酶法制备低聚木糖中木二糖的提纯与色谱鉴定

半纤维素经木聚糖酶水解得到混合的低聚木糖,用葡聚糖凝胶柱SephadexG-10层析分离后,出现四个组分峰,经高效液相色谱分析鉴定,其中3号峰为木二糖纯组分峰.结果表明:利用φ2.5 cm×120 cm凝胶柱,以蒸馏水为流动相,流速为10ml/h,在室温下,可以分离出高纯度的木二糖.     

裂褶菌胞内多糖的分离纯化鉴定及其性质

裂褶菌菌丝体用热水提取,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,逆向流水透析,得胞内多糖粗品,经Sephadex A-50、Sephadex G-200柱层析纯化,得胞内多糖纯品,称SPG。纯度经纸层析、Sephadex G-200柱层析、高效液相色谱分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,结果表明SPG为单一均匀组分。 SPG水解物经纸层析、薄层层析分析证实它是由葡萄糖组成的一种葡聚糖结构,SPG的部分水解、酶解、红外光谱、核磁共振氢谱分析表明具有β(1→3),β(1→6)糖苷键。凝胶过滤法测定SPG的分子量约为10万。     

高效液相层析法纯化人胎盘谷胱甘肽硫转移酶

足月分娩的新鲜胎盘组织制成匀浆后,经高速离心、超速离心,谷胱甘肽(GSH)Sepharose 6B亲合层析,Amicon pM-10膜超过滤及高效液相层析,最终经SDS-PAGE鉴定,结果呈现单一亚基区带,其亚基分子量为25000。 根据我们现有高效液相设备条件,用ODS柱代替RadulovicL等报道的特异阴离子柱,用磷酸盐洗脱液代替含谷胱甘肽、二硫苏糖醇及氯化钾的梯度洗脱液,从人胎盘组织成功地制备了谷胱甘肽硫转移酶(GST)纯酶,全过程在15min内完成,保留时间及主峰面积的重复性均较理想,7次实验结果的变异系数为0.2％,最终纯化578.9倍。本研究为各种形式GST的纯化制备提供了一个新的、重复性好、分辨率高及回收理想的简易方法。     

蓝莓多糖BBP3-1的分离及结构分析

采用酶法优化进行水提醇沉得到蓝莓粗多糖.经双氧水脱色、酶解和三氯乙酸正丁醇结合法脱蛋白后通过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和sephacryl s- 300 HR凝胶过滤层析得到蓝莓多糖(BBP3-1).经紫外扫描显示无蛋白、核酸杂质.经高效液相色谱分析,BBP3-1的重均分子量Mw为18...     

长白楤木根、茎、叶水溶性多糖的纯化及组成分析

长白楤木是一种具有药用价值的植物。本实验用热水浸提、醇析、Severge法除蛋白,水相透析得到粗多糖。粗多糖经过DEAE-纤维素柱层析洗脱,再经SephadexG-200葡聚糖凝胶柱层析后,得到4种纯多糖,命名为根(gNaCl)茎(JH2O)茎(JNaCl)叶(YNaCl)。红外光谱和其完全水解的高效液相色谱分析表明,4种多糖不含硫酸基团和乙酰基,具备β-糖苷键以及糖类特征吸收峰。其中,根的NaCl洗脱多糖组分为D-半乳糖醛酸、D-果糖、D-葡萄糖,茎的水洗脱液多糖组分为D-甘露糖、D-葡萄糖,茎的NaCl洗脱多糖组分D-葡萄糖、D-半乳糖,叶的洗脱多糖组分为D-半乳糖醛酸和D-山梨糖。     

小牛胸腺新胸腺活性因子(TAF-Ⅰ)的纯化和鉴定

以小牛胸腺为原料 ,通过匀浆、冻融、超滤、SephadexG 15凝胶过滤、DEAE SephadexA 2 5阴离子交换层析和反相高效液相色谱等步骤 ,分离得到了胸腺活性因子Ⅰ (thymusactivityfactorⅠ ,TAF Ⅰ ) .5 0 0g小牛胸腺组织中纯化得到了 0 92mg胸腺活性因子Ⅰ .经ESI MS质谱鉴定 ,结果显示其分子量为 6 18 8.氨基酸组成分析显示它由Ala、Gly、Glu、Gln、Lys、Ser 6种氨基酸残基组成 .体外生物学活性实验证明 ,TAF Ⅰ能显著促进人外周血淋巴细胞的E 玫瑰花结的形成率和促进小鼠脾淋巴细胞的分裂增殖     

牛脑中神经特异性S-100蛋白的纯化及鉴定

牛脑充分匀浆后经三次硫酸铵分级沉淀,再通过一次DEAE-Sepharose CL-6B层析柱,线性梯度洗脱后共收集4个峰洗脱液。PAGE分析(7.5％凝胶)显示第3峰为单一区带;免疫双扩散证实该洗脱液中蛋白为S-100蛋白。SDS-PAG E分析显示S-100蛋白分子量约为10kD;非还原条件下,凝胶过滤(Sephadex G-75)显示S-100蛋白位于MW为20kD区域。认为该纯化方法简便、快速,可获得较高纯度的S-100蛋白,活性高达1∶128以上,完全能满足进一步研究之用。     

用酒石酸解离棕色固氮菌固氮酶钼铁蛋白获得的含钼铁组分

棕色固氮菌固氮酶钼铁蛋白结晶,经处理先后出现一个与福林试剂呈颜色反应的洗脱峰Ⅰ和一个与茚三酮试剂呈颜色反应的洗脱峰Ⅱ。洗脱峰Ⅰ、Ⅱ均含有钼和铁。钼和铁的洗脱峰位基本上与蛋白或肽的洗脱峰位相符合。 两个洗脱峰中的成分都能激活棕色固氮菌突变株UW45无细胞抽出物的非活性组分Ⅰ,比活分别为17.8和6.8毫微克分子乙烯/分/毫微克原子钼,并能在硼氢化钾存在下自身催化还原乙炔,比活分别为16.9和50.9毫微克分子乙烯/分/毫微克原子钼。 峰Ⅰ与峰Ⅱ的组成不同,峰Ⅰ是一种组分,峰Ⅱ是两种组分的混合物。峰Ⅰ组分是不同于固氮酶钼铢蛋白的一种蛋白质。洗脱峰Ⅰ组分的分子量是5000道尔顿,洗脱峰Ⅱ两种组分的分子量分别是2100和1850道尔顿。经测定,峰Ⅰ组分和峰Ⅱ中分子量为2100道尔顿的组分含有钼、铁。因此,通过酒石酸处理可以从上清液中得到两种含钼铁的组分。这两种组分的红外吸收光谱也是明显不同的。 酒石酸处理后的沉淀再用N-甲基甲酰胺抽提获得的组分,具有恢复棕色固氮菌突变株UW45乙炔还原活性的能力。经纸层析鉴定,与Shah法制备的铁钼辅因子相类似。     

银杏种仁中一种抗氧化活性蛋白的纯化及性质

银杏种仁经破碎,提取缓冲液4℃浸取后离心得上清液。上清液经硫酸铵沉淀,DEAE-52离子交换层析,MonoQ离子交换层析,UltroGelACA-54凝胶过滤层析后,分离得到一种具有抗氧化活性的蛋白。该蛋白经UltroGelACA-54凝胶过滤层析测定分子量为60 kD,经PAGE和SDS-PAGE鉴定均为单一蛋白质条带。SDS-PAGE测定其亚基分子量为10 kD。该蛋白具有一定的还原能力和清除超氧阴离子自由基及DPPH自由基能力,并在30～60℃温度下具有良好的稳定性。     

半枝莲多糖的分离、纯化及其理化性质

唇形科植物半枝莲全草的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析得纯品半枝莲多糖(S-BP)。凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳证明为单一均匀成分。SBP的比旋度为[α]_D~(20)=+26.2°,不含氮,分子量13000,具有890cm~(-1)红外吸收峰。经纸层析和气相色谱分析,SBP含鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其克分子比为1.14:1.50:0.20:0.75:1.0:2.18。