢的影响一直未被系统的报道．本研究以抑制表达谷氨酸合酶基因的转基因水稻为材料,结合谷氨酸合酶基因家族全生育期表达谱数据,研究该基因家族在水稻体内的功能及其对碳氮代谢的影响．结果表明,谷氨酸合酶家族基因成员的表达模式各不相同,具有明显的组织和器官特异性,表明其在体内行使着不同的功能．与野生型相比,抑制表达谷氨酸合酶基因的转基因植株的分蘖数、地上部干重以及单株产量显著下降．同时,转基因植株叶片中的硝酸盐、部分游离氨基酸、叶绿素、糖、糖磷酸以及吡啶核苷酸含量也显著降低,但游离铵、仅一酮戊二酸以及异柠檬酸含量上升．分析表明,谷氨酸合酶在水稻的碳氮代谢过程中扮演着重要角色,是水稻氮素高同化过程中必不可少的因子．     

快速测定纤维素酶中CMC液化活力法

纤维素酶是一种多组份的复合酶,对各组份的活性需要以不同的纤维素底物和不同的方法加以测定。尽管一般倾向认为滤纸活性是快速测定纤维素酶总量的良好指标,并已有效地用于监测发酵和选育新的生产菌株等方面,然而纤维素酶的研究和应用,仍然要     

酶电极法快速测定甘油含量的研究

利用酶固定化技术,以甘油激酶（GK）、甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）为反应酶,研究GK、GPO的固定化方法及固定化模式,制备甘油酶膜、甘油酶电极,并利用其测定甘油含量。结果表明,GK、GPO按1：1比例固定化时,酶电极电流信号最高;最高效固定模式为：GK固定于核微孔膜,共价偶联GPO固定于Biodyne膜,形成共价双酶膜,进而组装为甘油酶电极。性能研究表明,甘油酶电极最适pH值为7.0,最佳温度为28~32℃;最佳实验条件下,线性范围为0.05~9.00 g/L;回收率为98.4%~102.4%,稳定性高,相对标准偏差（RSD）<5%;测定结果与高效液相色谱法、高碘酸氧化法比较,无明显差异（P>0.05）,且该方法操作简单,专一性强,检测快速,适于实际生产中甘油的实时定量及监控。     

高效液相色谱测定血小板cAMP-磷酸二酯酶活力

本文报道了离子交换高效液相色谱-紫外检测磷酸二酯酶(PDE)活力的方法。本方法的回收率为93.02±2.09％,重复性CV为3.16％,5’-AMP在17.0—90.7pmol/10μl、cAMP在138—1104pmol/10μl浓度范围内,相关系数分别为0.9986和0.9950。用5’-AMP生成率和cAMP的转化率表达PDE活力,两者吻合。本方法能灵敏地反映茶碱对PDE的抑制作用。     

四棱豆不同生育期叶片中过氧化物酶活力测定

比较了四棱豆不同生育期叶片中过氧化物酶活性,结果表明：该酶活力和比活力在不同生育期存在着明显差异,蛋白质含量变化不大。在成熟期,随着植株节位升高,酶活力及比活力均呈下降趋势,蛋白质含量则呈上升趋势。     

谷氨酰胺合成酶和谷氨酸合酶参与红细菌固氮酶的调节(英文)

A quarter century ago, the researchers in our laboratory had investigated the mechanism of hydrogen evolution in photosynthetic bacterium Rhodobacter palustris, which was later found to be a nitrogenase-catalyzed reaction(Song and Huang 1964). Since the mid-70's, the mechanism of nitrogenase regulation has attracted much attention, and great progress has been made. The members of the photosynthetic bacteria were selected as a favourite organisms for the study of the regulation of nitrogenase by many scientists because of their versatile growth types, and the results were highly rewarding.     

浑球红细菌谷氨酸合酶基因(glt)的克隆和图谱分析

利用转座子Tn5随机插入诱变筛选得到12株浑球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)氨同化缺陷突变株(Asm~-)。这些突变株胞内均无GOGAT活性,同时它们均无固氮酶活性(Nif~-),并且具有氮代谢多效性缺失表型(Ntr~-)。将含有Azorhizobium sesbaniae ORS571的完整glt基因的质粒pHB10转入突变株中能互补上述表型。通过筛选携带Tn5的R-prime质粒克隆了glt::Tn5片段。Southern杂交证明所克隆glt::Tn5片段与E. coli的gltBD基因有同源性。用此片段与以pLAFR3为载体所构建的R. sphaeroides 601基因文库进行菌落原位杂交筛选到了携带glt基因的cosmid pLT27。pLT27能互补所有12株R.sphaeroides氨同化缺陷突变株。酶切分析表明在该cosmid中插人的染色体DNA片段大小约为26.5kb。以pRK415为载体亚克隆了4.0kb与10.5kh的pLT27的Hindlll酶切片段,分别命名为pLTRK271与pLTRK272。pLTRK272能互补变种GT6、GT10、GT11,pLTRK…     

固定化谷氨酸氧化酶管流动注射测定谷氨酸的研究

多孔玻璃珠固定谷氪酸氧化酶与过氧化氢酶分别制成相应的固定化酶管,结合流动注射分析系统测定谷氨酸的含量。测定线性范围在0．1—2．O mmol／L．精度(c．V)O．7％．测定速率每小时80样以上．使用寿命至少4个月。在各氨酸浓度低于2．5mmol／L时．pH在6．5—8．0．温度20—35℃．磷酸盐浓度在0.05—0.25mol／L范围内对测定几乎无影响．对不同发酵时间的谷氨酸发酵液测定,测定的结果与酶试剂盒及瓦氏法比较,结果一致．说明该方法已具有实际应用价值。     

实验性癫痫时海马内一氧化氮合酶的变化及其与谷氨酸受体的关系

应用免疫组织化学方法观察了青霉素致痫时海马内神经元型一氧化氮合酶（ｎＮＯＳ）表达的时程变化及海马内微量注射ＮＭＤＡ受体拮抗剂ＭＫ－８０１（５－ｍｅｔｈｙｌ－１０,１１－ｄｉｈｙｄｒｏ－５Ｈ－ｄｉｂｅｎｚｏ［ａ,ｄ］ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎ－５,１０－ｉｍｉｎｅｍａｌｅａｔｅ）和非ＮＭＤＡ受体拮抗剂ＤＮＱＸ（６,７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２,３－ｄｉｏｎｅ）对大鼠海马内ｎＮＯＳ表达的影