发现胰多肽家族一个新成员:酪甘肽

神经肽Y(NPY)与酪酪肽(PYY)是近年来分别从猪的大脑和小肠分离和提纯出来的两种新的肽类激素,尽管它们与胰多肽(PP)产生并分布在体内不同的组织,但由于结构和生理功能与胰多肽相似,被认为是来源于同一原始基因的胰多肽家族的成员。最近,美国Purdue 大学生化系P.C.Andrews 等报道,从一种华脐鱼的胰腺内分泌组织中提取和分离出一种新的肽类物质,分子量为4221.3,含有37个氨基酸残基,并已确定其氨基酸顺序。由于此物质氨     

人酪酪肽及其衍生物的克隆、表达及活性测定

酪酪肽(peptide tyrosine tyrosine, PYY)是存在于机体肠道的肽类激素,有 PYY_1-36和PYY_3-36两种形式,后者可以降低个体食欲并减少食物摄入。分别通过人工合成基因和PCR定点突变的方法,得到PYY_3-36衍生物PYY_3-36-Gly³⁷及PYY_3-36的基因,然后克隆到pET32a(+)表达载体中,转化大肠杆菌并进行诱导表达。通过亲和层析得到融合蛋白,经肠激酶酶切和二次亲和层析得到目的多肽。在昆明鼠体内检测二者生物活性,结果显示剂量为800μg/kg时PYY_3-36及PYY_3-36-Gly³⁷均可抑制昆明鼠的摄食,且抑制作用可达9h,而PYY_3-36-Gly³⁷组的平均抑制率可达50%,明显高于PYY_3-36。     

发现一个胰多肽家族的新成员——神经肽Y

自从Kimmel等(1968)在鸡胰腺中分离出鸡胰多肽(PP)以来,人们相继由哺乳动物的胰腺中分离出牛、猪、羊、狗和人的胰多肽,并确定PP是由36个氨基酸残基组成的多肽。其后(1980),在Mutt实验室又由猪十二指肠提取物中分离出一种与PP结构类似的36肽,命名为酪酪肽(PYY),所谓PP家族便开始形成。由于用鸡PP或牛PP抗血清进行免疫组织化学研究发现,PP样免疫活性物质广泛分布在中枢神经系统中,因而人们一向认为,哺乳类动物的脑中存在着一种与PP在化学结构上有一定联系的肽类物质。但用放射免疫测定法却未能测出鸡PP、牛PP免疫活性。因此,脑中PP样免疫活性的实质一直没有搞清楚。最近,Totemoto等又从猪脑中分离出一种新的神经肽,命名为神经肽Y(neuropeptide Y,NPY),     

两种新的候补激素——组异肽和酪酪肽

肽类激素的发现过程,大多是先观察到粗的组织提取物中具有生物学活性,其次,进一步用生物学方法分离提纯粗制品,得到纯品激素,再后,确定激素分子结构。晚近,瑞典生化学家 Mutt 与 Tatemoto 等根据许多肽类激素都含有 C-端酰胺结构这一特性,独具匠心,设计出一种寻找肽类激素的化学新方法。即在组织提取物中先找寻含有 C-端酰胺结构的肽节段,然后用酶学方法测出 C-端及 N-端的氨基酸残基序列,最后,确定激素的分子结构。这种创造性工作,为探寻新的肽类激素开辟了广阔的道路。他们用这种方法,已经在猪的上段小肠中发现了几种以前不为人所知的肽类新激素。其中有两个,即组异肽和酪酪肽,皆是在提纯胰泌素时获得的副产品中找寻到的。组异肽(The peptide with N-terminal histidine and C-terminal isoleucine,简称 PHI),含有27个氨基酸残基。其 C-端序列为亮-异亮-NH_2,N-端序列为组-丙-门冬-甘-缬-苯丙-苏-,与胰泌素、血管活性肠肽(VIP)、胰高血糖素、肠抑胃肽(GIP)相似,属于胰泌素-胰高血糖素家族。初步观察到,它     

肾上腺髓质中发现神经肽Y

神经肽Y(neuropeptide tyrosine,NPY)是最近从哺乳动物脑组织中提取出来的一种新的脑多肽。它由36个氨基酸残基组成,其氨基酸排列顺序与另外二个存在于肠道内分泌细胞中的调节肽——胰多肽(PP)和酪酪肽(PYY)很相似,但NPY只存在于哺乳动物的中枢和外周神经组织中,尚未在内分泌细胞中发现。最近,英国科学家Polak等,用生物化学和细胞免疫化学方法证明,在小鼠、大鼠、豚鼠、狗和马     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞钙稳态影响的实验研究

目前寻找有效的药物仍是治疗肿瘤的关键环节之一. 酪丝亮肽为中国新近研发并具有自主知识产权的三肽化合物. 观察了酪丝亮肽的抗肝癌作用, 并研究了其对肿瘤细胞钙稳态的影响, 以初步探讨它的抗肿瘤作用机制. 结果发现, 酪丝亮肽能显著抑制人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的生长, 160 mg/(kg·d)治疗组肿瘤生长抑制率可达41.34%, 电子显微镜观察发现酪丝亮肽可引起移植瘤细胞的坏死和凋亡, 细胞器线粒体和内质网损伤, 并出现钙沉积. 应用激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞仪观察发现, 10 mg/mL酪丝亮肽在400 s内可引起体外培养BEL-7402细胞胞浆钙离子浓度迅速升高, 最高幅度可达239.13%; 持续作用1 h后BEL-7402胞浆钙离子维持在高水平, 作用2 h后胞浆钙离子浓度开始下降, 4和24 h时的胞浆钙离子水平均低于对照, 相同剂量的药物对人正常肝细胞株Chang氏肝无明显影响; 酪丝亮肽还可使体外培养的BEL-7402细胞线粒体跨膜电位明显下降, 提示其抗肝癌机制可能是通过影响肿瘤细胞的钙稳态, 诱导其发生坏死或凋亡.     

一组新的阿片肽——β-酪吗啡

近年来关于内源性阿片样物质的研究发展迅速,相继发现了β-内啡肽、脑啡肽和强啡肽等多种内源性阿片肽。这些阿片肽虽然分子量大小不同,但在分子结构上都含有共同的N端氨基的序列:酪-甘-甘-苯丙,这种结构可能与其阿片活性有关。近来,西德Brantl等人报告了一种新的天然阿片肽(7肽)。其特点是具有不同的N端结构:酪-脯-苯丙-脯。由于此肽为β-酪蛋白(β-casein)的片段,可由酪蛋白裂解得到,因此命名为β-酪吗啡(β-caso-morphin)。作者对这一新肽与阿片受体的结合及各种生物学效应作了详细研究,发现此肽及其几个N端片段(β-     

β-酪啡肽-7保护链脲佐菌素引起的大鼠肾损伤

研究β-酪啡肽-7（β-casomorphin-7,β-CM-7）对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾损伤的保护作用.结果显示：（1）β-酪啡肽-7降低糖尿病大鼠的采食量、饮水量和空腹血糖值,提高糖尿病大鼠的体重,但是差异不显著（P>0.05）.（2）β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠尿糖、尿蛋白、血清肌酐、血清尿素氮、肾脏指数和血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;Masson染色结果显示,β-酪啡肽-7治疗显著降低糖尿病大鼠肾脏的纤维化程度.（3）RT-RCR结果显示,β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白基因的表达.Western印迹显示,β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠肾脏Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达.上述结果表明,β-酪啡肽-7能够减缓糖尿病大鼠肾脏功能和肾脏纤维化程度,其机制可能与降低TGF-β1含量、减少胶原蛋白在肾脏的沉积有关.     

胆囊收缩素及其类似物对兔血浆自由脂肪酸浓度的降低作用

我们最近曾报道,向兔侧脑室内灌注八肽胆囊收缩素(CCK-8)有明显的降低血浆自由脂肪酸(FFA)的作用。本实验进一步观察不同分子形式的 CCK,以及与 CCK 结构相近似的雨蛙肽(Caerulein)和胃泌素(G-17)对血浆 FFA 浓度的影响,并在摩尔量基础上比较它们的相对作用强度。结果如下:(1)侧脑室灌注CCK-8(50pmol)可引起血浆 FFA 浓度明显降低。灌注后第45分钟时,平均降低47.8%,(2)等摩尔量的CCK-4也有降低血浆 FFA 的效应(-35.1%),但其作用比CCK-8弱;(3)灌注50pmol的CCK-33对血浆 FFA 浓度无明显作用,但随着灌注剂量的增加,作用也趋明显,在10倍量时(500pmol),其作用强度与 CCK-8(50 pmol)相似,(4)雨蛙肽具有与CCK-8相似的作用(-45.1%),但G-17的作用较弱(-24.5%)。以CCK-8的作用强度为1,上述肽类在等摩尔量基础上降低血浆 FFA 浓度的相对强度如下:CGK-8:CCK-4:CCK-33:雨蛙肽:G-171:0.76:0.09:0.94:0.51可以认为,脑内CCK-8作用的发挥与其化学结构具有一定的关系,羧基端八肽酰胺可能是脑内CCK-8降低血浆 FFA 浓度的重要结构。这一结果与哺乳动物脑内 CCK 的主要形式为CCK-8是一致的。     

不同钙浓度对两种岩溶植物幼苗生长及其酶活性的影响

该研究采用砂培法,以狗骨木(Swida wilsoniana)和南酸枣(Choerospondias axillaris)两种岩溶植物为研究对象,用不同钙离子(Ca~(2+))浓度(设为5、35、70、150、300 mmol·L~(-1)的5个水平)的营养液进行培养,研究其对两种植物的生长及酶活性的影响。结果表明:狗骨木和南酸枣的株高在5 mmol·L~(-1)时最大,之后随Ca~(2+)浓度上升呈下降趋势,南酸枣在300 mmol·L~(-1)时有所回升。两种植物的根、枝、叶生物量和总生物量随着Ca~(2+)浓度增加而减少。狗骨木叶、枝、根的生物量分配比率为根枝叶,南酸枣在35 mmol·L~(-1)时表现为根枝叶,其他在Ca~(2+)浓度下均为枝根叶,叶生物量分配少。狗骨木和南酸枣的丙二醛(MDA)含量在150 mmol·L~(-1)时最低,且狗骨木的低于南酸枣。钙胁迫下,与南酸枣相比,狗骨木维持较高的过氧化氢酶(CAT)活性和可溶性糖含量。两种植物在5和150 mmol·L~(-1)的Ca~(2+)浓度下各项指标处于较适水平,而在300 mmol·L~(-1)的高钙离子浓度下受到明显的胁迫,对比两种植物,狗骨木较南酸枣在高钙浓度下有更好的适应性。     

侧脑室注射胰高血糖素对兔血浆自由脂肪酸、血糖及胰岛素浓度的影响

胰高血糖素是一种脑-肠肽,但它在脑中的生理作用尚不清楚。本工作在家兔侧脑室埋藏慢性套管,并通过注射20μl含0.5—5μg的胰高血糖素溶液,在注射后的15、45、75、105分钟各取血样测定血糖、血浆自由脂肪酸(FFA)和胰岛素的浓度。结果发现:(1)对血糖及血浆胰岛素浓度无明显影响;(2)能引起血浆 FFA 浓度降低,且与剂量有依赖关系,在注射后的45分钟,FFA 降低最明显,以后逐渐恢复;(3)皮下注射阿托品(0.2mg/kg)或静脉注射酚妥拉明(5mg/kg)均不能消除侧脑室注射胰高血糖素降低 FFA 的作用;(4)静脉注射心得安(5mg/kg)能阻断侧脑室注射胰高血糖素的降低 FFA 的作用。这似表明脑中的胰高血糖素可能参与脂代谢的调节,并可能是通过肾上腺素β-受体起作用的。     

酮洛芬缓释片人体药动学和生物等效性研究

目的:评价受试酮洛芬缓释片与参比酮洛芬片的生物等效性。方法:采用反相高效液相色谱法测定24名健康男性志愿受试者交叉单剂量口服受试酮洛芬缓释片与参比酮洛芬片150mg后血浆中酮洛芬的浓度,用3p97程序进行数据处理。结果:口服受试和参比酮洛芬制荆后的AUC_(0-(?))分别是38.94±9.15μg·h·ml~(-1)、38.04±6.90μg·h·ml~(-1);AUC_(0-(?))分别是44.50±8.09μg·h·ml~(-1)、42.99±8.36μg·h·ml~(-1);T_(max)分别是3.87±0.55 h、1.96±0.60h;C_(max)分别是5.78±1.11μg·ml~(-1)、11.62±2.10μg·ml~(-1);t_(1/2)(Ke)分别是5.88±1.16h、1.70±1.40h。结论:受试酮洛芬缓释片与参比酮洛芬片具有生物等效性。     

下丘脑弓状核PYY对大鼠摄食、胃运动和能量代谢的影响及机制

目的:探究YY肽(PYY)对雄性Wistar大鼠的摄食、胃运动和能量代谢的影响及潜在机制。方法:采用免疫组织化学实验方法观察大鼠下丘脑弓状核(ARC)中Y2受体的表达;通过ARC微量注射PYY,观察其对下丘脑中编码摄食相关代谢激素的m RNA表达以及ARC中PYY反应性神经元的放电频率、食物摄入量及水摄入量、氧气消耗(VO_2)、CO_2产生(VCO_2)及能量代谢的影响。结果:免疫组化结果显示大鼠ARC内存在Y2受体;大鼠ARC注射PYY能够兴奋PYY反应性神经元,上调可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及促肾上腺皮质释放激素(CRH)等抑食肽m RNA的表达,下调神经肽Y(NPY)及下丘脑泌素(HCRT)等促食肽m RNA的表达;且抑制大鼠食物摄入量,并参与调控大鼠呼吸、能量代谢及胃运动的改变。结论:ARC微量注射PYY可减少食物摄入并调节全身能量平衡,PYY可能是一种新型代谢肽。     

LC-MS/MS测定抗肿瘤活性物质咖啡酸-3,4-二羟基苯乙酯及其在人肝微粒体中的药物代谢特点研究

本实验研究抗肿瘤活性物质咖啡酸-3,4-二羟基苯乙酯(CADPE)在体外肝微粒体中的代谢特点。通过CADPE在体外人肝微粒体培养不同时间后,用液质联用测定CADPE及其代谢产物咖啡酸和羟基酪醇在各时间点的药物浓度,描绘各物质的药-时曲线,确定CADPE的代谢特点。CADPE在肝微粒体中的代谢呈单室模型,半衰期(T_(1/2))为0.72±0.09 h。CADPE代谢产物羟基酪醇的达峰时间(Tmax)为1.30±0.30 h,半衰期(T_(1/2))为3.97±0.58 h,咖啡酸浓度与时间的关系成对数关系。明确了CADPE及其代谢产物羟基酪醇和咖啡酸在体外人肝微粒体中的药代动力学特征,为进一步深入研究CADPE在动物及人体内的药代动力学特征提供了科学依据。     

β-酪啡肽7促大鼠胃内胃泌素的表达

本实验研究了β-酪啡肽7(β-casomorphin7,βCM7)在成年大鼠胃内的吸收及对胃黏膜中胃泌素(gas-trin)表达的影响。实验包括3个部分:1)将成年大鼠胃贲门和幽门结扎,并分别对胃伴行血管和网膜进行结扎和不结扎处理,采用反相HPLC法发现,胃注射βCM7在两种不同处理中相同时间点的βCM7浓度无统计学差异;2)体外酶解实验表明,βCM7能抗成年大鼠胃黏膜酶水解并以完整的分子形式存在;3)将成年雄性SD大鼠设为对照组和3个试验组,分别灌喂1ml生理盐水、7·5×10-9mol/L纳洛酮(Naloxone,NaL)、7·5×10-9mol/LβCM7和7·5×10-9mol/LNaL 7·5×10-9mol/LβCM7。饲养周期为30d。半定量RT-PCR法观察了大鼠胃黏膜中胃泌素和生长抑素(Somatostatin,SS)mRNA表达的变化。结果显示:βCM7组能显著刺激胃黏膜中胃泌素基因的表达(n=8,P<0·05),且该效应不能被纳洛酮逆转;NaL组大鼠胃黏膜中胃泌素基因的表达极显著低于对照和各试验组(n=8,P<0·01);仅βCM7组能显著抑制胃黏膜中SS基因的表达(n=8,P<0·05)。上述结果表明:βCM7不能被成年大鼠胃黏膜吸收且能以完整的肽结构存在;βCM7可能通过抑制SSmR-NA表达来促进胃黏膜中胃泌素的表达,从而为阐明βCM7作为腔内信号分子在消化道内发挥生理功能提供证据     

乙酸可通过增强脂肪酸β氧化治疗小鼠肥胖

目的：探讨乙酸对高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重及脂肪酸β氧化的影响。方法：3~4w龄C57BL/6J雄性小鼠分别给予正常饲料和高脂饲料喂养4个月以诱导肥胖,然后对肥胖小鼠实施乙酸治疗5w。喂养过程结束后,心脏采血,取结肠、肝脏和性腺周围脂肪。检测血浆葡萄糖、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TCH）和胰岛素浓度,同时检测结肠G蛋白偶联受体（GPR43、GPR41）、酪酪肽（PYY）、胰高血糖素样肽1（GLP-1）以及肝脏和脂肪肉碱脂酰转移酶（cpt）基因mRNA表达水平。结果：高脂诱导的肥胖小鼠给予乙酸治疗5w后,体重显著性下降,但日均进食量和能量摄入却显著增加（P<0.05）。肥胖小鼠的血浆葡萄糖、TG和TCH较正常小鼠,均显著升高（P<0.05）,给予乙酸治疗后,血浆TG和TCH水平均显著降低（P<0.05）。与正常小鼠相比,肥胖小鼠结肠中GPR43、GPR41、PYY和GLP1的mRNA表达量均显著性升高（P<0.05）,脂肪和肝脏中cpt1a、cpt1c、cpt2的mRNA表达显著性降低（P<0.05）;肥胖小鼠给予乙酸治疗后,结肠中上述基因mRNA表达量均显著性降低（P<0.05）,脂肪中cpt基因mRNA表达均显著性升高（P<0.05）。结论：乙酸对小鼠肥胖有较好的治疗效果,其作用机制可能是通过特异性促进脂肪组织中脂肪酸β氧化。     

腐食酪螨螨体正己烷提取物的生物活性及成分分析

【目的】确定腐食酪螨Tyrophagus putrescentiae报警信息素的存在及其成分。【方法】采取正己烷溶剂浸提法提取获得腐食酪螨螨体提取物, 通过观察腐食酪螨对提取物的行为反应确定其生物活性, 最后用气相色谱-质谱联用仪(gas chromatograph-mass spectrum, GC-MS)对提取物的成分进行分析。【结果】腐食酪螨正己烷提取物对该螨有明显的报警作用。GC-MS分析显示, 提取物中含有橙花醇甲酸酯、Z-柠檬醛、E-柠檬醛等成分。【结论】该实验证明了腐食酪螨报警信息素的存在, 为进一步明确各成分及其作用奠定了基础。     

应澄清两个β-内啡肽的错误概念

最近几年,对内啡肽和脑啡肽虽做了大量研究,但仍有些错误概念未予澄清。第一、内啡肽和脑啡肽在血中或组织中受氨基肽酶迅速作用,立刻转变为无活性的去酪化合物。实验证明,这一概念有两方面错误:(1)去酪~1—甲啡肽和去酪~1—内啡肽并不是无活性化合物,它们不作用于阿片受体,但却有强烈的行为效应。(2)β-内啡肽能在血液中循环而不被立即破坏。大鼠注射~3H标记的人β-内啡肽后45分钟,血浆中50%的放射性仍来自于完整的β-内啡肽。据认为,β-内啡肽N-端的裂解是产生行为活性衍生物的一个选择性代谢途径的开始。     

温度胁迫对腐食酪螨抗氧化能力的影响

【目的】以储藏物主要害螨腐食酪螨Tyrophagusputrescentiae(Schrank)为研究对象,采用温度胁迫处理,探讨其体内抗氧化系统对不同温度胁迫的响应机制。【方法】采用低温(0、5、10、15、20℃)、常温(25℃)、高温(30、33、36、39、42和45℃)胁迫处理1、2、3h后,测定腐食酪螨超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)3种酶的活力以及总抗氧化(T-AOC)能力和丙二醛(MDA)含量的变化。【结果】腐食酪螨3种抗氧化酶的活力、总抗氧化能力和MDA含量变化都与胁迫温度和时间密切相关;无论低温还是高温胁迫,SOD酶和GSTs酶活性较对照组均显著增加,说明它们在清除活性氧(ROS)过程中发挥着重要作用。【结论】温度胁迫对腐食酪螨有重要作用,可提高其抗氧化酶活力。     

美国生物圈二号内生长在高CO_2浓度下的10种植物气孔导度、蒸腾速率及水分利用效率的变化

报道了美国生物圈二号内生长在高CO_2浓度下(>2200μmol·mol~(-1))4.5年后的5种热带雨林植物和5种荒漠植物气孔导度、蒸腾速率和水分利用效率的变化。结果表明:热带雨林植物在CO_2浓度为350～400μmol·mol~(-1)时的气孔导度、蒸腾速率和水分利用效率分别为:(127.4±65.6)mmol·m~(-2)·s~(-1)、(2.04±0.61)mmol·m~(-2)·s~(-1)和(2.90±0.55)μmol CO_2·mmol~(-1) H_2O,而在700～820μmol·mol~(-1)时为(61.3±30.5)mmol·m~(-2)·s~(-1)、(1.54±0.65)mmol·m~(-2)·s~(-1)和(8.45±2.71)μmol CO_2·mmol~(-1) H_2O;荒漠植物气孔导度和蒸腾速率则分别由CO_2 320～400μmol·mol~(-1)时的(142.8±94.6)和(2.09±0.71)下降到820～850μmol·mol~(-1)时的(57.7±35.8)和(1.36±0.52)mmol·m~(-2)·s~(-1),水分利用效率由(4.69±1.39)上升到(9.68±1.61)μmol CO_2·mmol~(-1) H_20。在低CO_2浓度时植物的气孔导度、蒸腾速率和水分利用效率受光照强度的影响较高CO_2浓度时明显,一般雨林植物三项指标在光照强度为500μmol·m~(-2)·s~(-1)时达到饱和,而荒漠植物在1000μmol·m~(-2)·s~(-1)时达到饱和。不同植物中,以荒漠C_3植物粉蓝烟草(Nicotiana glau-ca Grah.)的气孔导度、蒸腾速率和水分利用效率