双杂交系统:新兴的检测蛋白——蛋白交互作用的有力工具

蛋白--蛋白交互作用（ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）是生命活动持续的最基本的根据,细胞内的信号传导也是研究细胞的发育、分化及疾病的生理反应所要了解的最终目标。国际上出现了一种直接于细胞内检测蛋白--蛋白交互作用且灵敏度很高的遗传学新方法,酵母双杂交系统（ｙｅａｓｔｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄｓｙｓｔｅｍ）,可迅速鉴别新的信息传递蛋白。本文综述了双杂交系统的原理、发展概况、应用范围及需注意的一些问题,并对它将来的发展及应用作了一些展望。     

RGS与G蛋白信号转导的调节

ＲＧＳｓ（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）是最近发现的Ｇ－蛋白信号转导的负调节子,大部分ＲＧＳｓ通过ＧＡＰｓ（ＧＴＰａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）方式发挥作用,ＲＧＳ的作用具有高度特异性,在体内受到严密的调节。对ＲＧＳ的深入研究有利于对信号转导调节的了解。     

早老蛋白(Presenilins)功能研究进展

编码早老蛋白（Ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎｓ,ＰＳｓ）的基因ｐｓ－１、ｐｓ－２被认为是构成早发家族性老年痴呆（ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ ｆａｍｉｌｉａｌ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ,ＦＡＤ）的主要致病基因。早老蛋白具有８个跨膜区的结构,在神经系统广泛表达。其功能尚未完全明确,最近几年的研究主要集中在早老蛋白与淀粉样沉淀前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＡＰＰ）的切割、     

阿拉伯半乳糖蛋白及其在植物细胞分化中的作用

阿拉伯半乳糖蛋白（ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｓ，以下简称ＡＧＰｓ）是广泛存在于高等动植物的一种糖蛋白。本文就其化学组成、特性、合成、代谢和其在植物细胞分化中的某些作用的研究进展作了介绍。     

酵母双杂合系统在丙型肝炎病毒NS5A研究中的应用

母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白－蛋白相互作用的新技术。应用该技术,以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构蛋白５Ａ（ＮＳ５Ａ）为“诱饵”,筛检了人中细胞ＨｅｐＧ２来源的ｃＤＮＡ文库,获得了７个ＮＳ５Ａ结合蛋白的基因克隆。报道了其中两个阳性克隆（＃２、＃１６）的结果,并对“人核小体组装蛋白相关蛋白”（Ｈｕｍａｎ ｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ,ｈＮＲ     

植物病原相关蛋白研究进展

植物在受到真菌、细菌、病毒侵染或意外的伤害时体内会产生新的蛋白质,称作病原相关蛋白（ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ简称ＰＲ蛋白）。ＰＲ蛋白的产生与植物对病原物的抵御直接相关,本文就ＰＲ蛋白的诱导表达、调控和作用机理方面的最新研究进展作一综述。     

泛蛋白连接酶Ubc9参与氧还蛋白Ref—1的降解

氧还蛋白Ｒｅｆ－１是一种双功能蛋白质,在细胞氧还调控和ＤＮＡ无嘌呤／无嘧啶损伤修复中起重要作用。发寻找与它相互作用的蛋白Ｒｉｐｓ（Ｒｅｒ－１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｒｎｓ）,用Ｒｅｆ－１氧还功能域进行了酵母双杂交库的筛选,得到了５种阳性克隆。其中Ｒｉｐ３经测序证实为泛蛋白连接酶Ｕｂｃ９。Ｈｅｌａ细胞中共过表达Ｕｂｃ９可以明显抑制Ｒｅｆ－１对ＡＰ－１报告系统的增强作用。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹     

Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征

对ＥＢ病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,ＥＢ病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体（Ｅｐｉｓｏｍｅ）形式存在,而其基因转录有如下特征：（１）ＥＢ病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达ＥＢＮＡ－１,并且此基因转录产物由一个在ＢａｍＨＩ－Ｆ区的启动子（Ｆｐ）驱动;（２）潜伏感染膜蛋白（Ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ）和末端蛋白（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒ     

天然蛇毒蛋白C激活剂的氨基酸序列及其比较

血浆蛋白Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎＣ，ＰＣ）是人体蛋白Ｃ系统的主要成分，在人体的抗凝血机制中起重要作用。α－凝血酶是其唯一的生理激活剂，它裂解ＰＣ重链氨基端精１２－异亮１３肽键脱下１２肽，形成具有丝氨酸水解酶活化中心的活化ＰＣ而发挥抗凝作用。近年来，在天然蛇...     

G蛋白偶联受体激酶—2的N端结构域缺失对其催化功能的影响

为揭示Ｇ蛋白偶联受体激酶（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅｓ，ＧＲＫｓ）的Ｎ端结构域在该酶家族磷酸化受体以及催化反应中的作用，对ＧＲＫ２的Ｎ端结构域进行了缺失突变研究。将Ｎ端结构域的ＧＲＫ２（ΔＮ－ＧＲＫ２）与谷城肽转硫酶融合表达。经过亲和纯化后，再用凝血酶酶切得到单独的ΔＮ－ＧＲＫ２蛋白。对磷酸化小肽的活力检测表明，Ｎ端结构域的缺失基本上不影响ＧＲＫ２的激酶催化     

酵母PHO85结合蛋白PAP1基因的克隆和表达

酵母调探因了ＰＨＯ８５是一个依赖于细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）的蛋白酶（ＣＤＫ）,参与对细胞周期和酸性磷酸酯酶基因表达的调控。冯ＰＨＯ８５为靶分子,利用酵母的染色体基因文库中克隆到了一个新的与ＰＨＯ８５相结合的蛋白因子的基因,利用酵母双杂交（ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ）系统从酵母的染色体基因文加中克隆到了一个新的与ＰＨＯ８５相结合的蛋白因子的基因,将此蛋白质命名为ＰＡＰ１（ＰＨＯ８５ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ     

内蛋白子及其功能

内蛋白子及其功能白玉明,袁静明（山西大学生命科学系,太原０３０００６）关键词内蛋白子,蛋白质剪接,内蛋白子归巢１．内蛋白子内蛋白子（ｉｎｔｅｉｎ）是由Ｐｅｒｌｅｒ等［１］于１９９４年正式提出的与蛋白质剪接（ｐｒｏｔｅｉｎｓｐｌｉｃｉｎｇ）有关的一个专...     

绿色荧光蛋白基因研究进展

绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）基因是目前唯一在细胞内稳定表达,不需要任何反应底物及其它辅助因子,无种属,组织和位置特异性,其产物ＧＦＰ对细胞无毒性,且检测简单,结果真实可靠的新型报告基因,其特有的生物化学性质使其在细胞生物学和分子生物学领域有着广泛的应用前景。     

铁效应元件结合蛋白2的特性

铁效应元件结合蛋白２的特性李昕权,郑敏（华西医科大学附属二院血液研究室,成都６１００４１）关键词铁效应元件结合蛋白２铁效应元件结合蛋白（ｉｒｏｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＲＥ－ＢＰ）在细胞内铁代谢平衡的转录后调...     

一种水稻酰基辅酶A结合蛋白cDNA的鉴定

对一水稻ｃＤＮＡ克隆（Ｒ１９０８）的分析表明,其可能编码水稻酰基辅酶Ａ结合蛋白（ａｃｙｌ－ＣｏＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＡＣＢＰ）。Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交显示水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ）基因组中仅有一个该基因的拷贝。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析表明水稻的ＡＣＢＰ基因在水稻的根、茎、叶、叶鞘、黄化苗和幼穗中皆表达,而以黄化苗的绿苗叶鞘中的表达高于绿苗叶片。     

丙型肝炎病毒与宿主细胞蛋白的相互作用及其意义

蛋白－蛋白的结合是病毒与宿主细胞相互作用的分析基础。随着酵母双杂交系统等研究蛋白－蛋白结合新技术的广泛应用,人们对病毒复制的本质及致病机制有了更新的认识,本文综述了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白Ｃ及非结构蛋白５Ａ（ＮＳ５Ａ）与宿主蛋白相互作用的进展,并讨论了它们在ＨＣＶ致病中的作用。     

细胞周期蛋白（cyclin）D在鼻咽癌中的表达及功能初？…

探讨了细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ在ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）潜伏膜蛋白１（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ１）阳性和阴性表达的鼻咽癌细胞５系中的表达特征,利用流式细胞仪同时从ＤＮＡ及蛋白质水平初步分析了ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１在鼻咽癌细胞系中的功能。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹的结果发现ｃｙｃｌｉｎｈ Ｄ１在ＣＮＥ－ＬＭＰ１中过表达,在ＨＮＥ１中表达较弱;Ｃｙｃｌｉ     

G蛋白－肌醇磷脂途径及其与高血压的关系

作为第二信使的三磷酸肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌ－１,４,５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＩｎｓＰ３）主要经２种途径形成：Ｇ蛋白偶联受体和酪氨酸激酶偶联受体。两类受体激活各自相应的磷脂酶Ｃ（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ,ＰＬＣ）而水解磷脂酰肌醇－４,５－二磷酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ－４,５－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ＰｔｄＩｎｓ４．５Ｐ２）形成ＩｎｓＰ３和二酯酰甘油（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ,ＤＧ）。ＩｎｓＰ３形成后动员储存钙和促进外源性钙内流。近年来的研究证实,Ｇｑ是调节ＰＬＣ－β１活性的特导性Ｇ蛋白,Ｇｑ系列α亚单位包括Ｇαｑ、Ｇα１１、Ｇα１４、Ｇα１５和Ｇα１６。高血压的重要病理基础是动脉血管壁的痉挛和增殖,许多血管活性物质可以促使血管平滑肌细胞的收缩和增生,同时伴有细胞内ＩｎｓＰ３产生增加．但高血压并不能造成Ｇｑ量的持续改变。     

植物LEA蛋白的结构与功能

植物ＬＥＡ蛋白的结构与功能汤学军，傅家瑞（中山大学生命科学学院，广州５１０２７５）关键词ＬＥＡ蛋白，结构，功能种子发育是高等植物生活史中的重要阶段。在种子（胚胎）发育后期会产生一些小分子特异多肽，即ＬＥＡ蛋白（ｌａｔｅ－ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ－ａ...     

LIM蛋白KyoT2与人类紧密连接蛋白2的相互作用

KyoT是一种LIM结构域蛋白,是以RBP－J为诱饵蛋白通过酵母双杂交系统得到的新分子,KyoT2可以抑制RBP－J介导的转录,以KyoT2为诱饵蛋白,通过酵母双杂交筛选得到了人类紧密连接蛋白2（ZO－2）,的一种新的剪接体ZO－2－i3,序列分析表明,新的剪接体有19个外显子,与已发表序列比较,见ZO－2－i3分子的激酶后区发生了改变,为排除酵母双杂交实验的假阳性,实验首先在酵母中验证KyoT2与ZO－2-i3的体外直接相互作用并得到阳性结果,进而在大肠杆菌中原核表达纯化带有His标签的KyoT2蛋白,使用抗His标签的抗体,通过GST pull-down assay验证KyoT2与ZO－2－i3的体外直接相互作用,也获得阳性结果,并通过酵母实验初步确定了其作用位点,即KyoT2通过LIM2结构域与ZO－2-i3相互作用,本实验验证了KyoT2与Z－2－i3的相互作用,并初步确定其相互作用位点,对探讨KyoT的功能具有重要意义。