miR-101a在乙型肝炎病毒相关性肝纤维化患者中的表达及对肝星状细胞的影响

摘要 目的：探究miR-101a在乙型肝炎病毒（HBV）相关性肝纤维化患者中的表达及对肝星状细胞（HSC）的影响。方法：根据肝纤维化程度将HBV相关性肝纤维化患者进行分组（S0组、S1组、S2组、S3组和S4组）,健康受试者作为健康对照组。通过RT-PCR检测肺组织中miR-101a的表达,并分析miR-101a与疾病严重程度的关系。使用重组人TGF-β1处理人肝星状细胞系LX-2,并对LX-2细胞转染阴性对照 miRNA模拟物（NC-mimic组）、miR-101a模拟物（miR-101a-mimic组）、阴性对照 miRNA抑制剂（NC-inhibitor组）或miR-101a抑制剂（miR-101a-inhibitor组）,未转染的细胞作为对照组,然后通过RT-PCR或蛋白质印迹检测激活HSC及ECM产生的关键基因（α-SMA、COL1A1、COL1A2和COL3A1）和蛋白（a-SMA、collagen I和collagen III）的表达水平。将SD大鼠随机分为4组：对照组、CCl4组、Ad-control组和Ad-miR-101a组,对大鼠腹腔注射CCl₄（1 mL/kg体重）诱导肝纤维化模型,每周3次,共4周。然后将5×10⁹感染单位的携带miR-101a的重组腺病毒（Ad-miR-101a）或对照腺病毒（Ad-control）经尾静脉注射到大鼠中。4周后,通过苏木精和伊红（H＆E）和Masson三色染色评估肝脏形态和纤维化,通过免疫组化染色评估肝脏α-SMA、E-cadherin、vimentin、Smad4或p-Smad2/3的表达。结果：与健康受试者相比,HBV相关肝纤维化患者肝组织中miR-101a的表达水平明显降低,并且miR-101a的表达水平随着患者的严重程度升高而降低（P<0.05）。与未处理的细胞相比,miR-101a在TGF-β1处理的LX-2细胞中以浓度和时间依赖性方式显著下降（P<0.05）。与未处理的细胞相比,5 ng/mL TGF-β1处理LX-2细胞中的α-SMA、COL1A1、COL1A2和COL3A1 mRNA表达水平及a-SMA、collagen I和collagen III 蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。与对照组相比,miR-101a-mimic组的α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1和TGF-β1 mRNA和a-SMA、collagen I、collagen III、TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白表达均下调（P<0.05）。与对照组相比,Ad-miR-101a组大鼠肝组织中E-cadherin的表达上调,但α-SMA、vimentin、Smad4和p-Smad2/3的表达下调（P<0.05）;Ad-miR-101a组大鼠的肝组织形态基本恢复正常,肝组织纤维化程度低于CCl₄组。结论：miR-101a水平与乙型肝炎病毒相关性肝纤维化严重程度相关,上调miR-101a可能通过抑制HSC的活化及上皮间质转化发挥抗纤维化作用。     

复方猴头胶囊联合替普瑞酮对胃溃疡患者胃肠激素、炎性因子及胃窦黏膜TGF-β、Smad3表达的影响

摘要 目的：探讨复方猴头胶囊联合替普瑞酮对胃溃疡患者胃肠激素、炎性因子及胃窦黏膜转化生长因子-β（TGF-β）、信号转导蛋白3（Smad3）表达的影响。方法：选取2017年1月~2020年1月期间我院收治的胃溃疡患者120例,按信封抽签法分为观察组和对照组各60例。两组均给予艾司奥美拉唑口服,在此基础上对照组给予替普瑞酮治疗,观察组给予复方猴头胶囊联合替普瑞酮治疗。观察两组治疗前后的胃肠激素、炎性因子及胃窦黏膜TGF-β、Smad3表达的变化情况。比较两组溃疡愈合情况、不良反应发生率和复发率。结果：与对照组相比,观察组溃疡愈合总有效率更高（P<0.05）。两组治疗后胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、C-反应蛋白（CRP）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平均较治疗前下降,且观察组低于对照组（P<0.05）。治疗后,两组TGF-β、Smad3表达较治疗前降低（P<0.05）,且观察组TGF-β、Smad3表达低于对照组（P<0.05）。观察组复发率明显低于对照组（P<0.05）,但两组不良反应发生率比较无明显差异（P>0.05）。结论：复方猴头胶囊联合替普瑞酮能明显改善胃溃疡患者胃肠激素、炎性因子水平,降低胃窦黏膜中TGF-β、Smad3的表达,促进溃疡愈合,同时安全性良好,患者复发率低。     

鸢尾素对心肌梗死后大鼠心房颤动和心房间质纤维化的影响

摘要 目的：探讨鸢尾素对心肌梗死后大鼠心房颤动和心房间质纤维化的影响。方法：通过结扎左前降支冠状动脉（LADCA）建立急性心肌梗死（MI）大鼠模型,大鼠每天腹腔注射100 μg/kg的鸢尾素1次,共治疗4周。通过超声心动图检查左室舒张末期直径（LVEDD）、左室收缩末期直径（LVESD）、左室射血分数（LVEF）、左室缩短分数（LVFS）。应用苏木精-伊红（HE）染色和Masson三色染色评估大鼠心肌形态和纤维化情况。蛋白质印迹分析检测TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、MMP9、TIMP-1、collagenⅠ、collagenⅢ、NLRP3、Caspase 1和IL-1β的表达。结果：与模型组相比,鸢尾素组大鼠的LVEF和LVFS升高,而LVEDD和LVESD降低（P<0.05）;房颤诱发率和房颤持续时间显著降低（P<0.05）;心肌形态明显改善,纤维化面积显著降低（P<0.05）;TGFβ1、p-Smad2/3、collagenⅠ、collagenⅢ和MMP9的蛋白表达水平显著降低,TIMP1的蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;NLRP3炎性体、cleaved-caspase-1和IL-1β的表达水平显著降低（P<0.05）。结论：鸢尾素可显著改善心肌梗死动物模型的心脏功能,抑制心肌纤维化和房颤形成,具有较高的临床应用前景。     

LINC00472参与TGF-β1诱导的HK-2细胞系纤维化和上皮间充质转化

摘要 目的：探讨长链非编码RNA LINC00472在肾纤维化细胞模型中的表达及其在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化和上皮间充质转化（EMT）中的功能作用。方法：使用重组人TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）纤维化和EMT,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中纤维化相关基因和LINC00472的mRNA表达水平,通过Western blot免疫印迹法检测细胞中纤维化相关基因的蛋白表达水平,通过划痕实验评估LINC00472表达对HK-2细胞迁移能力的影响。结果：TGF-β1能成功诱导HK-2细胞发生纤维化和EMT,并剂量和时间依赖性地抑制LINC00472的表达（P<0.05）。抑制LINC00472进一步促进TGF-β1诱导的Fibronectin和Vimentin上调,以及E-cadherin下调（P<0.05）;而过表达LINC00472则能逆转TGF-β1对纤维化相关基因的诱导作用（P<0.05）。此外,抑制LINC00472能进一步增强TGF-β1诱导的HK-2细胞迁移（P<0.05）,而上调LINC00472则使细胞迁移受到抑制（P<0.05）。结论：LINC00472在TGF-β1诱导的肾纤维化细胞模型中呈低表达,其表达水平的降低能促进细胞纤维化和EMT过程。     

胎盘间充质干细胞治疗小鼠烫伤愈合的相关研究

目的:观察胎盘间充质干细胞对TGF-β1/Smad信号通路的调控作用,探讨胎盘间充质干细胞对烫伤愈合及瘢痕形成的影响。方法:构建小鼠烫伤模型,注射人胎盘间充质干细胞(hPMSCs),荧光显微镜观察小鼠创伤皮肤组织中hPMSCs细胞的存活情况;HE和Masson染色观察小鼠创伤皮肤的变化;Western blot检测观察创伤皮肤TGF-β1、p-Smad3、Smad7、α-SMA、collagen I、Collagen III蛋白表达变化。结果:注射hPMSCs细胞后,小鼠创伤面积逐渐减小,创伤愈合率逐渐增加;hPMSCs细胞分布在小鼠创伤皮肤组织中,存活状况较好。进一步研究发现烫伤模型组皮肤表层细胞受损脱落,真皮层组织疏松,毛囊、皮脂腺等附属器坏死,可见明显的毛细血管扩张,并伴有炎性细胞渗出,同时可见大量的成纤维细胞增生和胶原纤维形成;注射hPMSCs细胞治疗后,病理改变、纤维增生和胶原形成明显减轻;此外,烫伤模型组创伤皮肤组织中TGF-β1、p-Smad3表达明显上调,Smad7蛋白表达明显下调,α-SMA、collagen I、Collagen III表达明显上调。经hPMSCs细胞治疗后,TGF-β1、p-Smad3蛋白表达明显下调,Smad7蛋白表达明显上调,α-SMA、collagen I、Collagen III蛋白表达明显下调。结论:胎盘间充质干细胞可能通过抑制TGF-β1/Smad信号通路,发挥促进烫伤愈合且抑制瘢痕形成的作用。     

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨扶正化瘀胶囊联合恩替卡韦分散片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效机制

摘要 目的：基于转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smads信号通路探讨恩替卡韦分散片联合扶正化瘀胶囊治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效机制。方法：纳入新疆医科大学第一附属医院2020年4月~2022年1月期间收治的慢性乙型肝炎肝纤维化患者104例,将患者根据随机数字表法分为对照组和观察组,例数各为52例。在常规治疗的基础上,对照组接受恩替卡韦分散片治疗,观察组接受扶正化瘀胶囊联合恩替卡韦分散片治疗。对比两组肝功能指标、肝纤维化指标、TGF-β1/Smads信号通路相关指标和影像学指标变化情况。结果：治疗24周后,两组丙氨酸氨基转移酶 （ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平均下降,且观察组的下降程度较对照组更大（P<0.05）。治疗24周后,两组Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、透明质酸（HA）水平均下降,且观察组的下降程度较对照组更大（P<0.05）。治疗24周后,两组TGF-β1mRNA、Smad2mRNA、Smad3mRNA水平下降, Smad7mRNA水平升高,且观察组的改善程度较对照组更大（P<0.05）。治疗24周后,两组门静脉内径、脾脏厚度均下降,且观察组较对照组更低（P<0.05）。结论：恩替卡韦分散片联合扶正化瘀胶囊治疗慢性乙型肝炎肝纤维化,可改善肝功能,对肝纤维化具有明显的抑制作用,可能与调控TGF-β1/Smads信号通路有关。     

HGF调控β-catenin信号通路对家兔股骨颈骨折修复的影响

摘要 目的：探究HGF调控β-catenin信号通路对家兔股骨颈骨折修复的作用和影响机制。方法：15只股骨颈骨折家兔动物模型随机分为半合成细胞外基质样水凝胶组（sECM组）、sECmM+HGF组和脱钙骨基质组（DBM组）,自体右侧作为实验侧,左侧作为对照侧,对比各组家兔一般情况、骨折愈合质量评分骨痂最大载荷、挠度和刚度、BMSC细胞中BMP-2、TGF-β1、PDGF、bFGF mRNA表达水平和COL-I、Wnt5a、β-catenin和Lef-1蛋白表达水平。结果：术后各周sECM+HGF组和DBM组实验侧骨折愈合质量评分高于对照侧（P<0.05）,且高于同期sECM组实验侧（P<0.05）。术后8周,sECM+HGF组和DBM组实验侧骨痂最大荷载、挠度和刚度均优于对照侧（P<0.05）,且优于sECM组实验侧（P<0.05）。术后2周及4周,sECM+HGF组和DBM组实验侧BMP-2、TGF-β1、PDGF和bFGF表达显著高于对照侧（P<0.05）。且高于同期sECM组实验侧（P<0.05）,术后8周sECM+HGF组和DBM组实验侧BMP-2表达高于sECM组实验侧（P<0.05）。术后2周,sECM+HGF组和DBM组实验侧COL-I表达高于对照侧（P<0.05）。术后2周、4周sECM+HGF组和DBM组实验侧COL-I表达均显著高于同期sECM组实验侧（P<0.05）。术后8周,sECM+HGF组和DBM组实验侧wnt5a表达低于对照侧（P<0.05）且低于sECM组实验侧,β-catenin、Left-1表达显著高于对照侧（P<0.05）,且高于sECM组实验侧（P<0.05）。结论：HGF通过激活Wnt/β-catenin信号通路,上调BMP-2、TGF-β1、PDGF、bFGF和COL-1的表达,显著促进股骨颈骨折家兔的骨折修复过程。     

沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭合并2型糖尿病患者肾功能、神经内分泌激素和TGF-β1/Smad3信号通路的影响

摘要 目的：探讨沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭（CHF）合并2型糖尿病（T2DM）患者肾功能、神经内分泌激素和转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad3信号通路的影响。方法：选择我院2020年5月~2021年5月期间收治的92例老年CHF合并T2DM患者,按照双色球法将患者分为对照组（n=46,接受常规治疗）和研究组（n=46,对照组基础上接受沙库巴曲缬沙坦钠治疗）。对比两组心功能、肾功能、神经内分泌激素、TGF-β1/Smad3信号通路相关指标和不良反应发生情况。结果：治疗12个月后,研究组心输出量（CO）、左心室射血分数（LVEF）高于对照组,左心室舒张末期内径（LVEDD）低于对照组（P<0.05）。治疗12个月后,研究组血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、血尿酸（UA）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、胱抑素C（Cys-C）低于对照组（P<0.05）。治疗12个月后,研究组去甲肾上腺素（NE）、醛固酮（ALD）和血管紧张素II（AngII）低于对照组（P<0.05）。治疗12个月后,研究组Smad7 mRNA高于对照组,Smad2 mRNA、TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沙库巴曲缬沙坦钠用于治疗老年CHF合并T2DM患者,可有效改善患者的心功能、肾功能、神经内分泌激素和TGF-β1/Smad3信号通路相关指标,安全性较好。     

miRNA-27a靶向SPRY2对退变椎间盘血管长入生成作用的影响

摘要 目的：探讨miRNA-27a靶向调控 Sprouty 同源物2（Sprouty Homolog 2, SPRY2）对人髓核细胞系（nucleus pulposus cells, NPCs）诱导人微血管内皮细胞（Human microvascular vascular endothelial cells, HMEC-1）血管生成作用的影响。方法：收集脊柱侧弯和椎间盘退变（Intervertebral disc degeneration, IDD）患者的椎间盘组织分别作为对照组和IDD组,通过miRNA芯片筛选差异表达的miRNA。RT-qPCR和荧光原位杂交实验验证组织中miR-27a的表达水平。慢病毒转染细胞,细胞分为Control组（未转染）;NC组（转染慢病毒空载）;sh-miR-27a组（转染 miR-27a抑制慢病毒）;miR-27a组（转染 miR-27a过表达慢病毒）;SPRY2组（转染 SPRY2 过表达慢病毒）及miR-27a +SPRY2组（转染miR-27a和SPRY2 过表达慢病毒）。RT-qPCR检测髓核细胞中miR-27a和SPRY2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a和SPRY2的靶向关系。将经过不同处理的髓核细胞条件培养基与完全培养基混合培养HMEC-1细胞,Transwell和管腔形成实验检测HMEC-1细胞的侵袭和血管生成能力。免疫荧光和ELISA检测髓核细胞和混合培养基中转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)含量。结果：与对照组椎间盘组织相比,IDD组miR-27a表达明显增加。与NC组相比,SPRY2在sh-miR-27a组中表达升高（P<0.05）,miR-27a组中表达降低（P<0.05）。与NC组相比,miR-27a组HMEC-1细胞侵袭和血管生成能力增强（P<0.05）,TGF-β1表达上升（P<0.05）;SPRY2组HMEC-1细胞侵袭数减少（P<0.05）,管腔样结构未形成。与miR-27a组相比,miR-27a+SPRY2组HMEC-1细胞侵袭和血管生成能力下降（P<0.05）,TGF-β1表达下降（P<0.05）。结论：miRNA-27a通过靶向抑制SPRY2的表达促进髓核细胞诱导HMEC-1细胞成血管能力。     

Pamrevlumab（FG-3019）通过p38 MAPK信号通路调控人Tenon's囊成纤维细胞的增殖、移行和表型转化

摘要 目的：本研究旨在探究Pamrevlumab（FG-3019）对人Tenon''s囊成纤维细胞（HTFs）的增殖、移行和表型转化的影响。方法：应用组织块培养法进行HTFs的原代培养,通过波形蛋白(Vimentin)和细胞角蛋白（Cytokeratin）免疫荧光染色鉴定HTFs。首先将HTFs分为9组：Control组加入等量DMEM作为阴性对照组,其他组加入不同浓度的FG-3019,使其终浓度分别为10、20、50、100、200、300、400、500 μg/mL,通过MTT法检测FG-3019对HTFs的毒性。然后将HTFs分为4组：Control组（加入等量DMEM培养48 h）、TGF-β1组（10 ng/mL的TGF-β1培养48 h）、TGF-β1+FG-3019组（10 ng/mL的TGF-β1和100 μg/mL FG-3019培养48 h）、TGF-β1+FG-3019+anisomycin组（10 ng/mL的TGF-β1、100 μg/mL FG-3019和10 μg/mL anisomycin培养48 h）。通过MTT法和EdU法检测HTFs增殖,通过伤口愈合实验评价FG-3019对HTFs移行的影响通过qRT-PCR或Western blotting检测CTGF、p38 MAPK、p-p38 MAPK、α-SMA、FN和collagen I的表达变化。结果：免疫荧光染色显示,HTFs中波形蛋白阳性表达（98.17%）,细胞角蛋白阴性表达（1.83%）。与Control组相比,200、300、400和500 μg/mL组的HTFs的细胞活力均显著降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比,TGF-β1+FG-3019组的OD_490nm降低了19.64%,增殖指数降低了57.87%,伤口愈合率降低了56.46%（P<0.05）。与TGF-β1组相比,TGF-β1+FG-3019组的α-SMA、FN和collagen I蛋白相对表达量依次降低了70.78%、70.99%和70.04%,CTGF mRNA和蛋白相对表达量分别降低了75.83%和60.73%（P<0.05）,p-p38 MAPK蛋白相对表达量降低了70.22%（P<0.05）。与TGF-β1+FG-3019组相比,TGF-β1+FG-3019+anisomycin组的增殖、移行、表型转化、CTGF mRNA和蛋白相对表达量、p-p38 MAPK蛋白相对表达量均显著增加（P<0.05）。结论：FG-3019部分通过抑制p38 MAPK信号通路来抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖、移行和表型转化。