B7-2胚胎性癌细胞诱导分化过程中的表型转变

胚胎性癌细胞(简称EC细胞)作为一类肿瘤(畸胎瘤)的干细胞近年受到广泛的重视,从胚胎学、肿瘤学和分子生物学等许多学科领域都应用它作为实验材料,离体诱导分化研究是其中的一个方面。B 7-2 EC细胞是我们从129品系小鼠的自发睾丸畸胎瘤中分离克隆得到的一株多能EC细胞,它在同种同基因小鼠     

B7-2小鼠胚胎癌细胞的无血清培养

本文报道以RPMI-1640,DMEM和HAM/F 12人工培养基做基础培液,加入牛血清白蛋白、胰岛素和转铁蛋白等物质,发展了一种无血清(B7-85)培液。在B7-85液中,B7—2EC细胞生长速率虽略低于含10％小牛血清常规培液,但细胞形态、生长行为和在同系宿主体内的长瘤率及分化潜能,均未发现存在区别。因此,B7-85液是适于B7-2EC细胞生长的无血清人工培液。这种人工培液中除胰岛素外,没有人为地增添外源性多肽生长因子,这将有利于分析B7-2EC细胞和其分化细胞产生的内源性生长因子。     

体外小鼠胚胎性癌细胞BEC-B7建株和特性

恶性畸胎癌干细胞又叫做胚胎性癌细胞(简称EC细胞),是一种来自生殖细胞或早期胚胎细胞的恶性癌细胞,不仅具有类似于早期胚胎细胞分化多能性,而且能在一定条件下失去恶性生长性质,分化为各个胚层的正常组织。EC细胞是开展哺乳类胚胎早期发育遗传以及癌变和癌细胞分化研究较好的实验材料。EC细胞在体外可以大量培养生长,较之正常胚胎细胞更容易获取。我们在建立体内腹     

胚胎癌细胞体外诱导分化

小鼠胚胎癌细胞(embryonal carcinomacells,简称EC细胞)与早期多能性胚胎细胞具有许多生物学共性。目前已分离和克隆了许多EC细胞株,其中大多数移植到同系宿主体内后,形成癌块中除了EC细胞外,常混杂有各种类型的分化组织,这种癌块称为畸胎癌     

小鼠胚胎癌细胞来源的分化细胞合成IGF-Ⅱ

胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)是一种促有丝分裂多肽,对哺乳类胚胎生长和发育起着重要作用。然而,在早期胚胎发育阶段,有关这种生长因子的产生、功能及其对胚胎细胞生长、分化的调节作用所知甚少。本文用纯化大鼠8.5 KDa增殖刺激活性因子(multiplicationstimulating activity,MSA)作免疫原,制备了多克隆抗体。以同位素在体外代谢标记PC 13小鼠多能胚胎癌(EC)细胞及其经维生素A酸(RA)诱导分化的内胚层样END细胞,在分化的PC 13 END细胞培液中检测到与IGF-Ⅱ抗体起免疫沉淀的物质,而未分化的PC 13 EC细胞并不分泌这种物质,证明了从EC细胞来源的分化细胞能合成和分泌IGF-Ⅱ蛋白。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,这种免疫沉淀物质为分子量35 KDa和14-15 KDa的三种形式蛋白。35 KDa分子可能是一种IGF_Ⅱ前体蛋白或具IGF-Ⅱ专一性的载体蛋白。用免疫酶染色方法,在另一株多能B 7-2 EC克隆细胞中,同样证明经环六亚甲基双乙酰胺(HMBA)诱导分化的内胚层样细胞的胞质中染有与IGF-Ⅱ抗体起反应的物质;而且在HMBA诱导处理24小时即已出现这种染色反应。随着药物处理时间延长,除了细胞形态进一步呈梭形和细胞质突起更显著外,免疫反应强度未见有明显变化,表明IGF-Ⅱ的合成在EC细胞诱导分化的较早阶段就开始。根据这些结果,推测早期胚胎发育中内胚层细胞可能产生和分泌IGF-Ⅱ蛋白。     

F9-1胚胎癌细胞与大鼠胸腺细胞杂交产生分化细胞

利用抗8氮鸟嘌呤的F9-1 aza突变株细胞与大鼠胸腺细胞融合,在HAT培养基中成功地筛选到FRT杂交细胞。该种细胞与亲本细胞F9-1 aza的细胞形态完全不同,呈成纤维样、上皮样、圆形或多突起样的分化细胞形态。在扩大繁殖后主要为成纤维样或上皮样细胞。对其中一个集落FRT-1核型检查表明杂种细胞染色体众数为80(范围62—88),C分带显示??包含F9和大鼠胸腺细胞二个亲本的染色体。FRT-1细胞的乳酸脱氢酶图谱中出现由大鼠LDH-A亚基与小鼠LDH-A亚基组成的杂种酶带。该细胞接种到经x光照射的129/Sv-ter小鼠皮下不能长瘤,亦不能在软琼脂上生长,表明F9-1 aza细胞的恶性表型已受到大鼠胸腺细胞基因组的抑制。     

体外小鼠胚胎性癌细胞BEC—B_7建系和特性

BEC—B_7胚胎性癌细胞 (Embryonal Carcinoma cells,简称EC细胞)是来自129/SV纯系小鼠自发睾丸畸胎癌,经同系小鼠腹腔传至第七代的血性腹水畸胎癌细胞,建株于1981年9月。培养方法是在无菌条件下取出含癌细胞的血性腹水,经自然沉降取得的EC细     

体内微环境对B7-2EC克隆细胞株分化的影响

在发育生物学领域中,微环境对早期胚胎纽胞的分化,对造血系统干细胞的分化都能产生影响,这已是人所共知的事实。小鼠胚胎性癌细胞(EC细胞)是一种研究细胞恶变和细胞分化很好的材料,它可以在某些品系小鼠中自发地产生,也可由小鼠早期胚胎细胞或原始生殖嵴细胞经异位移植而获得,但移植的位置不同,生瘤率也不同。EC细胞一般分为无能和多能性两种:无能EC细胞如F9在体内接种后不能分化为各种体细胞,保持着癌细胞恶性生长的特点,而多能EC细胞接种到     

环六亚甲基双乙酰胺对小鼠畸胎癌B7-2克隆细胞的诱导分化

近年来,有不少研究工作者报道了用化学物质诱导恶性癌细胞进行有限的分化。这类物质主要有维生素A酸(RA),丁酸钠(Na-butyrare),二甲基亚砜(DM-SO),环腺嘌呤核苷酸(c-AMP)以及环六亚甲基双乙酰胺(hexamethylene bisaceta-mide,HMBA)等,它们能使癌细胞恶性表型受到抑制,并向一定类型的体细胞分化。HMBA最早用于研究小鼠红白血病细胞的诱导分化,并为研究珠蛋白基因表达提供了很好的实验模型。随后,Jakob等     

维生素A酸诱导小鼠F9-1胚胎性癌细胞分化过程中蛋白质的变化

本文报道了用双向凝胶电泳和彩色银染技术,分析小鼠F9-1胚胎性癌细胞在维生素A酸诱导分化过程中蛋白质的变化。发现维生素A酸处理细胞72小时后,全细胞蛋白质中有9种蛋白质消失,而新出现11种蛋白质。对细胞核蛋白质进行了双向电泳分析,观察到诱导分化后新出现8种蛋白质,其中有一些与全细胞蛋白质图谱上出现的变化完全对应。对核内低迁移率非组蛋白的分析发现,经维生素A酸处理后,一些低迁移率非组蛋白消失。蛋白质的这些变化可能与维生素A酸诱导细胞分化过程中基因活性的变化有关。     

维生素A酸诱导小鼠F9胚胎性癌细胞分化的超微结构观察

恶性肿瘤细胞具有迅速增殖和分化阻滞的特点。胚胎性癌细胞(简称EC细胞)是恶性畸胎瘤的干细胞,具有恶性生长和未分化早期胚胎细胞的性质。就发育潜能而言,F9 EC细胞曾被认为是无能的;但近年来不少证据表明,这类细胞可被维生素A酸(简称RA)诱导而分化为内胚层样细胞和其他细胞。用生化和免疫学     

RA和DMSO对鼠胚胎癌细胞的诱导分化

胚胎癌(EC)细胞是来自畸胎癌的多能干细胞。鼠胚胎癌细胞系P_(19)可以被维生素A酸(RA)或DMSO诱导分化。单个EC细胞能增殖形成肉眼可见的集落,其集落形成率高达40-70％;而在同样条件下,分化细胞的集落形成率却非常低(一般小于10~(-6))。已经证实在分化过程的早期就有集落形成能力的丧失;同时,分化培养中的平皿效率已被用来测定未     

胚胎性干细胞定向诱导分化——新崛起的细胞T程

胚胎性干细胞(ES细胞)是一类稳定地在体外自我增殖、具有发育全能性和产生属于三个胚层范畴分化细胞、甚至参与体内个体完整发育的早期胚胎细胞。包括人类在内的各种哺乳类ES细胞分离建系成功,结合体外基因操作和细胞分化诱导条件选择等综合途径,有可能控制ES细胞导向产生单一类型的功能性分化细胞。这种全能ES细胞生物学技术已成为一项新崛起的细胞工程。在新世纪10-15年内将对分子细胞生物学、发育生物学和人体胚胎学等基础科学以及人类健康相关的细胞治疗和组织工程有着重大影响和推动作用。     

小鼠胚胎性癌细胞研究的一些近况

胚胎性癌细胞(Embryonal Carcinoma,简称EC细胞)是畸胎癌的恶性干细胞,它既有恶性生长性质,又有类似于早期正常胚胎细胞的多能性,能分化为神经、皮肤、肌肉、软骨和腺管等组织。EC细胞注射到同系小鼠腹腔后,可在腹水中分化并聚积成结构类似于早期胚胎的细胞群,称为拟胚体。     

小鼠胚胎癌及其分化细胞的细胞光度法分析

HMBAA对小鼠胚胎癌细胞的生长和DNA合成均有抑制作用。经过诱导分化后,癌细胞DNA含量平均值增加,这部分由于含多异倍体值的细胞数增多所致,同时含40条染色体的细胞数减少,而含60条以上染色体的细胞数增加,结果说明,胚胎癌的分化细胞虽然发生形态改变,并非就是正常细胞。     

哺乳动物早期胚胎细胞的极性与分化

哺乳动物早期胚胎细胞具有极性,在桑椹胚以前细胞极性由不稳定变为稳定。细胞极性包括表面极性和细胞质极性。细胞极性与滋养层和内细胞团两种细胞系的建立密切相关。细胞的极化使细胞形成顶-基轴,细胞分裂后,顶半球产生的极性子细胞分化为滋养层,基半球产生的非极性子细胞建立了内细胞团。内细胞团偏向胚泡一侧,使胚胎形成了胚-对胚轴(EA轴)。细胞分化是许多因素的综合效应,不能简单地归结为决定子的单独作用。     

细胞原癌基因在小鼠胚胎癌细胞中的表达

近些年来,细胞原癌基因(cellular onco-gene)的发现和大量研究,使人们相信这类基因的产物在早期胚胎发育过程中有着十分重要的功能,因而它们在转录水平上的变化也特别受到注意。胚胎癌细胞(embryonal carci-noma cell,简称EC细胞)是一类与早期胚胎细胞相类似的恶性细胞,具有多种分化潜能,     

一个小鼠未分化胚胎癌细胞特异cDNA的分子克隆

用胚胎癌细胞株(EC)PCC_3,的poly(A)~+RNA及质粒pBR 322在大肠杆菌中建立了一个eDNA文库。用另一株EC细胞F(?)及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM_1的~(32)PcDNA作探针,对PCC_3 eDNA文库作了差别筛选。自3,000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS,含有长250bp的cDNA。用MS,cDNA作探针,在F(?)细胞中能检出1个占poly(A)~+RNA约0.2—0.4％、长6kb的RNA(MS_3RNA)。用点印迹杂交及Northern印迹杂交分析法,证明MS_3RNA还存在于供试的另2株未分化EC细胞株PCC_3、PSA_1-NG_2中。在供试的全部分化细胞株,即TDM_1、PSA_1-2、3/A/1-D3、C_(17)-S_1-T(284)中,均查不到MS_3RNA。用Southern印迹杂交分析法,证明MS_3基因在小鼠基因组中存在着大量的拷贝,对小鼠胚胎基因文库的筛选表明,MS_3基因有一个中等重复的基因家族,这个家族在小鼠基因组中约有3,000个成员。     

维生素A酸诱导小鼠胚胎性癌细胞分化过程中核仁形成区的变化

采用一步银染技术,发现维生素酸诱导小鼠F₉, F_9-1 胚胎性癌细胞分化过程中,核仁形成区的数目有变化。F、细胞Ag-NORs数目的增多发生在72-96小时;而细胞则发生在96小时。设计的撤药试验结果证明,分裂中期银染NOR的变化,反映的是前一个间期NOR的活性。     

Cdc25B蛋白过表达可使小鼠胚胎突破2-细胞期阻滞

目的：探讨Cdc25B蛋白过表达对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响。方法：利用体外转录试剂盒将Cdc25B转录成mRNA,将mRNA显微注射入小鼠2-细胞期胚胎中,观察胚胎发育情况和卵裂率。用蛋白激酶活性测定方法和Western印迹分别检测Cdc25B蛋白过表达小鼠胚胎MPF的活性及Cdc2-Tyr15的磷酸化状态。结果：hCG后48 h,mRNA注射组有超过40%的2-细胞期胚胎分裂到4-细胞期而对照组仍停留在2-细胞期;激酶活性测定显示注射Cdc25B mRNA后,MPF的活性显著升高;Cdc2-Tyr15的磷酸化状态变化与激酶活性测定结果一致。结论：Cdc25B蛋白过表达可以激活有丝分裂促进因子（MPF）,从而使小鼠2-细胞期胚胎突破2-细胞期阻滞,发育到4-细胞期。