小鼠淋巴细胞转化微量试验方法的研究

本文报导了小鼠淋巴细胞转化的微量试验方法及其最适转化条件。本实验采用微量培养技术及~3H-TdR掺入法,测定了小鼠脾细胞对 PHA、ConA 的转化水平,并探讨了培养液成分,有丝分裂素浓度、~3H-TdR 掺入时间等因素对小鼠脾细胞转化的影响,获得了比较稳定可靠的实验结果。     

双标记RC对KHT肉瘤的细胞周期分析(英文)

本文利用测定G_1期和中S期细胞内放射性变化的方法(RC)测出小鼠KHT肉瘤的细胞周期时相的时间及其变异系数(CV)。腹腔注射~3H-UdR后,8小时再注射~(125)I-UdR,按2小时间隔取肿瘤制成单个细胞悬液,DNA特异性染料色霉素A_3染色,根据细胞DNA含量用FACS荧光激活细胞分类器分离出纯的G_1期和中S期细胞,分别测定细胞中~(125)I和~3H的放射性,用多室数学模型根据每个细胞内~(125)I和~3H的放射性变化,计算出TG_1为6.7小时,Ts为9.0小时,TG2M为3小时,生长指数为1。     

微核形成与细胞周期关系的初步研究Ⅰ.人体全血辐射处理后不同放置和培养时间对微核率的影响

本报告应用γ-射线诱发微核、放射性自显影等技术分析细胞周期,研究淋巴细胞微核形成与细胞周期间的定量关系。主要结果如下:(1)经400rad照射的静脉血,在室温下放置1.5小时,或在37℃下放置5小时,此时淋巴细胞属G_0期。和照射前相比,两组微核率均显著增加(P<0.01)。(2)照射静脉血经pHA刺激培养23—24小时收获细胞,此时转化淋巴细胞应属G_1期,分别计数转化和未转化(G_0期)淋巴细胞微核,与照射前未培养淋巴细胞相比有显著增加(P<0.01)。(3)400rad照射静脉血培养72小时后,淋巴细胞微核较培养前增加14.5倍。根据放射性自显影等细胞周期分析结果表明,微核在细胞周期各阶段均可形成。     

~(60)Coγ-线对人血淋巴细胞DNA和RNA合成能力的影响

T例人血在体外接受~(60)Coγ-_线照射后进行培养,用~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)和~(14)C-尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)作掺入实验,以反映DNA和RNA的合成能力。应用滤膜法收获细胞,液体闪烁计数器测定双标记样品,发现γ-线对DNA和RNA合成的影响有一定规律,即随照射剂量的增加,~3H和~(14)C掺入的放射性呈指数下降。经统计处理分别得到照射剂量和~3H-TdR、~(14)C-UR掺入的放射性计数的对数值两变量间的直线迥归方程。10拉德的照射导致~3H—TdR和~(14)C-UR掺入的放射性计数显著性减少,RNA比DNA合成受抑更明显。     

中华大蟾蜍(Bufo bufo gagarizans)血淋巴细胞的体外培养及其转化

本文报道了中华大蟾蜍血淋巴细胞的培养及其在植物血球凝集素(PHA)的刺激下所引起的转化,并初步查明了转化的淋巴细胞的S期、G_2期所占时间。用氚标记放射自显影手段测定了细胞的转化率。用姐妹染色单体区分着色的方法决定细胞的分裂次数。实验结果表明,在新鲜血液中有0.1—0.2％的白细胞具有合成DNA的能力。培养3天后,淋巴细胞转化率为14.8％,第5天达48％。培养的第6天有6—10％为第2次分裂。在秋水仙素处理3小时的情况下,有丝分裂指数为7％,延长处理时间至10—15小时,则平均达10％。最高有丝分裂指数为29％。转化淋巴细胞的S期为16小时,G_2期为3小时。     

~(60)Co γ线对肿瘤病人T、B淋巴细胞转化过程中三种大分子合成的效应

应用植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)激活淋巴细胞,以氢-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)、碳一尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)和碳-缬氨酸作掺入实验,以分别反映T、B淋巴细胞转化过程中的DNA、RNA和蛋白质的合成能力。共测定了50例肿瘤病人,与正常人比较:T淋巴细胞转化能力明显降低,B淋巴细胞转化能力显著增高。经过一个疗程的~(60)Co照射后T细胞转化比照前又显著降低,B细胞转化比照前又显著增高,三种大分子合成都表现同样的规律,反映了辐射抑制T淋巴细胞DNA和RNA合成,相反地刺激了B淋巴细胞的DNA、RNA和蛋白质的合成。以上的辐射效应随照射剂量和照射野的增加而愈益明显。     

单核细胞促进人外周血淋巴细胞离体增殖的自由基机理

在人外周血淋巴细胞培养体系中加入不同数量的单核细胞共同培养,以~3H-TdR掺入法和细胞色素C还原法分别测定淋巴细胞增殖能力和培养介质中O_2~-浓度;加入NADPH氧化酶抑制剂DPI实验性地下调O_2~-浓度,观察淋巴细胞增殖能力的变化。结果显示加入单核细胞可增加培养介质中O_2~-浓度,进而促进淋巴细胞增殖,提示O_2~-浓度的升高是淋巴细胞和单核细胞共培养体系中淋巴细胞增殖的重要因素。     

应用~3H-胸腺嘧啶核苷测定血淋巴细胞转化的方法

本文介绍了应用微量血液测定DNA合成的方法:0.1毫升肝素抗凝血液灌入3毫升含PHA的Fagle’s生长培养液中,培养54小时后注入~3H-TdR 0.6微居里,再培养16小时,吸弃上清液,沉淀用生理盐水洗涤两次,5％三氯醋酸洗一次。然后沉淀加0.5毫升5％三氯醋酸置90℃水浴15分钟,离心后吸取上清液0.2毫升加到5毫升闪烁液中进行测量。闪烁液配方:PPO 3克,POPOP 0.4萘克、110克、二氧六环1000毫升。10例健康人血平均~3H-TdR掺入率为10.8％。     

转化细胞及腹水癌细胞对生长调节因子敏感性的研究

 本文~3H-TdR参入细胞DNA为指标研究了EGF等生长调节因子对小鼠腹水癌细胞DNA合成的影响,发现不同癌细胞对EGF等生长因子的敏感性有所差异,考虑到这也许与肿瘤细胞自身特性如恶性度有关。为了进一步探讨恶性度与这一敏感性是否相关,我们观察并比较了C_3H10T1/2CL_8(一种来源于鼠胚的正常成纤维细胞,简称NC_3H_(10)及转化的C_3H_(10)T1/2CL_8(用~3H-TdR转化的上述细胞,简称TC_3H_(10))对EGF等生长因子的敏感性。实验证明,细胞恶性转化后,对EGF的敏感性明显降低,~3H-TdR参入率降至原先的1/4以下。用DBcAMP作用于NC_3H_(10)和TC_3H_(10)均能抑制~3H-TdR参入DNA并可抑制EGF诱导的~3H-TdR参入作用。因此,我们认为,有关物理的致癌因素如放射性同位素,像生物、化学的致癌因素一样,亦能引起其转化细胞对外源性生长调节因子敏感性的改变。     

恶性转化的成纤维细胞表皮生长因子受体的研究

本文用受体的放射性配基结合分析方法观察了C_3H小鼠胚胎成纤维细胞C_3H_(10)T1/2 CL8(简称NC_3H_(10))和~3H-TdR恶性转化的C_3H_(10)T1/2CL8(简称TC_3H_(10))的表皮生长因子受体(EGFR)。结果表明细胞恶性转化前后的EGFR都存在高亲和力和低亲和力两种结合位点,细胞恶性转化后能结合表皮生长因子的EGFR结合位点减少,Western blotting和受体的亲和交联分析表明EGFR的分子量为170kD,是单链多肽。     

三尖杉酯碱对白血病L-1210细胞杀伤动力学研究 Ⅰ.放射自显影观察

以放射自显影的方法研究了三尖杉酯碱对小鼠L-1210白血病细胞的杀伤动力学。三尖杉酯碱20微克/只腹腔注入后3小时,部分腹水细胞出现明显的核损伤,如核碎裂,而胞质的损伤则不明显。以~3H-TdR脉冲标记后0.5小时腹腔注入三尖杉酯碱20微克/只,损伤的标记细胞在给药后5小时为26.1%,损伤的非标记细胞占11.9%,标记指数也随给药而逐时下降,到24小时由对照的28.9%下降到4.6%。给药后3～9小时有丝分裂指数明显下降。以~3H-TdR进行脉冲标记后,用秋水仙酰胺阻断,再给三尖杉酯碱30微克/只,观察标记有丝分裂指数的变化,发现药物强烈抑制S期细胞进入M期。药物杀伤结合秋水仙酰胺抑制实验证明,给药时正处于M期的细胞仍可继续完成分裂,而G_3期细胞进入M期明显受到抑制。连续16小时腹腔注射5微居里/只后,不标记的G_0期细胞占52.3%,此时注射三尖杉酯碱后5小时G_0期细胞的损伤达19.7%。体内、体外试验发现三尖杉酯碱对~3H-TdR、~3H-L-门冬酰胺的参入有明显抑制,在给药后0.5小时即下降至最低点,并持续12～48小时才恢复正常。药物对~3H-TdR参入的抑制与细胞的平均标记颗粒数的减少存在平行关系。根据以上结果认为三尖杉酯碱系属细胞周期非特异性药物,但对S期细胞杀伤较明显。     

甲2巨球蛋白对辐照细胞的保护效应

用~3H—TdR掺入办法观察电离辐射对培养的人成纤维细胞的影响。在0—500cGy钻-60γ射线照射剂量范围内,细胞~3H-TdR掺入计数与照射剂量呈线性关系。y=33745.4e~(-0.0036×)。低浓度α_2M对细胞~3H-TdR掺入没有影响,高浓度α_2M能抑制细胞~3H-TdR掺入。4×10~5细胞经钻-60γ射线500cGy照射后加α_2M制剂,细胞~3H-TdR掺入计数与不照射对照组相比有明显升高(P<0.05)。在照射前加α_2M制剂与对照组相比无明显差别。     

三尖杉酯碱对白血病L-1210细胞杀伤动力学研究 Ⅰ.放射自显影观察

以放射自显影的方法研究了三尖杉酯碱对小鼠L-1210白血病细胞的杀伤动力学。三尖杉酯碱20微克/只腹腔注入后3小时,部分腹水细胞出现明显的核损伤,如核碎裂,而胞质的损伤则不明显。以~3H-TdR 脉冲标记后0.5小时腹腔注入三尖杉酯碱20微克/只,损伤的标记细胞在给药后5小时为26.1%,损伤的非标记细胞占11.9%,标记指数也随给药而逐时下降,到24小时由对照的28.9%下降到4.6%。给药后3～9小时有丝分裂指数明显下降。以~3H-TdR 进行脉冲标记后,用秋水仙酰胺阻断,再给三尖杉酯碱30微克/只,观察标记有丝分裂指数的变化,发现药物强烈抑制S 期细胞进入M 期。药物杀伤结合秋水仙酰胺抑制实验证明,给药时正处于M 期的细胞仍可继续完成分裂,而G_2期细胞进入M 期明显受到抑制。连续16小时腹腔注射5微居里/只后,不标记的G_0期细胞占52.3%,此时注射三尖杉酯碱后5小时G_0期细胞的损伤达19.7%。体内、体外试验发现三尖杉酯碱对~3H-TdR、~3H-L-门冬酰胺的参入有明显抑制,在给药后0.5小时即下降至最低点,并持续12～48小时才恢复正常。药物对~3H-TdR 参入的抑制与细胞的平均标记颗粒数的减少存在平行关系。根据以上结果认为三尖杉酯碱系属细胞周期非特异性药物,但对S 期细胞杀伤较明显。     

~(60)Coγ-线对DNA、RNA、蛋白质合成代谢的效应

人血在体外受~(60)co γ-线照射后,用~3H-TdR、~(14)C-UR、~(14)C-缬氨酸和~3H-亮氨酸作掺入实验,分别反映DNA、RNA和蛋白质的合成能力。结果说明γ线对三种大分子合成的影响有一定规律性,即随剂量增加,掺入的放射性呈指数下降,10拉德导致~3H-TdR和~(14)C UR掺入放射性显著减少,四种标记化合物掺入下降的趋势基本一致。     

辐射对三种类型的淋巴细胞DNA及RNA合成能力的影响

正常人外周血淋巴细胞,包含不同的亚群,分别执行细胞免疫、体液免疫及维持免疫平衡等重要功能。辐射损伤后免疫功能受抑制。利用同位素双标记技术,以~3H-TdR及~(14)C-UR示踪,观察不同剂量~(60)Co-Υ线照射后,血中三种不同类型的淋巴细胞,在体外培养转化过程中DNA及RNA的合成能力,比较两种标记化合物在不同类型淋巴细胞中的掺入率;并依据辐射对三种不同类型淋巴细胞中,DNA及RNA两种生物大分子合成的受抑程度,反映血     

PHA刺激对淋巴细胞修复DNA损伤的影响

本文报道PHA刺激对淋巴细胞DNA修复的影响的实验结果。以254nm波长的UV照射细胞(30J/m~2)引起DNA损伤,以[~3H]-TdR掺入实验测定非程序DNA合成,用超微量法测定细胞的NAD~+含量,并以[~(35)S]-蛋氨酸掺入,聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影术测定蛋白质生物合成,其结果如下: (1)在被PHA转化的淋巴细胞内非程序DNA合成,随PHA刺激的时间加长而增高;PHA处理淋巴细胞42小时,合成的速率约增加4倍;(2)在转化的淋巴细胞内,非程序DNA合成及程序DNA合成都被N-乙基马来酰亚胺(一种DNA聚合酶α的抑制剂)抑制,表明在DNA修复过程中DNA聚合酶α可代替DNA聚合酶β发挥作用; (3)UV照射后,被PHA刺激的淋巴细胞内NAD~+含量大约减少43.2％,而对照淋巴细胞内NAD~+的含量只减少25％,似乎说明PHA刺激能促进淋巴细胞内的P-ADP-核糖化作用;(4)在受PHA刺激72小时的淋巴细胞内有多种蛋白质合成,这些细胞在UV照射后以含10μg/ml嘌呤霉素的培养基培养,则非程序DNA合成被明显抑制(P<0.01),这提示DNA修复是一需要蛋白质合成的过程。此外,在受UV照射后10-45小时的淋巴细胞内,诱导产生一种分子量大约34000道尔顿的蛋白质。 上述结果表明,当PHA使淋巴细胞从静止状态转化为增殖状态时,有多种酶被诱导。由于这些酶,如DNA聚合酶α及P-ADP-核糖聚合     

恶性转化增加细胞对细小病毒的敏感性

在离体培养人细胞中,细小病毒对恶性转化的细胞有明显的抑制作用。正常人胎肾和胃细胞对细小病毒H-1呈抗性,但它们被理化致癌因子转化后,对细小病毒敏感。小鼠成纤维细胞C_3H10T1/2被~3H-TdR转化后对细小病毒H-1的敏感性进一步提高。另外,细小病毒对肿瘤细胞的抑制作用还与细胞的分化状态有关,低分化型胃癌细胞MKN45比分化型胃癌细胞MKN28对H-1的杀伤作用更敏感。     

介绍细胞共培养的两种方法

本文设计了两种共培养装置:微孔底膜套皿和循环培养,观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉平滑肌细胞(PASM)在上述装置中的生长情况,并用套皿法观察了两者共培养对~3H-TdR掺入的影响。结果发现,PAEC和PASM在上述装置中生长良好,两者共培养时,PAEC的~3H-TdR掺入明显降低(与对照组相比p<0.05),而PASM的~3H-TdR掺入明显升高(与对照组相比p<0.01)。上述结果表明:本文设计的两种装置可用于细胞共培养,以研究细胞间的相互调节关系。     

~(60)钴γ线对骨髓、脾脏造血细胞DNA和RNA合成能力的影响

~(60)钴γ线照射离体的人体骨髓细胞及豚鼠骨髓、脾脏细胞,观察~3H-TdR及~(14)C-UR放射性渗入受抑的情况。实验发现辐射引起渗入活性下降随剂量增高而愈剧,骨髓细胞比脾脏细胞敏感,DNA合成比RNA合成代谢敏感。10拉德剂量导致入骨髓细胞DNA合成能力显著下降。200拉德引起豚鼠骨髓细胞放射性渗入降低48％。     

增殖的淋巴细胞中DNA合成和DNA含量的分析

体外培养受PHA刺激的人淋巴细胞经~3H-TdR参入0、0.5、2、4、7和17小时后,放射自显术表明标记指数为0%、1.90%、9.15%、13.14%、15.01%和30.13%。未标记细胞的福尔根光密度为15.42、15.45、14.88、13.77、13.20和12.94。DNA分布直方图显示部分未标记细胞介于2C—4C,表明S期细胞的DNA合成可能是不连续的。对同位素参入17小时的标记细胞连续进行两项测量表明,这些细胞的银粒光密度相差悬殊,但其DNA含量均为2C—4C。细胞的DNA合成率随其DNA含量而增高。