动脉套管的简易制作方法

在测定动脉血压的生理实验中 ,动脉套管的使用往往决定了实验的成败 ,因为一般实验中所用的玻璃套管尖端较细 ,极易折断损坏。有鉴于此 ,我们实验室在多年实验的基础上 ,探索出了一种利用废旧圆珠笔芯制作动脉套管的方法 ,现介绍如下 :1)取一用过的圆珠笔芯 ,将其头端拔掉 ,用酒精灯烘烤笔芯中段 ,待其软化后慢慢向两端拉 ,使其中段变细变长 (见下图 ) ,至其粗细适宜后 ,停止烘烤 ,用刀片斜向切成两段 ,可用于制作两个套管 ;　　 2 )另取两段 2 cm长的笔芯 ,分别将其一端 (约0 .5cm)纵裂成“Y”型 ,分别用酒精灯烘烤使其与套管壁粘在一起 ,…     

一种简易蛙心套管的制作

在进行高体蛙心灌流实验时,常用斯氏蛙心套管或八木氏蛙心套管进行实验。但这两种玻璃蛙心套管难制作,又不易买到,而且极易破损。这里介绍一种利用一次性注射器空筒、12号或9号注射针头和一次性输液器的细塑料管制作简易蛙心套管的方法。把12号或9号注射针头用钳子在距针检约Icm处将针梗前端剪掉,断口最好斜些,用毁髓针将断口复原,并用砂纸将断口磨钝（避免断口锋利在插入血管时划破组织）。然后将处理过的针头安到Zml一次性注射’器空筒上,即制成了斯氏蛙心套管（12号注射针头）或用作八木氏蛙心套管（静脉套管,9号注射针头）。把…     

双套管水柱法监测家兔平均动脉压

目的探讨双套管水柱的构成,用双套管水柱法测定家兔的平均动脉压,观察静脉麻醉对家兔血压的影响。方法双套管水柱的组成和使用,并在局麻或全麻下,用双套管水柱法及RM6000多导生理记录仪有创连续监测家兔平均动脉压,用T检验分析两种方法所测数据。结果静脉麻醉后家兔的平均动脉压从术前（149.88±1.77）cmH2O（局麻清醒安静状态下）下降到（127.60±4.09）cmH2O,有显著差异（P〈0.05）。双套管水柱法及RM6000多导生理记录仪测得结果间无显著性差异（P〉0.05）。结论用双套管水柱法可准确地、动态地监测麻醉家兔平均动脉压。静脉麻醉对家兔血压有明显的影响。     

基因治疗保持动脉畅通

为了使阻塞的动脉保持畅通 ,美国心脏病学家用一个微小的、有筛孔的钢管 (以下简称为微钢管 )在血管成形术后永久地插入动脉 ,此术已获成功。但有些病人的动脉壁细胞生长过多 ,会越过筛孔而重新阻塞动脉。科学家已知某些基因可阻止动脉细胞过度生长。现在 ,费城的宾夕法尼亚大学的ＲｏｂｅｒｔＪ .Ｌｅｖｙ研究组创建了一种含ＤＮＡ的聚合物 ,用来包住微钢管 ,使其成为一种基因释放工具。这种含ＤＮＡ的聚合物包被的微钢管一旦插入动脉 ,该聚合物便开始降解而释放ＤＮＡ ,ＤＮＡ穿入动脉壁细胞 ,阻止了动脉壁细胞过度生长。Ｌｅｖｙ研究组在…     

Alpha珠蛋白基因片段表达载体的构建

目的：构建alpha珠蛋白基因片段反义表达载体,抑制重型beta地贫患者alpha珠蛋白基因的过量表达,为重型beta地贫基因治疗打下基础。方法：采用PCR扩增alpha珠蛋白基因片段807bp,反应条件94℃ 30s,68℃ 1min,72℃ 2min,35个循环,然后将所扩增片段用Klenow大片段酶补平PCR产物末端,另外用HindⅢ酶切pLNSX,用Klenow补平后,与补平末段的PCR产物平端连接,转化用CaCl2制备的感受态细胞受体DH5α,用碱法提取所得克隆子质粒,电泳比较质粒大小,再用PCR初筛,最后用双酶切进行鉴定。结果：经过质粒大小比较,PCR初筛,双酶切鉴定,得到6个正向插入重组子。     

Bayes框架下DNA证据的量化研究

针对DNA（脱氧核糖核酸）证据的量化过程中常用的插入算法存在的缺陷，即量化结果与样本大小无关，小样本时过分量化了DNA证据，本文考虑了样本大小的影响，引入了Bayes模型。给出了基于Bayes模型下的似然比的计算公式，结合实际案例，对比了两种方法下的计算结果，数据结果表明基于Bayes模型下的算法比插入算法更加精确和合理。     

制备观察蝗虫精原细胞减数分裂装片

制备蝗虫精原细胞减数分裂装片的方法介绍如下：１取材捕捉到蝗虫雄性成虫后,用剪刀在腹部第１,２节腹侧面剪一道口子,用镊子自剪口处伸入,从背面前部夹住一组织块向外拉,可见一团黄色组织块即蝗虫精巢。２固定将精巢投入蒸馏水中低渗５ｍｉｎ后转至固定液（甲醇∶冰...     

在枯草杆菌中有启动子功能的噬菌体T5 DNA片段的克隆

用启动子探针质粒pTG 402为载体,用鸟枪射击法克隆了噬菌体T5 DNA的片段。克隆中的2％含有具启动子功能的插入片段,其中pTG 402-20含有启动功能最强的插入片段。DNA-DNA分子杂交实验结果表明,pTG 402-20的插入片段能与T5 DNA Hind Ⅲ酶切的G和B片段杂交。这个插入片段的大小约为0.84kb。     

用PCR法直接快速筛查重组阳性克隆

应用ＰＣＲ法快速筛查插入有苯丙氨酸脱氨酶ｃＤＮＡ重组阳性克隆。方法：用于ＰＣＲ扩增的引物是位于载体ｐＥＴ２３ｂ启动子处的Ｔ７启动子引物和位于目的基因ＰＡＬｃＤＮＡ３’端终止密码ＴＡＡ处的引物。以灭菌吸头挑一单菌落加入ＰＣＲ体系扩增。结果：在筛查的３个克隆中,有２个阳性克降,并且插入方向正确,经ＤＮＡ序列测定得到进一步证实。结论：以ＰＣＲ方法筛查重组阳性克隆,可以简便快速鉴定插入片段的大小和方面,不     

一次性防污染标本刷重复使用的可能性研究

本文报告纤支镜用一次性防污染标本刷重复使用的方法及其可靠性试验结果。重复使用的方法：初次使用后用清水认真洗涤，７５％酒精浸泡消毒二小时，灭菌盐水浸泡半小时后凉干，在外套管末端重新置入一聚乙二醇保护塞，或同时在纤支镜吸引孔末端亦加入保护塞。重复使用可靠性的验证：１、用１０＾５－１０＾１０的大肠杆菌液污染毛刷并用上述方法消毒处理，反复１５次试验，刷洗涤液无细菌生长。     

大鼠局灶性脑缺血模型的有效制备

目的比较三种不同手术方法制作大鼠永久性脑缺血模型的效果,包括死亡率、神经功能评分、脑梗死体积、手术效率。方法将采用不同手术方法制备脑缺血模型的大鼠随机分为三组。1组在术中分别结扎颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、枕动脉、翼腭动脉,并且用动脉夹对颈内动脉（ICA）进行临时夹闭;2组在术中分别结扎颈总动脉、颈外动脉,暴露枕动脉和翼腭动脉但不结扎,用丝线悬挂颈内动脉而不是用动脉夹夹闭,线栓在显微镜直视下插入颈内动脉越过翼腭动脉起始点至大脑中动脉分叉处;3组只暴露颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,结扎颈总动脉、颈外动脉,丝线悬挂颈内动脉,显微镜下将线栓盲插至颈内动脉大脑中动脉分叉处。分别检测三组模型的死亡率、神经功能评分、梗死体积、手术时间。结果第3组制作动物模型的方法所花费时间平均为17.5 min,死亡率较低,神经功能评分及梗死体积稳定。结论采用第3组手术方法可以缩短手术时间,提高手术效率,能够高效地制作出更加稳定的可用于临床实验的大鼠脑缺血模型。     

线栓法制备大鼠脑缺血模型的要点和体会

目的:提高线栓法制备大鼠大脑中动脉脑缺血模型的成功率。方法:从鼠种、鼠龄、性别、侧别方面选择大鼠,分离颈总、颈内动脉、颈外动脉,结扎颈总、颈外动脉,用鱼线和指甲油的改良线栓法制备线栓,经由颈总动脉剪一小口,将制备好的栓线插入颈总动脉,并推送入颈内动脉。根据大鼠体重和施术者手感选择合适的进线深度,阻断大脑中动脉,制备模型,并观察大鼠脑组织的病理改变。结果:造模成功率明显提高,模型符合脑梗死的病理过程。结论:改良后的方法模型成功率提高,可复制性强。     

基因敲入技术的突破

Baylor医学院的KoenVenken博士创新了基因敲入技术，这一突破使生物学家向果蝇体内敲入大量的DNA成为可能。传统的方法只能在果蝇基因组中插入较小的DNA片段，Venken的方法可将20000到133000大小碱基对的DNA敲入果蝇基因组。传统上，生物学家利用果蝇基因组中的P元素能够整合外源性DNA片段的特性，将目标DNA片段插入P元素，再将含有外源性DNA的P元素复合体导入果蝇基因组。这一传统方法能整合的DNA片段长度有限。Venken在研究中需要敲入很长的DNA片段到果蝇体内。于是他将含有DNA片段的P元素转入到质粒里，质粒能够较P元素自身更稳定地携带大片断DNA。     

剂量精确的大鼠无创气管滴注方法

目的建立一种滴注剂量精确的大鼠无创气管滴注方法。方法选用一次性使用静脉输液针的胶管制作套管,透射光插管法行大鼠气管插管,微量进样器平头针经由套管插入气管进行滴注。滴注液体为生理盐水,滴注剂量5～200μL,精确度为1μL。结果在体重200—350g的10只大鼠上共完成50次气管滴注操作,实验过程中和实验之后大鼠均无异常表现。结论套管微量进样器法具有无创、精确、安全的特点,可广泛应用于大鼠经气管给药或染毒的各类研究。     

稳恒流下腹主动脉旁瘤超声多普勒血流信号的仿真分析

腹主动脉旁瘤超声多普勒血流信号的仿真研究,可以为采用超声多普勒技术检测腹主动脉旁瘤的形成、生长过程和估计动脉旁瘤瘤体大小提供指导。先通过有限元数值计算方法得到稳恒流下腹主动脉旁瘤区域内的血液流场分布,然后采用余弦叠加的合成方法仿真出相应的超声多普勒血流信号,最后对仿真信号进行频谱分析,计算其平均频率,并研究它与腹主动脉旁瘤瘤体大小的关系。结果表明：当动脉旁瘤较小时,平均频率的幅度变化较小;当动脉旁瘤较大时,平均频率的幅度变化较大。因此,采用平均频率的幅度变化可以在一定程度上估计动脉旁瘤的瘤体大小。     

改良线栓法大鼠大脑中动脉阻塞模型的建立

目的对大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型进行改良,通过比较再灌注24h时大鼠神经功能评分、梗死率、模型制作时间、成功率和死亡率等指标评价改良线栓法大鼠MCAO再灌注模型的有效性。方法12只SD大鼠随机分为对照和模型两组,对照组采用分离结扎翼腭动脉,从颈外动脉插入线栓至大脑中动脉。模型组采用不分离结扎翼腭动脉,从颈总动脉分叉处插入线栓至大脑中动脉。阻断大脑中动脉血供2h后将线栓拔出实现再灌注。于再灌注24h时观察脑组织组织病理学改变,计算比较两组大鼠神经功能评分、模型制作时间、模型成功率和死亡率以及鼠脑切片TTC染色测量脑梗死率。结果两组MCAO模型在再灌注24h后大鼠神经功能评分、梗死率、模型成功率和死亡率等方面没有显著差异;模型组的模型制作时间显著少于对照组（P〈0．05）。结论采用不分离结扎翼腭动脉,由颈总动脉插入线栓的改良线栓法是稳定和可靠的MCAO造模方法。     

甲胎蛋白特异性小干扰RNA表达载体的构建及鉴定

目的：构建特异性抑制甲胎蛋白（AFP）的小干扰RNA（siRNA）表达载体,为进一步研究AFP基因功能及AFP相关肿瘤的基因治疗奠定基础。方法：设计并合成AFP特异性的短链寡核苷酸,退火形成双链DNA片段,通过与RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express Donor Vector连接、转化大肠杆菌、扩增、纯化得到所需质粒,用琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列。结果：琼脂糖凝胶电泳证实纯化后的质粒大小约为6740bp,测序证实插入序列与合成的寡核苷酸序列完全符合。结论：构建了AFP特异性的siRNA表达质粒pSIREN-DNR—DsRed-Express Donor Vector-AFP。     

2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP与毒力的相关分析

目的：构建2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP的基因插入失活突变体并进行毒力相关分析。方法：首先将同源臂片段克隆到pSET4s质粒上,构建插入失活载体pSET4s-pTP,并通过对单交换的筛选获得89k/pTP的基因插入失活突变体,再用小鼠腹腔感染模型对突变株和野生株的毒力进行比较。结果：获得了89k/pTP的基因插入失活突变体,并发现其毒力与野生型相比明显下降。结论：2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP与其毒力有关,其作用和机制值得进一步分析。     

荧光假单胞菌Tn5转座诱变及对青枯病生防特性

目的：利用Tn5转座诱变荧光假单胞菌PF20001,研究所获得的突变株对青枯病的生防效果。方法：利用三亲本杂交方式,将带有转座子Tn5的Tn5-102（含luxAB）的质粒pTR102成功地转入PF20001,利用平板相互拮抗法分析突变株对青枯病致病菌的拮抗作用。结果：通过诱导Tn5转座,得到荧光假单胞菌PF20001的Tn5插入突变库。经平板相互拮抗实验发现,菌株PF20001-lux-48拮抗圈明显大于野生型（半径达0.35cm）。用Tn5-lux特异引物进行PCR扩增,结果显示只有以该突变株的DNA为模板才能得到300bp的扩增产物,证实该菌株基因组中有Tn5插入。结论：Tn5的插入使菌株PF20001对青枯病生物防治能力增强。     

利用高效的大片段DNA回收方法改良Fosmid文库的构建

外源DNA插入片段为40 kb左右的Fosmid文库在基因组学研究中有广泛的应用,但长期以来,40 kb外源片段的分离与纯化依赖于传统的切胶并电洗脱至透析袋的方法,难以得到足够量的DNA片段,极大降低Fosmid文库构建的成功率。通过改进全自动核酸/蛋白质回收系统SageELF的操作流程,建立一种简单、便捷、高效地回收40 kb左右DNA片段的方法,并用其成功地构建高质量的Fosmid文库。从文库中随机挑选的25个单克隆,经过测序及酶切分析,发现该文库中插入的DNA片段大小为37.9±5.2 kb。以上结果表明,利用改良的操作方法回收40 kb基因组DNA,操作简捷、高效,片段大小精准;另外,用该DNA片段构建的Fosmid文库,插入片段比较集中,有利于后续的基因组学分析。