黄栌根内生真菌分离鉴定及拮抗真菌筛选

采用常规分离法从不同地区健康黄栌根系中共分离得到33株内生真菌,其优势类群主要包括无孢菌群、腐质霉属、青霉属等,而且不同地区黄栌的根系内生真菌种类和数量有一定差异。内生真菌对黄栌枯萎病病原——大丽轮枝孢的拮抗试验结果表明:团炭角菌、黑乌霉属、假丝酵母属的菌株抑制作用较强,其它内生真菌菌株对大丽轮枝孢均有不同程度的抑制作用。     

一株产银杏黄酮内生真菌的初步筛选

从银杏(Ginkgo biloba L.)的根、茎、叶中共分离得到18株内生真菌,用显色反应、薄层层析(TLC)及紫外-可见分光光度法对发酵提取液进行分析并筛选得到一株产黄酮类物质的内生真菌(编号ROOT3.1),经形态学和分子生物学初步鉴定其为镰孢属黄色镰孢菌(Fusarium culmorum).对此菌株发酵液中的黄酮含量进行了测定,其含量为0.017 2 mg·mL-1.     

虎杖内生真菌产白藜芦醇苷菌株的分离鉴定

利用组织培养法对秦巴山区虎杖进行内生真菌分离,通过内生真菌的液体发酵,对发酵液和菌丝的乙酸乙酯萃取液进行HPLC分析检测,筛选出一株产白藜芦醇苷的菌株M-56,其产量达1.029 mg/L。根据该菌株的形态特征及菌丝ITS序列分析,将该株菌确定为无性型真菌丝孢纲链格孢菌Alternaria alternaria。     

几种诱导黑麦草Loliump erenneL.内生真菌产孢的方法

从黑麦草Lolium perenne5个栽培品种中分离、纯化得到6株形态稳定的内生真菌,它们在常规培养条件下均不产生分生孢子。通过在PDA和MEA培养基上进行预培养、扫刷营养体、近紫外光照射以及在菌丝体上放置宿主植物等诱导方法,使其中5株真菌不同程度产生了分生孢子,通过分生孢子的形态成功鉴定了黑麦草内生真菌。实验证明通过诱导内生真菌产孢的方法并借助形态学依据来鉴定无性的内生真菌是可行的。     

产黄酮甘蔗叶内生真菌的分离与鉴定

采用显色反应、薄层层析色谱和紫外吸收光谱法,对甘蔗叶内16株内生真菌的代谢产物进行黄酮类化合物检测。结果共筛选到3株能够产黄酮类化合物的内生真菌(GZ-1、GZ-4和GZ-5)。依据真菌的形态特征及ITS序列分析,鉴定结果表明菌株GZ-1、GZ-5为棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus),菌株GZ-4为黑曲霉(Aspergillus niger)。     

几种诱导黑麦草Loliump erenneL.内生真菌产孢的方法*

从黑麦草Lolium perenne5个栽培品种中分离、纯化得到6株形态稳定的内生真菌,它们在常规培养条件下均不产生分生孢子。通过在PDA和MEA培养基上进行预培养、扫刷营养体、近紫外光照射以及在菌丝体上放置宿主植物等诱导方法,使其中5株真菌不同程度产生了分生孢子,通过分生孢子的形态成功鉴定了黑麦草内生真菌。实验证明通过诱导内生真菌产孢的方法并借助形态学依据来鉴定无性的内生真菌是可行的。     

云南八角莲内生真菌分离、鉴定的初步探索

通过对云南八角莲(D.aurantiocaulis)内生真菌的分离、鉴定,获得87株内生真菌,并对87株进行分离、鉴定发现内生真菌在宿主植物中具有明显的多样性,无孢类群(22株)是优势菌,其次为镰孢菌属(10株)毛壳菌属(10株)、青霉属(9株)、小齿梗霉属(7株)、丛梗孢属(4株),首次报道云南八角莲内生真菌的类群和区系特点.     

青蒿内生真菌的抗肿瘤抗氧化活性

采用MTT法和DPPH法,分别测定已分离得到的68株贵州青蒿内生真菌乙酸乙酯粗提物的肿瘤细胞生长抑制率和DPPH自由基清除率。试验共筛选获得12株活性内生真菌,根据其形态特征进行鉴定,分别隶属于子囊菌亚门(Ascomycotina)的链格孢属(Alternaria)、刺盘孢属(Colletotrichum)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)和拟茎点霉属(Phomopsis);其中,有8株内生真菌至少对1种指示瘤株具有细胞毒活性,占总菌株数的11.8%;5株内生真菌具有不同程度的清除DPPH自由基活性,占总菌株数的7.4%;1株内生真菌同时具有细胞毒活性和抗氧化活性。     

山苍子叶内生真菌的纯化与鉴定

本研究选用PDA培养基,通过组织块分离法从山苍子叶中分离得到两株内生真菌。对照真菌鉴定手册,根据菌株和菌丝体形态学特征,并给合ITS区段的碱基序列分析,鉴定两株内生分别属于顶孢霉属和芒果球座菌属。     

广西柳树桑寄生内生真菌的分离鉴定与抗肿瘤活性菌株筛选

该研究从广西钦州市采集健康的柳树桑寄生的根、茎和叶中分离并纯化内生真菌,对真菌进行形态学鉴定,提取内生真菌的DNA,采用真菌ITS序列对内生真菌进行分子鉴定。利用A549和H460细胞作为抗肿瘤活性指示细胞,采用MTT法测定真菌乙酸乙酯提取物的抗肿瘤活性。经过初步分离分析,从柳树桑寄生中纯化出27株内生真菌,经鉴定它们分别属于7个目9个属15个种。拟盘多毛孢属和间座壳属为优势属,其中拟盘多毛孢属全部定植于寄生根;其次为新壳梭孢属、拟茎点霉属和球座菌属,各分离到3株;其他包括青霉属、镰刀菌属、炭疽菌属和派伦霉属,各分离到1株。抗肿瘤活性研究表明,有一株与Pestalotiopsis protearum的ITS序列相似性达100%的拟盘多毛孢属菌株Gen24表现有抑制肿瘤细胞A549和H460生长的特性,在真菌乙酸乙酯浸提物浓度为800μg·mL~(-1)时,对A549细胞的抑制率达到了56.92%,对H460细胞的抑制率达到了70.11%。该研究结果表明广西柳树桑寄生内生真菌较丰富,在寄主中的分布表现了一定的组织特异性,而且还存在一些具有抗肿瘤活性的菌株及其活性物质可供进一步深入研究。     

银沙槐内生放线菌抗菌活性及其与内生细菌的拮抗关系

从荒漠濒危植物银沙槐根部分离到内生放线菌12株和内生细菌31株.以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为指示菌对内生放线菌进行了抗菌活性筛选.结果表明：3株放线菌对3种指示菌均有抑制作用,2株完全无抑菌作用.采用菌块抑制法分析内生放线菌对来自同一植物内生细菌的抑制效果,44.9%的组合出现抑制现象,最大抑菌圈直径为28.5mm,最小者仅8.25 mm,主要抑制对象是革兰氏阴性菌和芽孢菌;55.1%的组合无抑制现象.说明内生菌的相互作用具有多样性.     

银杏内生菌的分离及其抑菌活性筛选

从健康的银杏（Ginkgo biloba）茎和叶片中分离内生菌,结果从银杏叶和茎上共分离到内生真菌20株,其中9株来自银杏茎部,11株来自银杏叶部;内生放线菌23株,其中15株来自于银杏茎部,8株来自于银杏叶部;内生细菌15株,其中8株来自于银杏茎部,7株来自于银杏叶部。以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）、大肠埃希菌（Escherichia coli）、黑曲霉（Aspergillus niger）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）作为指示菌,采用双层平板法对内生菌进行抑菌活性筛选,结果表明：20株内生真菌中有12株出现了抑菌活性,有抑菌活性菌株的比例为60.0%;23株内生放线菌中,仅3株出现了抑菌活性,有抑菌活性菌株的比例为13.0%;15株内生细菌中,有4株出现了抑菌活性,有抑菌活性菌株的比例为26.7%。     

广西番茄内生细菌的多样性和数量动态

为了探明内生细菌在番茄中的分布和数量变化规律,有目的地筛选防治番茄青枯病的内生细菌,我们对广西可培养的番茄内生细菌的类群和数量动态进行了调查。从广西部分县市采集的303个番茄样本中分离到624株内生细菌菌株,初步确定有芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、黄单胞菌(Xanthomonas)、棒杆菌(Corynebacterium)、土壤杆菌(Agrobacterium)、微杆菌(Microbacterium)、肠杆菌(Enterobacter)和欧文氏菌(Erwinia)8个属,其中以芽孢杆菌、假单胞菌和土壤杆菌为芽孢杆菌为优势类群。番茄内生细菌在植株器官中的分布以根部数量最多,其次是茎和叶。内生细菌的总量在番茄生育期的变化趋势是从苗期到花期数量上升,而从结果期到成熟期数量逐渐下降。多数内生细菌种群的数量变化动态符合细菌总量的变化趋势,只有微杆菌在番茄植株整个生育期中始终保持下降的趋势。春季种植的番茄植株的内生细菌类群数量比秋季种植的少。     

再接种内生真菌对葡萄叶内生真菌群落结构的影响

【目的】探讨回接内生真菌对葡萄叶内生真菌群落结构的影响。【方法】将葡萄叶中分离到的8株内生真菌回接到健康生长的玫瑰蜜葡萄叶片上,同时设置管理上喷施农药与未喷施农药两组处理,3个月后分析不同真菌菌剂处理后葡萄叶片内生真菌的分离率、优势度和多样性指数。【结果】5种菌剂的处理(Xylaria sp.、Nigrospora sp.、Alternaria sp.1、Alternaria sp.2和Colletotrichum sp.)在处理后的叶片中分离到了较多数量的接种菌。不同菌剂处理后葡萄叶片菌群结构差异显著。【结论】与对照处理的葡萄相比,菌剂的处理增加了叶内生真菌的分离率,但显著降低了内生真菌的多样性指数;发现喷施农药组叶片内生真菌的分离率较低,但多样性相对较高。     

红树植物老鼠簕内生细菌数量的时空动态变化

【目的】了解红树植物老鼠簕内生细菌数量的时空动态变化。【方法】分别用荧光显微计数法和平板计数法对老鼠簕内生细菌总量和可培养内生细菌总量进行周年动态测定。【结果】老鼠簕根、茎、叶部内生细菌总量年平均分别为12.25×107、7.59×107和5.72×107 ind./g(FW);而可培养内生细菌总量年平均分别为3.98×103、3.70×103和2.18×103 CFU/g(FW)。【结论】老鼠簕植株体内含有大量的内生细菌,根部含量最高,茎部次之,叶部最少。但分离的可培养内生细菌占比极少(仅为0.000 2%-0.146 8%)。老鼠簕内生细菌总量及可培养内生细菌总量均随采样季节不同而呈现波动性变化,内生细菌总量最大值出现在夏季(7月),可培养内生细菌总量最大值出现在春季(3月)。     

同一生境下白及与黄花白及内生菌群差异的初步研究

为揭示白及与黄花白及内生菌群落特征异同的内在机制,该文运用末端限制性酶切片段长度多态性分析技术对白及和黄花白及叶、茎、块茎、根等组织中内生细菌16S rDNA、内生真菌ITS区进行检测,分析内生菌丰度及多样性指数,运用主成分分析、聚类分析和相关性分析对比白及与黄花白及内生菌差异。结果表明:(1)白及和黄花白及各组织内生细菌H指数为1.77～2.51,内生真菌H指数为1.79～3.18。(2)内生细菌表现为茎、块茎和根中相似,叶中差异较大; 内生真菌则表现出明显的特异性。(3)白及药用部位多糖含量与内生细菌中的7个T-RFs、内生真菌中的2个T-RFs呈相关性,黄花白及药用部位多糖含量与内生细菌中的3个T-RFs、内生真菌中的6个T-RFs呈相关性。综上结果表明,同一生境下,白及和黄花白及内生细菌除叶组织外,其他组织相似,内生真菌则差异显著,部分内生菌和药用部位多糖含量存在相关性。     

银杏内生真菌的生态分布

2004—2005年春夏秋3季,在江西省九江地区4个地点分别采集健康的银杏(Ginkgo biloba)植株,分离得到内生真菌198株,经形态学分类鉴定为6目、7科、22属。研究结果表明,银杏内生真菌的分布存在季节差异、组织部位差异、年龄差异;优势菌群的组成与数量随采样地点、分离组织部位、不同生长时期内生真菌的不同而变化。与中国其他地区的银杏植株内生真菌进行比较,结果表明,植物内生真菌的分布与地域具有一定的相关性,体现了内生真菌生态分布的多样性。     

温室黄瓜叶部微生物区系

采用稀释分离法和消毒叶片研磨液培养法对温室黄瓜叶围和内生微生物进行了分离,共分离到248个菌株,初步鉴定出13个属的叶围真菌,其中链格孢属(Alternaria)和青霉属(Penicillium)真菌为优势类群;鉴定出4个属的内生真菌,其中曲霉属(Aspergillus)真菌为优势类群;10个属的叶围细菌,其中芽孢杆菌属(Bacillus)和黄单胞菌属(Xanthomonas)细菌为优势类群;6个属的内生细菌,其中芽孢杆菌属和假单胞菌属(Pseudomonas)细菌为优势类群;6个属的叶围酵母菌,其中隐球酵母属(Cryptococcus)为优势类群;已鉴定出2个属的叶围放线菌,分别为链霉菌属(Streptomyces)和小多孢菌属(Micropolpspora).未分离到内生酵母菌和放线菌.     

Study on the communities of endophytic fungi and endophytic actinomycetes from rice and their antipathogenic activities in vitro

The populations of endophytic fungi and actinomycetes from four rice cultivars in the Panyu district (Site 1) and Wushan district (Site 2) in Guangdong province, South China, were studied. The preponderant endophytic fungi and actinomycetes isolated belonged to Fusarium and Streptomyces respectively. The incidence of Streptomycetes griseofuscus ranged from 36.1 to 69% out of all the different rice cultivars from the two sites. It is the commonest population of endophytic actinomycetes, and constituted the greatest part of all the antagonistic communities. The distributions of endophytic fungi and actinomycetes in roots and leaves were different, endophytic fungi from leaves were diverse, some were organ-specific. More diverse endophytic actinomycetes were isolated from roots than from leaves. The endophytic fungi isolated from rice in Site 2 were more diverse than that in Site 1. The diversity of the endophytic actinomycetes, however, was less than that in Site 1. Acid soil in Site 2 is ideal for the growth and colonization of fungi while the alkaline soil in Site 1 is better for the growth and colonization of actinomycetes. The results suggested that differences in the chemical composition of soil could influence the endophytic microbial communities of rice plants. The endophytic fungi and actinomycetes isolated from poor-growing seedlings and susceptible rice cultivars were more abundant than that the disease-resistant counterparts. In the dual culture and activity detection of the metabolites, 41.2% of all the isolated endophytic fungi showed antagonism to rice pathogens. Fifty percent of all the isolated endophytic actinomycetes were antagonistic to those pathogens. The percentage of Streptomyces griseofuscus and hygroscopicus reached 55.4 and 21.4% of all the active actinomycetes. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

云南三个地区马铃薯内生真菌多样性研究

为研究云南马铃薯(Solanum tuberosum)内生真菌的多样性,该文以采自云南省德宏芒市、大理喜洲和临沧双江3个地区的马铃薯植株为研究对象,采用组织块分离法、尖端菌丝挑取法对马铃薯根、茎及块茎中的内生真菌进行分离纯化,并采用形态学鉴定方法和ITS序列分析法对分离得到的内生真菌进行鉴定,对内生真菌的定殖率、分离率及多样性指数进行计算和分析。结果表明:(1)共分离得到内生真菌98株,其中从德宏芒市的样品中获得40株,从大理喜洲的样品中获得27株,从临沧双江的样品中获得31株。(2)经鉴定,分离得到的马铃薯内生真菌共涵盖10目10科13属,大多为子囊菌门和担子菌门,优势菌为镰刀菌属(Fusarium)和青霉属(Penicillium),褶皱裸孢壳(Emericella rugulosa)、接骨木镰刀菌(Fusarium sambucinum)、毛韧革菌(Stereum hirsutum)、Psathyrella sulcatotuberculosa和Epicoccum catenisporum 5种真菌均为首次从马铃薯植株中分离得到。(3)马铃薯块茎内生真菌的定殖率最高,根部内生真菌定殖率最低; 内生真菌的分离率以马铃薯根部为最高,而茎部最低; 不同组织中内生真菌的多样性指数趋势均为根>块茎>茎。从综合来看,云南马铃薯植株中的内生真菌具有较高的多样性,不同地区的马铃薯样品中内生真菌优势菌不同,马铃薯根部具有最丰富的内生真菌种群和最高的分离率,是最适合进行内生真菌分离的材料。该研究结果为后期探究马铃薯内生真菌对病原菌的拮抗作用奠定了基础,也为马铃薯内生真菌多样性研究提供了参考数据。