人的重组促黄体生成素对小鼠卵母细胞体外受精的影响

目的探讨人的重组促黄体生成素(r-hLH)对性成熟前的小鼠卵母细胞体外受精(invitrofertilization,IVF)后的分裂、以及IVF胚的体外培养(invitroculture,IVC)过程中发育状况的影响.方法选用性成熟前的清洁级昆明小鼠,分别用r-hFSH(人的重组促卵泡素20IU),r-hFSH+r-hLH(各20IU)或20IUr-hLH对其进行超排处理,通过对从各处理组小鼠卵巢中手工器械分离出来的卵丘-卵母细胞复合体(cumulusenclosedoocyte,CEO)进行体外受精之后,进一步观察这些CEO经IVF后的受精分裂状况,以及IVC后的发育情况.结果r-hFSH+r-hLH处理组小鼠卵母细胞IVF率(72.2%)极显著高于r-hFSH单独处理组(39.9%)或r-hLH单独处理组(37.2%)的相应指标;r-hFSH+r-hLH处理组和r-hFSH单独处理组的IVF胚,发育至8～16细胞阶段的比例(8～16细胞率)趋于一致(25.15%∶27.18%),但是都极显著高于r-hLH处理组的8～16细胞率(17.24%);r-hFSH处理组IVF胚发育至16～32细胞阶段的总比例(16～32细胞率∶33.01%),极显著高于r-hFSH+r-hLH处理组及r-hLH单独处理组的指标(1.75%和0).结论在IVF条件下,r-hLH对小鼠卵母细胞的受精有明显的促进作用,同时却对相应IVF胚的进一步发育产生明显的抑制作用.     

哺乳动物早期胚胎发育的体外研究

哺乳动物胚胎发育起始于受精卵,受精卵依次形成桑椹胚和囊胚.同时,早期胚胎从输卵管迁入子宫,植入母体子宫后通过原肠运动形成原肠胚并进一步发育为新生个体.哺乳动物体内生命孕育方式造成研究取材和观察等方面的困难,阻碍了人类对哺乳动物胚胎发育过程的认识.因此,必需开发哺乳动物体外胚胎技术,以克服体内发育方式所带来的研究困难.2...     

LH与hCG对昆明小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的研究促黄体素（LH）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）对昆明小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法小鼠经注射孕马血清促性腺激素（PMSG）48h后,摘取卵巢获得未成熟卵母细胞,分别在含不同浓度的LH和hCG的成熟液中,或将LH和hCG以不同的浓度组合加入到成熟液,进行体外成熟。结果经15.16h的成熟培养,5个浓度LH组中的极体率均高于对照组,其中200IU/mL组显著高于50IU/mL、400IU/mL、300IU/mL组和对照组（P〈0.05）;5个浓度hCG组的极体率与对照组极体率无显著差异（P〉0.05）;协同组中15IU/mL hCG＋200IU/mL LH组的极体率显著高于对照组和其它各处理组。结论LH对小鼠卵母细胞的体外成熟有一定的促进作用。     

雌性哺乳动物促卵泡素受体与促黄体素受体的结构与表达

本文从雌性哺乳动物促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)的结构及在卵泡发育过程中的表达和功能加以综述,指出FSHR及LHR在卵泡的生长发育、优势化及排卵等方面具有重要的功能。     

人重组卵泡刺激素和表皮生长因子对性未成熟小鼠卵母细胞和颗粒细胞复合体体外发育的作用

卵泡刺激素（FSH）对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生命作用已被普遍接受,但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同,关于表皮生长因子（EGF）对腔前卵泡的作用尚不确切,本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素（rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用,利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞－颗粒细胞复合体（OGCs)(Fig.1)。体外每孔30－40个培养物并分别添加胎牛血清（FBS）,rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径,并每天照相,结果显示,rechFSH显著促进小鼠OGCs 及其卵母细胞的体外发育,这一作用可被EGF进一步增强（P＜0．05）（Fig.2),但到第八天培养结束时,培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内期生长对照组（P＜0．05）（Fig.3),说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。     

乙醇和液体石蜡对早期小鼠胚胎体外发育的影响

哺乳动物早期胚胎体外培养技术是研究早期胚胎发育和胚胎工程的基本手段。目前最常用的方法是采用液体石蜡覆盖的液滴培养法。该方法中所用液体石蜡和CO2质量的好坏对体外培养胚胎的发育有严重影响。本文就此对几种中国产液体石蜡和含气体乙醇的CO2作为胚胎体外培养条件对胚胎发育的影响进行了研究。取成熟小鼠受精后的2细胞和8细胞胚胎分别用于两组实验。一、不同品牌液体石蜡对胚胎发育的影响。体外培养采用液体石蜡覆盖液滴培养法。所用液体石蜡均经过水洗。CO2为经过一次水滤的工厂粗制品。其乙醇含量经气相色谱仪测定约为0．18％。二、不同浓度乙醇对胚胎发育的影响。采用试管培养法。采用乙醇浓度不同的培养液。表1为五个不同厂家的液体石蜡对早期胚胎体外培养的影响。其中：I、II（上海、北京）号两种产品符合胚胎体外培养的要求,可使2细胞后期胚胎发育到囊胚的比率达到92％以上,对细胞没有毒害作用（图1A和图2A、B）。其余,则不符合要求,对细胞有毒害作用（图1B）,甚至用无水乙醇和水先后各洗涤3至4遍,亦无改善。由于影响液体石蜡质量的硝基萘可溶于乙醇而被清除,说明这些不合格的液体石蜡中可能还含有其它对胚胎发育有毒害作用的未知因素,有待进一步查明。商品液体石蜡经水洗能够提高其胚胎培养效率。即使是上海产品（I号）,如果不经水洗,2细胞胚胎也只能发育到桑椹阶段。但是,水洗后的液体石蜡需静置至油水彻底分离,才能正常使用。另外,这5种液体石蜡的比重各不相同。比重相关最大的I号和II号产品均符合培养要求,说明液体石蜡的比重对胚胎的正常发育没有影响。表2为各种乙醇浓度对8细胞胚胎发育的影响。当乙醇浓度达到0．1％时,即可使8细胞胚胎发育为囊胚的比率下降为73．9％;达到0．8％以上时,胚胎甚至不能发育。可见,培养液中若含有乙醇将会严重影响胚胎的体外培养。这除了由于水滤降低了CO2中气体乙醇的含量外,还可能是由于液体石蜡覆盖培养液滴后,对气体乙醇的渗入有一定阻作用所致。因此,在胚胎体外培养中不必非使用价格昂贵的纯CO2不可。     

褪黑素对小鼠2- 细胞期胚胎发育的影响

目的:研究褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响。方法:在培养液中添加不同浓度褪黑素,在不同的作用时间点,观察并记录小鼠胚胎囊胚率、孵出率,研究其变化情况。结果:不同浓度褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎存在双向作用,在10-13-10-5M之间促进细胞囊胚形成和孵出,在10-9M时促进效应达到最高,而在10-3M时则呈现出一定的毒性作用。结论:褪黑素对小鼠胚胎发育影响与褪黑素浓度密切相关。     

褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响

目的：研究褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响。方法：在培养液中添加不同浓度褪黑素,在不同的作用时间点,观察并记录小鼠胚胎囊胚率、孵出率,研究其变化情况。结果：不同浓度褪黑素对小鼠2-细胞期胚胎存在双向作用,在10-13-10-5M之间促进细胞囊胚形成和孵出,在10-9M时促进效应达到最高,而在10-3M时则呈现出一定的毒性作用。结论：褪黑素对小鼠胚胎发育影响与褪黑素浓度密切相关。     

长春新碱对小鼠早期胚胎发育的影响

对小鼠早期胚胎采用体外培养的方法,研究了抗癌药物硫酸长春新碱(VCR)对正常昆明小鼠早期胚胎发育的影响。临床剂量的长春新碱能使几乎所有8细胞胚胎死亡,无一发育至囊胚。电镜观察发现,长春新碱能使细胞核变形,还能抑制细胞之间接触和挤紧,这在临床剂量应用上也有一定的参考价值。     

乙醇对着床前小鼠胚胎体外发育的影响

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎分别进行体外培养,研究了乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％和10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养,发现小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限在1．5％左右。然后又用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎进行培养。结果发现：含1％乙醇的培养液对于8细胞胚胎和桑椹胚的囊胚形成有促进作用,而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。3％乙醇则对各期胚胎均有不同程度的抑制作用,但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力逐渐增强。     

棘胸蛙早期胚胎发育的初步观察

在２５．１５±０．２２℃恒温条件下观察了棘胸蛙的正常胚胎发育。根据外部形态特征、主要生理特征及胚胎行为的出现,将棘胸蛙的胚胎发育划分为２７期,从受精卵到孵化出膜约２３４ｈ．胚胎发育期间的总积温（总热量）为５８８７℃。卵的受精期１．５ｈ。卵裂期历时２９ｈ３３ｍｉｎ,原肠形成期历时１６ｈ４２ｍｉｎ,器官形成期共历时１８６ｈ８６ｍｉｎ。     

Quox-1基因同源序列在人胚早期发育中的表达

以Quox-1基因的特异性片段b_2为探针,与人基因组DNA作Southern杂交,结果显示,人基因组中存在Quox-1基因的同源序列。以抗Quox-1蛋白的抗体与早期人胚胎组织的切片作免疫组化反应研究了Quox-1基因同源序列在人胚早期发育过程中的表达,结果表明其表达有明显的时间和空间特异性。胚龄30天以前,Quox-1基因的同源序列在人胚包括神经管等许多部位表达,30天以后表达部位局限于脊索、心肌细胞、生肌节、消化道上皮及周皮等处。文中讨论了Quox-1基因同源顺序对人类胚胎早期发育过程可能的调控作用。     

甲状腺素对雄性去势大鼠垂体分泌LH的反应性及其在血浆中浓度的影响

本文观察了雄性去势大鼠注射T_4后对血浆和垂体组织LH含量的影响及垂体对不同剂量的LHRHa的反应性。结果表明血浆LH含量与去势对照组相比,7.5μg组的第3、6、9天明显低(P<0.05),2.5和5.0μg组各天则无差异(P>0.05)。各组对100ng/100克体重LHRHa的反应比对500ng的要大,T_4 7.5μg组对LHRHa最大反应出现的时间比2.5和5.0μg组的推迟60min。垂体重量和LH含量各组无差异(P>0.05)。结果提示:7.5μg T_4对雄性去势大鼠的LH分泌和对垂体的LHRHa反应均显示抑制作用。     

阉割和睾丸酮替代对雄性老年大鼠下丘脑和血浆促黄体生成素释放激素水平的影响

应用放射免疫分析(RIA)技术比较了年青(2—3月龄)和老年(24—26月龄)雄性大鼠下丘脑和血浆促黄体生成素释放激素(LHRH)水平及其在睾丸切除(ORDX)和睾丸酮(T)替代下LHRH水平的变化。老年大鼠血浆T水平明显降低,下丘脑LHRH含量亦呈明显下降趋势,但血浆LHRH水平与年青大鼠十分接近。在ORDX和T替代下,两组动物血浆T水平没有明显差别,但老年大鼠下丘脑和血浆LHRH的变化率却不同程度地低于年青大鼠。上述结果提示,老年雄性大鼠下丘脑LHRH神经元系统的负反馈能力明显削弱,这也许是下丘脑-垂体-睾丸轴呈增龄性衰变的重要原因之一。     

推进早期胚胎发育正常调控过渡的输卵管细胞因子的初步研究

本研究对勉输卵管上皮细胞分泌蛋白的特征及功能能作了初步研究和分析。ＲＯＳｓ分子量介于１３５－４４ｋＤ,可分为３组,其中第２,３组为酸性糖蛋白。经糖苷酶消化,第３组ＲＯＰＳ显著地降解为分子量接近３０ｋＤ的蛋白。利用制备的抗总ＲＯＰｓ多抗以及针对不同分子量ＲＯＰ的抗血清,分别进行功能分析发现,Ａｒｏｐ－Ｔ和Ａｒｏｐ－Ⅰ能使受精卵发育完全阻断．     

光照对鸡生长、产蛋及血浆雌二醇、黄体生成素、甲状腺素的影响

70日龄星杂“579”小母鸡120只,随机分成A、B、C三组。C组为对照组。A、B两组分别以32和8Lx的强度补充光照,使其每天的光照时间达14h。从70日龄起,每10天称重一次;从开产日龄起,对每只鸡的产蛋分别按日龄称重、登记。结果表明,光照强度与鸡的生长速度和平均蛋重相关不显著,而与鸡的性成熟和产蛋量显著相关。用放射免疫分析法测定了三组鸡100～180日龄间外周血浆E_2、LH和T_4含量,B组鸡LH峰值最高,其峰值(149日龄)与基础值(100日龄)对比,增长率为231.4％;A组鸡血浆T_4水平增加明显,但其产蛋量相对较低;补充光照组能促使血浆E_2峰值的出现早于自然光照组,但各组鸡E_2峰值无显著差异。     

人胎垂体生长激素样免疫反应细胞的发育

为探讨人胎垂体生长激素细胞发育规律,本文用免疫细胞化学结合图像分析,研究１９例不同胎龄人胎垂体生长激素细胞的形态、大小、光密度变化。结果如下：①胎１６周已存在生长激素免疫反应细胞,随胎龄增加,细胞多排列成团或索,并由周边部向远侧部的中央延伸。②随胎龄增加,生长激素样免疫反应细胞数量逐渐增多,细胞逐渐增大,胞浆逐渐增多,核浆比值逐渐变小。至胎龄３２周,生长激素样免疫反应细胞以大型细胞为主,多为圆形或卵圆形。③生长激素样免疫反应细胞的光密度随胎龄增加而逐渐增高,２６周达高峰,以后呈下降趋势,但仍高于２４周的水平,结果提示：垂体生长激素细胞的发育是从幼稚到成熟的过程,生长激素细胞的功能在胎２４－２６周最旺盛。     

山羊(Capra hircus)重构胚与再重构胚早期发育的研究

选择山羊8细胞期到桑椹胚期的正常胚胎或重构胚的卵裂球,或选择胚泡期胚胎的内细胞团细胞作为供核,并以LRH注射后26—28h的去核成熟卵球作为受体,制备重构胚或再重构胚,琼脂糖包埋,植入山羊输卵管内,体内培养4—6天发育结果表明:不同发育时期(8细胞期至胚泡期)的正常胚胎细胞核或重构胚细胞核中,至少有部分细胞核均保留着发育的全能性,这些细胞核在母系基因表达产物的调控下,实现重新编程,启动并完成正常发育的全过程。     

促肾上腺皮质激素释放激素对人早期胎盘组织绒毛膜促性腺激素释放的调节作用

为探讨人早期胎盘组织产生的促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）的生物学作用及其绒毛膜促性腺激素（hCG）合成和释放的调控机制,在人早期胎盘组织体外孵育模型上研究了CRH及其拮抗剂（α－HelicalCRF9-41）对hCG基础分泌和由GnRH刺激的hCG分泌的影响。结果表明,10-10～10-7mol／L的外源性CRH可明显抑制hCG的基础释放（P＜0.05）,而以10-7mol／L作用最显著（P＜0．001）;加入10-7mol／L的CRH4小时后,hCG释放量开始有所下降,但尚无统计学差异,到加药后8小时,CRH组已明显低于相应的对照组（P＜0．05）,以加药后16小时抑制作用最明显（P＜0．001）,到24小时抑制作用趋于减弱,但与同期对照相比仍有显著差异（P＜0．05）;10-7mol／L和10-5mol／L的α-HelicalCRF9-41可明显刺激hCG的分泌（P＜0.001）;2×10-7mol／L和2×10-6mol／L的α－HelicalCRF9-41可完全逆转CRH对hCG释放的抑制作用;2×10-9～2×10-7mol／L的CRH对由GnRH诱导的hCG释放有明显的抑制作用。这些结果提示,由胎盘的合体滋养层产生的CRH,通过受体介导机制,不仅对hCG基础分泌,且对由GnRH诱导的hCG分泌都有明显的抑制作用,且这种作用具有特定的时间依赖性和剂量依赖性．CRH可能是参与hCG分泌调控的生理性负调节团子之一.     

γ谷氨酰环化转移酶对斑马鱼早期发育的影响

γ谷氨酰环化转移酶(γ-Glutamyl cyclotransferase,GGCT)是谷胱甘肽循环过程中催化L-γ-GlutamylL-amino acid分解为L-amino acid和5-oxoprodline的关键酶,在防止细胞氧化性损伤中发挥重要作用。研究以斑马鱼为模型,利用吗啡啉(Morpholino,MO)敲降GGCT,发现早期胚胎发育出现脑部发育缓慢、尾短弯曲和环心室水肿等异常表型,原位杂交检测发现脑发育相关标记基因shha、wnt8b与fgf8的表达发生改变。体外转录ggct-m RNA与GGCT-MO共注射,畸形率降低,部分脑部标记基因表达回复正常。此外,使用化学阻断剂阻断GGCT上游的γ谷氨酰转肽酶(γ-Glutamyl transpeptidase,GGT)和下游的5羟脯氨酸酶,斑马鱼胚胎产生发育停滞和水肿表型。敲降GGCT和阻断GGT都降低了胚胎的谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的含量,研究表明γ谷氨酰环化转移酶可能通过谷胱甘肽循环在斑马鱼早期胚胎发育过程发挥重要作用。