商陆根中抗真菌蛋白的分离和特性研究

从美洲商陆(Phytolacca americana L.)夏天采集的2—4年生宿根中分离了二种抗真菌蛋白,称为PAFP-R_1和PAFP-R_2。分离程序包括用盐溶液提取,经CM-Sephadex离子交换层析、凝胶过滤层析和羟基磷灰石柱层析纯化。在PGA培养基上,0.1mg/ml蛋白明显抑制木霉菌丝的生长;但对细菌的增殖,即使1mg/ml也无抑制作用。用SDS-PAGE测得二者的相对分子量各为13kD和15kD,单多肽链,等电点约为5.8。用酚-硫酸法未测出含糖。二种蛋白均高含半胱氨酸(19mol/mol)。用Edman降解法测得二者的N末端均为Ala。秋天采集的根中,这二种蛋白含量均很低,但富含由二条PAFP-R_1肽链以双硫键联结的二聚体,它无抗真菌活性。冬天宿根中抗真菌蛋白主要成分是Mr为17kD的单肽链蛋白。上述蛋白对于人红血球均无凝集活性,因此不是PWM的成分。以上结果说明,商陆根中有多种具抗真菌活性的蛋白,成分随季节发生变化,它们都是不含糖,高含半胱氨酸,分子量小于20kD的单肽链蛋白。     

天麻球茎中一种抗真菌蛋白的分离和部分特性

白天麻(Gastrodia elata)顶生球茎中分离并纯化了一种抗真菌蛋白(Gastrodia Antifungal Protein),简称GAFP。在马铃薯葡糖琼脂培养基上,4μg GAFP滴加在直径0.6 cm圆纸片上可明显抑制木霉(Trichoderma reesei)菌丝生长。从每千克鲜球茎中可分离得GAFP约20 mg。用SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得该蛋白为单多肽链,分子量14.0kD;用离子交换结合法测得电点为8.1;富含Asn,Ala,Gly和Leu,但无Met,Cys和Pro。未经热变性或SDS处理的GAFP与考马氏亮蓝试剂不发生显色反应。GAFP不具有几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。球茎外层组织富含这种蛋白,内层薄壁组织无此蛋白。认为GAFP在阻止真菌侵染当年生顶生和侧生球茎的防卫机制中起重要作用。     

杜仲抗真菌蛋白晶体生长的原子力显微成像研究——快速生长与晶面生长速率

杜仲抗真菌蛋白(Eucommiaantifungalprotein,EAFP)的单晶体具有在几小时内就可长大的快速生长特性.用原子力显微成像(atomicforcemicroscope,AFM)技术,原位实时观测了EAFP单斜晶体生长过程中的｛10 0｝表面形貌动态变化,并分别在不同的过饱和度下测量了其生长速率.结果表明,EAFP晶体生长的速率与蛋白质溶液的过饱和度相关,在过饱和度高时(σ =1 78)晶面生长极快;在中等过饱和度(σ =1 5)下,其晶面台阶的生长速率沿b,c方向分别为 12nm/s和 2 4 2nm/s,比溶菌酶生长速率(6～ 7nm/s)快很多;在蛋白质浓度很低的情况下,其生长速率仍与其他蛋白质相当.EAFP晶体快速生长可能与该分子尺寸较小,内部结构紧凑,分子骨架呈刚性和分子表面性质等其固有特性密切相关.沉淀剂浓度对EAFP晶体生长也有影响.过饱和度很低时,提高沉淀剂浓度会干扰晶体生长.     

小黑麦抗真菌蛋白组分的分离纯化和性质研究

以木霉为指示菌,小黑麦中饲237种子中的蛋白提取物经过分离纯化后,得到了3种主要的抗真菌蛋白组分,经酶活检测鉴定,分别是分子量为30.5 kD的ClassⅡ型几丁质酶,两种分子量为51kD和23 kD的β-1,3-葡聚糖酶。其中几丁质酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为37℃,测定的N末端氨基酸序列与大麦几丁质酶的有很高的同源性。在一定条件下,这3种蛋白组分都有较强的抗木霉活性,并且有明显的协同作用,同时它们对离体易感小麦叶片上白粉菌有很好的生长抑制作用。     

抗真菌蛋白研究进展

对几种抗真菌蛋白 :病程相关蛋白、防卫素、核糖体失活蛋白、几丁质连接蛋白、蛋白酶抑制剂等的类型、特征、抗菌菌机理进行了阐述 ,着重讨论了病程相关蛋白和核糖体失活蛋白的最新研究进展 ,并且讨论了抗真菌蛋白在植物真菌病害综合防治中的应用前景。     

棕榈花序中抗真菌蛋白质的分离及特性

棕榈花序用盐溶液提取,硫酸铵沉淀,透析,DEAE—Cellulose DE—52离子交换,超滤,再经 Ultrostl AcA—44柱过滤,上 Bio—Gel P—6柱后,分离到一个相对分子量为25.6 kD的蛋白质(TP—1)。TP—1在浓度低于1.0mg/ml即可明显抑制绿色木霉菌丝的生长,对赤霉菌、棉花枯萎菌及稻瘟菌都有抑制作用。TP—1无几丁酶和β—1,3—葡聚糖酶活性.也无血球凝集活性。但经蒽酮法及PAS反应证明是一个糖蛋白。氨基酸成分分析表明,TP—1富含A_(sD)、Gly、Ala和Leu。     

编码天麻抗真菌蛋白cDNA的分子克隆

用重组ＤＮＡ 技术研究了编码天麻抗真菌蛋白（ＧＡＦＰ）的基因,从天麻（Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａＢｌ．）块茎中提取Ｐｏｌｙ（Ａ） ｍ ＲＮＡ 后合成ｃＤＮＡ,构建成表达型ｃＤＮＡ 文库,用纯化的蛋白质探针通过免疫筛选找出对应的ｃＤＮＡ 克隆。在进一步证明所选用的ｃＤＮＡ 克隆含有重组的λ－ｐｈａｇｅ ＤＮＡ 后,提取和纯化含有插入片段重组子的ＤＮＡ,用Ｅｃｏ ＲＩ酶切分析可见插入片段。已分离出编码天麻抗真菌蛋白的基因     

小G蛋白抑制剂CASIN的体外抗真菌活性研究CSCD

目的通过对小G蛋白抑制剂体外抗真菌活性的测定,筛选具有新结构类型的抗真菌活性化合物。方法采用微量液基稀释法考察不同小G蛋白抑制剂对于念珠菌的最低抑菌浓度(MIC),并从中筛选活性较强的化合物进一步进行抗真菌谱测定;采用时间-生长曲线和时间-杀菌曲线考察CASIN对于白念珠菌生长增殖的影响;采用菌丝诱导实验考察化合物CASIN对于白念珠菌菌丝形成的抑制效果;采用甲基四氮盐(XTT)法考察化合物CASIN对于白念珠菌生物被膜形成的抑制作用。结果在考察的小G蛋白抑制剂中,CASIN的体外抗真菌活性最强,对于近平滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌中均有较好的抑制作用,MIC为8~16μg/mL。16μg/mL CASIN可以有效抑制YPD培养基中白念珠菌的生长增殖,也在RPMI1640培养基中展现出对白念珠菌的杀菌活性;当培养基中CASIN浓度高于8μg/mL时,白念珠菌菌丝受到明显抑制;此外,8μg/mL的CASIN浓度对于白念珠菌的被膜生成具有80%以上的抑制率。结论小G蛋白抑制剂CASIN具有较强的体外抗念珠菌活性。     

杜仲化学成分研究概况

本文综述了杜仲的药理、临床应用及其木质素类成分的结构类型及主要类型的结构测定方法。     

几种外源激素对杜仲剥皮再生的影响

杜仲剥皮后,在暴露表面,分别涂以适当浓度的乙烯利、2,4-D、萘乙酸(NAA)和赤霉素(GA),以及 NAA GA 等植物激素,可看到不同的反应。发现用2,4-D、GA 和 NAA处理的,木栓形成层和维管形成层的发生都早于对照,而用乙烯利处理的,只是木栓形成层的发生提早。只有用 NAA 处理的,木栓形成层和维管形成层的发生都与对照相似。     

杜仲中环烯醚萜类化合物的提取工艺研究

本文研究了杜仲中具有生物活性的环烯醚萜类化合物的最佳提取工艺。采用正交设计表L16(4^5),以提取时间、提取温度、提取次数、提取剂A的浓度及料液比为因素进行实验优化。桃叶珊瑚甙的含量由分光光度法测得,京尼平甙酸和京尼平甙的含量通过高效液相色谱法测定。根据试验结果,提取桃叶珊瑚甙的最佳工艺是：70℃下提取三次,每次0．5小时,溶剂A的浓度为80％,料液比为1：12。而京尼平甙和京尼平甙酸的最佳提取工艺为：在70℃下提取一次,提取时间为1小时,溶剂A的浓度为50％,料液比也为1：12。在此工艺条件下,选取了较佳的提取原料。实验表明在实际应用中,应根据提取目标和原材料选择较好的提取工艺。     

杜仲,秤锤树花粉的超低温贮藏研究

本文研究了影响杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)和秤锤树(Sinojackia xylocarpa Hu.)花粉超低温贮藏的一些因素,包括花粉含水量、贮藏时间、冻解方法等。利用差热分析(DTA)技术预测花粉在液氮(LN)中安全贮藏含水量的范围。结果表明,含水量的影响最显著。DTA 有望用于预测花粉在 LN 中安全贮藏含水量的范围。     

类产碱假单胞菌杀虫物质的分离纯化和鉴定

类产碱假单胞菌是一株昆虫病原菌,该菌对草地蝗虫、竹蝗等具有良好的致死作用,经鉴定,该菌对蝗虫具有毒杀作用的物质为其代谢分泌到胞外的一种蛋白质。类产碱假单胞菌培养物经硫酸按沉淀,SephadexG-100凝胶过滤及DEAE-SephadexA-50阴离子交换柱层析,纯化获得的杀虫蛋白只含一种亚基,分子量25100,等电点5．16,含17种氨基酸,其中谷氨酸含量最高,胱氨酸含量最低,最大吸收峰为278．3nm。     

杜仲光合特性的研究

杜仲（Ｅｕｃｏｍ ｍｉａ ｕｌｍ ｏｉｄｅｓＯｌｉｖ．）叶片的光饱和光合速率为６～１０ μｍ ｏｌＣＯ２·ｍ － ２·ｓ－ １,表观光合量子需要量最低约为１７。光合作用的ＣＯ２ 补偿点略大于１００ μｍ ｏｌＣＯ２·ｍ ｏｌ－ １,属Ｃ３ 型光合作用类型。其光合日变化有明显的中午降低现象,降低的原因除气孔限制外可能还有光抑制等其它因素。光合作用进行时光合产物只有约１４％ 输出叶片     

杜仲胚发育过程的研究

西安地区栽培杜仲,4月中旬传粉,下旬受精。合子休眠35天左右。6月初形成原胚,6—8月胚分化发育,10月种子成熟。合子在休眠期,其体积增长1—1.5倍,极性渐显著。合子经两次横分裂,形成线形排列的四细胞原胚。其后基细胞衍生的细胞参与胚体的形成,胚的发育属藜型。胚柄单列细胞,靠珠孔端一个形大,具吸器作用。胚的后期发育与一般双子叶植物相同。