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通过N端替换提高木聚糖酶的热稳定性 总被引:4,自引:0,他引:4
以来源于Thermomonospora fusca的耐高温木聚糖酶TfxA和来源于Streptomycesolivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB为亲本,构建出耐热高比活融合木聚糖酶TB,将TB在大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中进行表达并对表达产物的酶学性质进行分析比较。分析表明,融合蛋白TB最适pH值为6.0,最适温度为70℃,较XYNB有大幅度的提高;在热稳定性方面,TB明显优于XYNB,将两种稀释好的酶液分别在80℃和90℃下热处理3min,TB的热稳定性较XYNB提高了6倍左右;TB的pH稳定性为5~9(相对剩余活性在50%以上的pH范围),较XYNB有所下降,但两者的比活性基本不变,保持了亲本XYNB的高比活性。通过同源建模和序列比较,分析了可能影响融合蛋白TB酶学性质的因素,为进一步研究木聚糖酶的结构与功能提供了新的思路。 相似文献
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Xylanase inhibitor protein (XIP)型木聚糖酶抑制蛋白对大部分GH10、GH11家族的真菌木聚糖酶具有抑制作用,但是却不能抑制细菌来源和植物自身所产生的木聚糖酶。XIP型木聚糖酶抑制蛋白对木聚糖酶的抑制作用主要是通过模拟底物接触酶的活性位点,迅速阻塞底物进入活性位点区域的通道。然而,在对XIP型木聚糖酶抑制蛋白具有抗性的GH10和GH11木聚糖酶晶体结构中,连接二级结构的Loop构象严重阻碍了XIP型木聚糖酶抑制蛋白的抑制功能。与对XIP型木聚糖酶抑制蛋白敏感的木聚糖酶相比,氨基酸残基的插入突变导致抗性木聚糖酶的Loop具有明显的凸出构象;而在GH11家族抗性木聚糖酶中,"拇指"结构中部分氨基酸的替换致使XIP型木聚糖酶抑制蛋白与"拇指"结构无法形成稳固的氢键和疏水建,从而削弱XIP的抑制作用。 相似文献
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顶青霉D15木聚糖酶提纯及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
经硫酸铵分级沉淀,BiO-gelP60凝胶过滤,和DEAE离子交换层析,从顶青霉D_15的麦麸培养物中提纯,得到4个具有凝胶电泳纯的木聚糖酶组分D_(x1)、D_(x2)、2_(x3)、D_(x4)、SDS—凝胶电泳法测得各个组分的分子量是:D_(x1),76000;D_(x2),4300;D_(x3),32500;D_(x4),29500。圆盘等电聚焦电泳法测得4个组分的等电点分别为4.50、5.70、5.30和5.20。热处理60分钟,D_(x1)、D_(x2),D_(x3)、D_(x4)的半失活温度分别为51.7℃、50.8℃、54.6℃和55.6℃。D_(x1)、D_(x4)在pH3.6—6.6稳定,D_(x2)和D_(x3)则在pH2.4—6.0稳定。各组分的A_(280)(1cm(?)mg/m1)分别是:D_(x1),0.97;D_(x2),1.46;D_(x3),0.98和D_(x4),1.07。 相似文献
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木聚糖酶分子的结构区域 总被引:6,自引:0,他引:6
多数木聚糖酶分子中含有多个功能区域,这些区域包括催化区、纤维素结构区、木聚糖结构合区、连接序列、重复序列、热稳定区、Cellulosome-Docking区及其它未知功能的非催化区, 相似文献
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产木聚糖酶厌氧真菌菌株筛选及产酶培养条件研究* 总被引:4,自引:0,他引:4
从12株分离自反刍动物瘤胃及粪样的厌氧真菌中筛选到一株木聚糖酶高产菌,编号为A4,初步鉴定为Neocallimastix属菌。以稻草秸、玉米秸、花生秸、滤纸片段为发酵底物,经39℃厌氧培养,A4菌产生的木聚糖酶活分别为14.31U/mL、11.39U/mL、6.99U/mL和13.38U/mL。对A4菌产生木聚糖酶的条件进行优化,结果发现,培养基中无细胞瘤胃液浓度对A4菌产生的木聚糖酶活无显著影响;但酵母膏浓度从1.0g/L降至0.5g/L后,A4菌产生的木聚糖酶活显著下降(P<0.05)。 相似文献
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本文对项青霉D_(1(?))的四个木聚糖酶组分的特性进行了研究。木聚糖酶组分D_(x1)、D_(x4)的最佳反应pH为4.8,最适温度分别为40℃和50℃,D_(x2)和D_(x3)的最适pH和温度都分别为pH4.2和50℃。Ag~(++)、Hg~(++),Cu~(++)对四个组分的活性均有强烈的抑制作用,SDS也能产生明显的抑制效果。Mn~(++)对D_(x1)具有促进作用。D_(x1)、D_(x4)在以燕麦木聚糖为底物时活性最高,其Km值分别为11.7(mg/ml)和8.3(mg/ml),D_(x2)和D_(x3)则分别在水解红麻杆木聚糖和落叶松木聚糖时活性最强,Km值分别为8.4(mg/ml)和6.3(mg/ml)。水解燕麦木聚糖,D_(x1)的产物主要为木糖,同时带有少量的低聚木糖。D_(x2)、D_(x3)和D_(x4)的产物则包括木糖和较多的低聚木糖。D_(x4)与D_(x2)及D_(x3)之间在水解燕麦木聚糖时存在协同作用关系。 相似文献
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黑曲霉A3木聚糖酶固体发酵研究 总被引:19,自引:3,他引:19
筛选了一株高产木聚糖酶的黑曲霉A3菌株,研究了其在固体培养基中的发酵条件。该菌最适培养条件为:起始pH4.6。28℃,1ml孢子悬液接种量,蔗渣粉:麸皮为1.5:1,发酵3天,木聚糖酶活力可达5147IU/g培养基干重。氮源组成,温度、pH及发酵时间对曲中木聚糖酶和纤维素酶的比例有较大影响。与液体发酵相比,粗酶的最适反应温度均为55℃,最适反应pH值分别为4.6和4.2,在不同温度下保温1h,测得 相似文献
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木聚糖是自然界中含量最丰富的半纤维素,占木质纤维素生物质总量的25%~35%,具有转化合成高值化产品的巨大潜力。通过对木聚糖进行定向酶解,可以获得木寡糖、木糖和阿魏酸等多种功能组分。其中,木糖和阿魏酸可以作为多种可再生燃料和化学品的前体物质被进一步转化为高值化产品,进而广泛应用于药品、化妆品、食品等领域。而木糖作为一种碳源,也可以直接用于微生物的发酵。本文首先介绍了木聚糖及其结构组成,分别描述了木聚糖水解酶及其酶解产物,进而系统综述了以木聚糖酶解产物木糖、阿拉伯糖、乙酸、阿魏酸、葡萄糖醛酸为底物生物合成不同燃料、大宗化学品、精细化学品和聚合物等高值化产品的研究进展、存在问题和解决方案,最后对木聚糖的酶解和高值化转化进行了展望。 相似文献
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产木聚糖酶菌株的选育及其液体发酵条件 总被引:21,自引:0,他引:21
从土壤中筛出一株生长快产木聚糖酶活力较高的黑曲霉(Aspergillus niger)C—2菌株,经紫外线和甲基磺酸乙酯诱变,获得一突变株An—76,其生长减缓,孢子形成能力减弱,产生的术聚糖酶和β—木糖苷酶活力分别可达353.61U/ml和4.51U/ml。测定了An—76的正常产酶曲线,研究了麸皮、氮源、碳源及半纤维素浓度对产酶的影响。最适培养条件为:起始pH6.0、28℃、96h。酶的最适作用条件为50—55℃,pH4.8,在pHl.2—11.4范围内稳定。酶的热稳定性较差,55℃保温1小时,剩余活力为40%。只有在含木糖苷类物质存在时,An—76才大量合成木聚糖酶。 相似文献
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芽孢杆菌木聚糖酶的发酵条件研究 总被引:20,自引:3,他引:17
本文研究了芽孢杆菌L23产木聚糖酶的时间曲线,碳源种类和浓度,添加物,发酵起始ph以及接种量对产酶的影响。该菌经37℃培养50小时,酶活力为30IU/ml,酶最适反应温度为57℃,最适pH值为7.0。 相似文献
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