双抗体夹心ELISA与NIH法在狂犬病疫苗抗原检测中的比较

通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA,快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)的含量,将狂犬病疫苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,以此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代NIH动物法.将待检的狂犬病疫苗样品在同一性别12～14g昆明鼠体内作效力检定试验(NIH),同时用双抗体夹心ELISA检测狂犬病疫苗中狂犬病毒G蛋白含量,用Microsoft Office Excel做出标准品和各样品疫苗的线性关系图并计算出疫苗效力值E-NIH.结果用双抗体夹心ELISA所得的E-NIH与对应的小鼠效力试验所得结果M-NIH之间呈正相关性;同一批狂犬病疫苗分次测得E-NIH值在2.41～5.85之间,而相应的M-NIH值在5.11～10.19之间.从而得出E-NIH与相应的M-NIH之间存在明显的线性关系;与NIH法比较,ELISA具有重复性好、成本低、快速等优点;用双抗体夹心ELISA替代小鼠效力试验是可能并可行的.     

狂犬疫苗的研究进展

全球每年由狂犬病毒引起的死亡人数为50 000例,狂犬病毒严重威胁着人类的健康。目前狂犬疫苗是抵御狂犬病毒的最有效的手段,随着近些年生物技术的不断发展,人类对新型疫苗的研制取得了显著的成果,安全有效的人用狂犬疫苗的出现,为人类抵御狂犬病毒提供了更有效的保护。细胞培养的狂犬疫苗还将是当前和未来一段时间人类抵御狂犬病毒主要手段,而单克隆狂犬病毒免疫球蛋白药物不久的上市,将为人类抵御狂犬病毒提供更安全有效的治疗。     

应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究

应用15L生物反应器,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养、制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液,经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。采用15L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验,收获高毒力滴度的狂犬病毒收获液并制备人用冻干狂犬病疫苗。结果表明:Vero细胞在接种狂犬病毒后可以连续收获病毒液达到25d以上,冻干狂犬病疫苗的效价可以达到5.54IU/剂。本工艺可以用于进行大规模的人用冻干狂犬疫苗的生产。     

改良抗体结合实验检测灭活狂犬病疫苗效价

目的:建立抗体结合试验检测狂犬病疫苗(aG株)效价的方法。方法:将待检测疫苗与疫苗标准品梯度稀释后分别加入人抗狂犬病毒免疫球蛋白国家标准品中和1 h,之后加入80%感染剂量的狂犬病毒CVS-11,体外中和1h后接种BSR细胞,培养24 h后免疫荧光染色,在显微镜下观察结果,通过检测剩余病毒量计算待检疫苗的效价,同时与小鼠中和试验法(NIH法)测定狂犬病疫苗效价进行比较。结果:2种方法对8个样品效价的检测结果无显著统计学差异(P=0.997,配对t检验)。结论:初步建立了改良抗体结合试验,可用于狂犬病疫苗中间产品的质量控制。     

口服狂犬病疫苗

口服狂犬病疫苗根据毒种类型分为二类：一类为减毒活疫苗，首先美国用ＥＲＡ株在实验室研究成功，随后各国相继研究ＳＡＤ株的突变株ＳＡＤＢｅｒｎ（或ＳＡＤｓｗｉｓｓ），ＳＡＤＢ＿１９、ＳＡＧ＿１以及ＣＴＮ—１株口服狂犬病疫苗，均获得较好的口服免疫原性，对动物ＳＡＤＢｅｒｎ、ＳＡＤＢ＿１９、ＳＡＤｓｗｉｓｓ、ＣＴＮ—１的毒性相近，而ＳＡＧ＿１的毒性最弱，对多种成年野生动物不致病。以上各株病毒分别被制成口服疫苗在世界许多地区得到试验和应用。另一类为重组基因工程口服疫苗，已将狂犬病毒的糖蛋白基因分别重组到人腺病毒５型，痘苗病毒、浣熊痘病毒、金丝雀痘病毒、多角体病毒中，并证实均有免疫原性，重组痘病毒ＶＶＴＧｇＲＡＢ制备的口服疫苗已在比利时进行大规模的区域性试验，具有有效性、无毒性和热稳定性。口服疫苗的诱饵多采用鸡头、蜡制或膨化食物外壳内包装有疫苗胶囊的复合体。     

用CaG株毒种制备精制狂犬病疫苗的研究

通过对狂犬病毒aG株在金黄地鼠肾细胞上传代培养,获得一种新型狂犬病毒毒株,即地鼠肾细胞适应株(CaG株)[1].由于该毒种具有生产方法简单,成本低廉,且外源因子污染机率小等优点,因此试用该毒种生产精制狂犬病疫苗.在相同条件下,分别用豚鼠脑毒种和细胞毒种各生产3批病毒原液,经相同纯化工艺制备成精制狂犬病疫苗.经初步检定用细胞毒种制备的疫苗安全性良好,疫苗免疫效价与豚鼠脑毒种疫苗无明显差异.     

细胞培养狂犬病毒悬液的制备

<正> 狂犬病毒属于弹状病毒科,狂犬固定毒是一个实验室毒株,其特点是致病性低,能在幼地鼠肾细胞(BHK-21C13)中迅速繁殖,该细胞主要用于狂犬病毒复制研究和生产兽用疫苗。 对于严重暴露的病人,在疫苗自动免疫力产生之前,在伤口周围注射抗血清作局部被动抗体使用,可以收到良好的效果。但是,由于过多的被动抗体会抑制自动抗体的产生,因此必须调整好疫苗与抗血清的关系。 抗狂犬病血清传统的生产方法,是用狂犬固定毒注入兔脑内,待发病取脑制备悬液,再用于超免马生产抗血清。这种抗血清     

双抗体夹心ELISA与NIH法在狂犬病疫苗抗原检测中的比较

通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA,快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)的含量,将狂犬病疫 苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,以此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代 NIH动物法。将待检的狂犬病疫苗样品在同一性别12～14g昆明鼠体内作效力检定试验(NIH),同时用双抗体夹 心ELISA检测狂犬病疫苗中狂犬病毒G蛋白含量,用Microsoft Office Excel做出标准品和各样品疫苗的线性关 系图并计算出疫苗效力值E-NIH。结果用双抗体夹心ELISA所得的E-NIH与对应的小鼠效力试验所得结果M- NIH之间呈正相关性;同一批狂犬病疫苗分次测得E-NIH值在2．41～5．85之间,而相应的M-NIH值在5．11～ 10．19之间。从而得出E-NIH与相应的M-NIH之间存在明显的线性关系;与NIH法比较,ELISA具有重复性好、 成本低、快速等优点;用双抗体夹心ELISA替代小鼠效力试验是可能并可行的。     

狂犬病毒抗体ELISA检测试剂盒的改进研究

为了提高狂犬病毒抗体检测的灵敏度和特异性,采用狂犬病毒单克隆抗体包被酶标板,再分别加入重组的狂犬病毒糖蛋白或细胞培养抗原做固相层的方法(抗体捕捉法),用传统的间接ELISA法做对照,按常规方法检测抗狂犬病毒抗体。结果显示,抗体捕捉法的非特异性反应低于间接法,而灵敏度达到0．51U水平,高于间接法。在800份临床标本检测中,检出率明显高于间接法。用15份阳性血清作小鼠中和试验,并和抗体捕捉ELISA法比较具有高度的一致性。试验结果充分表明,该方法优于传统的ELISA间接法。因此可作为临床注射狂犬疫苗后检测血清中狂犬病毒抗体的常规方法。     

Wistar研究所将在野生浣熊上试验重组的狂犬病疫苗

狂犬病现在仍然是一种可怕的病,因动物咬人而传播.人疫苗有严重的副作用,只能注射给被动物咬伤而怀疑有狂犬病的人,因为这种防止狂犬病的办法往往是致命的.野生动物有可能将狂犬病传给爱畜,而给爱畜接种疫苗是防止人类患狂犬病的一种尝试.Wistar研究所有一个更好的主意,即给野生动物接种疫苗.这个主意之所以行得通,是     

狂犬病毒反向遗传学技术的研究及应用进展

反向遗传学技术是上世纪90年代在分子病毒学研究领域兴起的新技术,通常也被称为“病毒拯救”。综述了应用反向遗传学技术“拯救”狂犬病毒的主要技术体系以及反向遗传学技术在狂犬病毒致病机理、狂犬病毒疫苗及载体研究中的应用进展。     

用基于狂犬病病毒的疫苗感染和激活B细胞

<正>复制缺陷型狂犬病毒(RABV)可快速和有效激发在小鼠体内由T细胞依赖和非T细胞依赖机制产生的病毒中和抗体滴度,因此有望用于研制狂犬病毒暴露后疫苗。为了促进这种早期有效的B细胞激活,我们假设,活RABV研制的疫苗可直接感染B细胞,从而活化大量的抗原提呈细胞(APCs),APCs可在早期启动并且共同刺激CD4+T细胞。在本报道中,我们用活RABV研制的疫苗载体有效感染来自出生早期的小鼠和人类的B细胞。与感染模型或用灭活RABV疫苗处理细胞相比较,B细胞感染导致了B细胞激活和抗原呈递早期标志的明     

抗狂犬病毒中和抗体研究进展

狂犬病是一种人兽共患传染病,人和动物一旦发病后死亡率几乎百分之百,而有效的暴露后预防措施可以将死亡风险降至零。根据WHO推荐的狂犬病暴露后预防方案,一般狂犬病暴露者需要进行疫苗注射,严重者则需在进行疫苗注射的同时注射抗狂犬病毒中和抗体。常用的中和抗体有马抗狂犬病毒免疫球蛋白和人抗狂犬病毒免疫球蛋白,然而两者都存在引起过敏反应或血液疾病的风险。人源抗狂犬病毒中和抗体则因为具有安全性高、成本低、可量产等优点有望代替免疫球蛋白用于暴露后预防。基因工程抗体技术的发展加速了抗体人源化的进程。就抗狂犬病毒中和抗体的发展历程,不同类型中和抗体的优缺点以及中和抗体的未来研究方向作了综述及展望,以期为新一代狂犬疫苗的研发提供参考。     

佐剂的研究进展

佐剂是一类与抗原合用并能增强和调节抗原免疫应答的物质。随着基因工程技术在疫苗研究中的应用,产生了新一代基因工程疫苗。迄今为止,用重组DNA技术生产的疫苗只有乙肝疫苗、伪狂犬病毒苗和幼畜腹泻苗。要使更多的基因工程疫苗应用于临床,需     

Vero细胞狂犬疫苗的研制

利用自建的狂犬病毒Vero细胞适应株和细胞反应器微载体系统培养Vero细胞和狂犬病毒,病毒滴度达到6．0～8．0log(10)LD(50)／ml。病毒原液纯化后制出的纯化狂犬疫苗质量基本上均能达到WHO对此类型疫苗的主要质控要求。表明疫苗小量试制工艺基本可行。     

人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位链置换基因工程抗体研究

为获得针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的人源单抗,本研究采用噬菌体展示平台,对一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号抗原表位的人源单抗CR4098采用链置换法进行改造。以CR4098单链抗体为骨架,从狂犬疫苗接种者外周血分离淋巴细胞,提核酸逆转录,PCR扩增抗体轻链可变区基因,替换CR4098的轻链基因,构建轻链置换文库。经纯化狂犬病毒aG株富集筛选,以上述筛选出的轻链阳性克隆为骨架,构建重链置换抗体库,富集筛选后通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定。利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能。结果显示,通过轻链置换,我们获得14株抗狂犬病毒scFv抗体,通过ELISA、IFA、亲和力测定及中和试验确定人源抗体RV3A5特异性结合狂犬病毒糖蛋白,对狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,亲和力达到2.8×10-9 M。通过竞争ELISA对抗体结合表位进行鉴定,结果表明RV3A5特异性识别糖蛋白Ⅲ号抗原表位。通过链置换法成功获得1株全新的针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的高亲和力人源中和抗体,为狂犬病毒抗体制剂鸡尾酒治疗奠定了基础。     

狂犬病毒糖蛋白的克隆表达及其在中和抗体检测中的应用

目的:制备基因工程表达的狂犬病毒糖蛋白优势表位抗原,并评价其在疫苗免疫后中和抗体检测中的应用价值。方法:TRIzol法从狂犬病疫苗中提取总RNA,经RT-PCR获得糖蛋白目的基因片段,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白,以重组蛋白作为包被抗原,初步建立检测糖蛋白中和抗体的ELISA方法。结果:获得狂犬病毒糖蛋白优势表位区段抗原,建立了糖蛋白中和抗体ELISA检测方法。该检测方法对59例健康献血员血浆样本检测特异性为98.31%(58/59),接种狂犬疫苗免疫个体血浆样本抗体阳性率为98.95%(94/95)。结论:基因工程表达的狂犬病毒糖蛋白优势表位抗原可用于人接种狂犬疫苗后疫苗免疫效果评价。     

狂犬病活载体疫苗研究进展

狂犬病是急性直接接触性人兽共患病,症状凶险,一旦发病,必死无疑,当被带有病毒动物咬伤后,可用疫苗接种产生自动免疫防止发病。为此,在狂犬病研究中,对狂犬疫苗,特别是狂犬病毒基因工程疫苗的研究一直是最活跃的领域。利用重组 DNA 技术开发的狂犬病重组活载体疫苗已有制品,这是近十     

防治和根除狂犬病的新途径

灭活的完整狂犬病毒(RV)颗粒是最安全和最有效的抗原,适合用作狂犬病的免疫治疗;灭活RV疫苗,例如HDCV疫苗,仍然是金标准。但是若干种正在研究的实验性疫苗(如以G蛋白为基础的DNA和重组疫苗),也有可能替代灭活病毒。为了达到可与金标准疫苗相当的效力,在这些新型疫苗中的G蛋白必须以与在完整病毒颗粒中相似的方式出现,即是锚定在膜上并有很高的密度。     

爱尔兰推迟鲑鱼重组活疫苗的野外试验

爱尔兰的重组DNA委员会决定推迟抗鲑致死性疖病的基因重组疫苗的野外试验.BioReserch Ireland公司研究计划部长JohnMcManus说:“由政府机关分配研究资金,批准生物技术产品的试验.”该氏说:“这种疫苗是仅在一个基因上使用具有变异的野外株系.所以在自然界不一定有新株.最初是把抗药性的标记导人菌中.但委员会要求仅用基因变异的疫苗进行试验.DNA委员会非常积极地检查可能发生的问题.所以野外试验最多延期几个月.”