利用细胞融合研制的癌疫苗进入临床试验

《日经生物技术》2000年4月24日号第7页报道：东经兹惠会医科大学DNA医学研究所所长大野典也等近期宣布,2000年开始进行用细胞融合技术研制的癌疫苗的临床试验。对象为脑肿瘤、乳腺癌等。兹惠医大开始临床试验的是融合了患者树状细胞和在实验室内经灭活处理的患者癌细胞。树状细胞具有活化免疫系统的能力,如果给患者导入该融合细胞,就能增强患者对癌症的免疫反应。 这项技术是美国Dana-Farberai癌研究所癌药理部主任Donald Kufe开发的。兹惠医大与Kufe共同进行了研究。 美国G-enzyme Molecular Oncology公司与美国Dana-Farberai癌研究所就树状细胞/癌细胞融合技术签订了特许合同,在美国从1999年就开始以乳腺癌为对象进行了工期临床试验(参见日经生物技术99年9月27日号11页)。兹惠医大开始的临床试验与Genzyme公司无关,是单独进行的。孙国凤     

明治乳品公司用癌细胞培养法进行乙肝疫苗临床试验

明治乳品公司从1986年12月开始了乙型肝炎疫苗的临床试验。这种疫苗是该公司癌研究所基因研究设施部部长小池克郎和千叶血清研究所合作研制的。利用能分泌乙肝表面抗原、来源于人肝癌的培养细胞进行乙肝疫苗的生产。     

狂犬疫苗单克隆抗体制备过程中细胞融合条件的探索

在充分了解SP2/0细胞系的生长、增殖和遗传特性后,以聚乙二醇(PEG)诱导动物细胞融合为契机,意在探索不同分子量、不同浓度的PEG作融合剂对诱导SP2/0细胞与脾细胞融合的最适条件,在HAT选择培养基下通过细胞融合率的变化进行比较。结果表明,分子量为4000,浓度为50%的PEG诱导的细胞融合率最高,为下一步制备狂犬病毒疫苗单克隆抗体奠定基础。     

Mg^2＋浓度对细胞融合效果的影响

目的：细胞融合是细胞生物学中一种常用的技术,有着广泛的应用,如单克隆抗体制备,核质研究,疫苗研发等。其中,聚乙二醇（PEG）化学融合是最为常用的一种细胞融合技术,影响PEG化学细胞融合效果的因素有很多,但是对一些具体因素的研究的不是很全面。本文旨在为了更全面的了解PEG诱导的化学细胞融合的影响因素,优化融合条件,以此扩大PEG化学融合应用范围。方法：以鸡血血红细胞为材料,通过调节已有的Hanks融合液中镁离子浓度,比较各实验组以及对照组的细胞融合率,探究了Mg^2＋浓度对细胞融合效果的影响,确定了为提高细胞融合效率应使用的Mg^2＋浓度区间。结果：可以在原有的Hanks配方的基础上,调节Mg^2＋浓度至10 mmol/L-20 mmol/L这个范围,细胞融合率较大。结论：Mg^2＋对细胞融合有一定影响,通过调节Mg^2＋浓度至上述合适区间可以达到较高的细胞融合率,从而为PEG化学融合提供了一种优化方案。     

Mg2+浓度对细胞融合效果的影响

目的:细胞融合是细胞生物学中一种常用的技术,有着广泛的应用,如单克隆抗体制备,核质研究,疫苗研发等.其中,聚乙二醇(PEG)化学融合是最为常用的一种细胞融合技术,影响PEG化学细胞融合效果的因素有很多,但是对一些具体因素的研究的不是很全面.本文旨在为了更全面的了解PEG诱导的化学细胞融合的影响因素,优化融合条件,以此扩大PEG化学融合应用范围.方法:以鸡血血红细胞为材料,通过调节已有的Hanks融合液中镁离子浓度,比较各实验组以及对照组的细胞融合率,探究了Mg2+浓度对细胞融合效果的影响,确定了为提高细胞融合效率应使用的Mg2+浓度区间.结果:可以在原有的Hanks配方的基础上,调节Mg2+浓度至10 mmol/L-20 mmol/L这个范围,细胞融合率较大.结论:Mg2+对细胞融合有一定影响,通过调节Mg2+浓度至上述合适区间可以达到较高的细胞融合率,从而为PEG化学融合提供了一种优化方案.     

葡萄糖浓度对细胞融合效果的影响

目的:细胞融合是细胞生物学领域近30年来得到迅速发展的一项新兴技术手段,因其操作简便、人工可控等优点在研究核质互作、肿瘤发生、疫苗研发和培育新型生物品种等方面均有广泛应用。其中,利用聚乙二醇(PEG)进行化学融合是细胞融合中最为常用且简便的技术手段。PEG化学融合效果受到多种因素影响,如PEG浓度、Ca2+、Mg2+、pH值等,然而对于糖类物质在细胞融合中的影响未见报道。本文旨在为了更全面了解PEG法诱导的化学细胞融合,通过优化融合条件以提高化学细胞融合效率。方法:选取鸡血血细胞为材料,通过改变原Hanks缓冲液中葡萄糖浓度,观察比较各组细胞融合率,探究葡萄糖浓度在化学细胞融合中的影响,并通过对比结果获得了对于鸡血血细胞应采用的最适葡萄糖浓度区间。结果:对于鸡血血细胞融合实验,葡萄糖浓度在10-14 mmol/L范围内细胞融合效率较原Hanks液配方高2倍左右。结论:葡萄糖对细胞融合效果具有一定的影响,可以通过调节葡萄糖浓度提高细胞融合率,从而为PEG化学细胞融合提供一种更为优化的方案。     

以单细胞免疫荧光技术观察烟草细胞融合过程中微管骨架的变化

本文建立了单细胞免疫荧光标记技术并以此结合单对细胞融合技术对细胞融合过程中微管骨架组织形式的动态变化进行了追踪观察。发现在聚乙二醇(PEG)诱导条件下,一旦细胞开始粘连,细胞内微管骨架便开始解聚。在细胞融合的整个过程中一直维持着这种解聚的状态,直到融合完成,在后续的培养中微管骨架才重新出现。在微管骨架呈解聚状态时融合产物不能完成与另外的细胞融合。实验揭示了细胞的再融合能力可能受细胞本身微管骨架状态的影响。该结果为解释高等植物如何避免多精入卵提供了新的可能性。     

以单细胞免疫荧光技术观察烟草细胞融合过程中微管骨架的变化

本文建立了单细胞免疫荧光标记技术并以此结合单对细胞融合技术对细胞融合过程中微管骨架组织形式的动态变化进行了追踪观察。发现在聚乙二醇（PEG）诱导条件下,一旦细胞开始粘连,细胞内微管骨架便开始解聚。在细胞融合的整个过程中一直维持着这种解聚的状态,直到融合完成,在后续的培养中微管骨架才重新出现。在微管骨架呈解聚状态时融合产物不能完成与另外的细胞融合。实验揭示了细胞的再融合能力可能受细胞本身微管骨架状态的影响。该结果为解释高等植物如何避免多精入卵提供了新的可能性。     

细胞融合百合新品种

日本《农业技术》 ,2 0 0 0年 55卷 6期第 4～ 5页报道 :日本北海道绿色生物研究所研究部采用细胞融合技术培育百合新品种 ,首先 ,确立原生质体培养系 ,对刚玉杂种、辛特黄百合各 12个品种原生质体培养系进行研究。结果表明 ,都能确立原生质体的分离、分裂、再分化培养系。其次 ,用电融合法对辛特黄百合 1个品种与刚玉杂种 2个品种进行细胞融合 ,得到的再分化个体均在温室育成。对于融合个体、非融合个体的判定 ,待这些再分化个体开花 ,先进行形态的确认 ,再通过ＰＣＲ和限制酶多型鉴定确认 ,结果表明 ,2个组合都获得融合个体。在具有粉红花…     

兔网织红细胞与K562细胞胞杂交体（K—RRneo）核基质—中间纤维体系…

本文利用脂质体转基因技术与细胞融合相结合的方法所建立的杂交细胞为研究对象,采用选择性多步抽提配合整装电镜及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析等技术,系统观察了兔网织红细胞,人红白血病Ｋ５６２细胞及两者融合形成的胞质杂交体Ｋ－ＲＲｎｅｏ细胞的核基质－中间纤维体系结构,着重分析比较了它们之间的胞质波形蛋白纤维成分的变化。实验结果表明：Ｋ５６２细胞的中间纤维为放射状分布,核纤层为网层状,兔网织红细胞胞质中间纤维胞质     

生物工程技术讲座(四)

高等生物细胞融合技术高等生物细胞的融合技术开始于六十年代。最初用日本血凝病毒(HVJ,也称做仙台病毒)融合动物细胞,以后相继开展了以PEG融合高等植物和微生物的原生质体技术。     

表达新城疫病毒HN基因的重组火鸡疱疹病毒的构建

应用聚合酶链反应技术,用设计带有限制性酶切位点的引物,特异地扩增从起始密码子开始的１ ．８ ｋｂ 新城疫病毒（ Ｎ Ｄ Ｖ） 血凝素神经氨酸酶（ Ｈ Ｎ） 基因开放式阅读框,然后插入ｐ Ｔ Ｋ２ Ｂ 的 Ｎｈｅ Ⅰ位点,构建了含 Ｎ Ｄ Ｖ Ｈ Ｎ 基因的插入载体ｐ Ｔ Ｋ Ｈ Ｎ１ 和ｐ Ｔ Ｋ Ｈ Ｎ２ ,再与感染火鸡疱疹病毒（ Ｈ Ｖ Ｔ） 细胞的总 Ｄ Ｎ Ａ 共转染鸡胚成纤维细胞（ Ｃ Ｅ Ｆ） ,经有限稀释法和 Ｄｏｔｂｌｏｔ 筛选,得到含有 Ｈ Ｎ 基因的重组体ｒ Ｈ Ｖ Ｔ１ 和ｒ Ｈ Ｖ Ｔ２ 。经组织培养传代和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析,表明重组体在感染细胞中表达了 Ｈ Ｎ 蛋白。重组体在 Ｃ Ｅ Ｆ 上的生长特性与亲本病毒相同,且在连续传代过程中保持稳定。为国内新城疫基因工程疫苗研制奠定了基础。     

Cytel计划试验乙型肝炎疫苗

由 Cytel Corp.(Sun Diego,CA)和 Scripps Research Institute(La Jolla,CA)合资经营的 Sequel Therapeutics 已经向美国 FDA 提出申请(CY1899号),拟将其研制的新药(IND)(一种慢性乙型肝炎疫苗)用于人体试验,如果 FDA 完全同意的话,该公司将于近期开始进行临床试验。通过引入的肝炎疫苗片段刺激细胞毒素 T 细胞对巨噬细胞上的主要组织相容性复合物(MHC)超反应,从而设计了上述疫苗,该疫苗可激发细胞毒素 T 细胞的应答。细胞毒素 T 细胞是免疫系统中能够     

单克隆抗体技术简介

1980年,人-人B淋巴细胞杂交瘤融合成功,获得人的特异性单克隆抗体。它可以避免动物外源蛋白在人体内的过敏反应,用于人类疾病的诊断和治疗。今将制备技术及其在医学方面的应用简介如下: 1.制备技术与原理制备技术关键是细胞融合与融合细胞的培养、抗体筛检与细胞克隆化两步。细胞融合与融合细胞的培养取新制备的脾细胞悬液和处于生长对数期的鼠骨髓细胞悬液(活率均须>95％),按2∶1—10∶1(脾细胞∶骨     

细胞融合教学实验的改进

细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。所谓细胞融合 ( cell fusion)又称体细胞杂交 ,是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成 1个双核或多核细胞 ,不经有性过程而得到杂种细胞。自细胞融合技术 ( Barski,1961)创建至今 ,依据融合过程采用的助融剂的不同可分为 :1)病毒诱导的细胞融合 ;2 )化学因子诱导的细胞融合 ;3 )电场诱导的细胞融合 ,此外还有激光诱导的细胞融合。在保证助融剂及操作技巧的前提下 ,细胞融合成功与否及融合率取决于实验所选择的亲代细胞。目前 ,普通高等院校和高等医学院校…     

藻类原生质体融合和细胞杂交技术

细胞融合技术是一项迅速发展的细胞工程技术,是细胞工程研究的重要内容之一。自20世纪80年代开始,细胞融合技术开始应用于藻类原生质体融合,至今已在多种藻类中开展了细胞融合及杂种培育试验。综述了在藻类细胞融合技术中常用的方法:化学融合法、电融合法、激光融合法,以及在藻类细胞融合中的最新研究进展,并对目前在藻类细胞融合研究中的困难进行简要的评述。     

1999年FDA批准上市的生物制品

1999年 ,美国食品药品管理局 (ＦＤＡ)共批准 2 2种生物技术新药、疫苗或老药新适应证产品上市 ,其中首次上市的生物制品 5种[1 ] 。这样 ,从 1982年到 1999年 ,美国ＦＤＡ批准上市的生物技术药物和疫苗达到 92种 ,加上老药的新适应证 ,则总计 14 3种 (图 1)。在过去的 5年中 ,ＦＤＡ批准上市的生物制品是前 13年上市产品总和的 2倍。另外 ,尚有 3 5 0种用于心脏病、神经系统疾病和传染病等的生物制品正在进行临床试验。虽然生物技术工业只有四分之一世纪的历史 ,绝大多数的生物制品是 2 0世纪 90年代后半叶批准上市 ,但是 ,它们已经造福了…     

白细胞介素12的研究进展

白细胞介素１２（ＩＬ－１２）是由巨噬细胞和Ｂ淋巴细胞等产生的糖蛋白类细胞因子,由４０ｋＤ和３５ｋＤ两个亚基组成。ＩＬ－１２能促进Ｔｈｌ细胞的分化与增殖,控制细胞介导免疫;促进Ｔ淋巴细胞、ＮＫ细胞的发育与增殖,并刺激这些细胞产生ＩＦＮ－γ;增强ＮＫ细胞和细胞毒淋巴细胞的细胞毒活性以及ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞的活力。ＩＬ－１２在培育新疫苗、防治利什曼病和ＡＩＤＳ等免疫系统疾病及肿瘤的免疫治疗中,有着广阔     

基因疗法可望用于防治炭疽病

ＳｃｉｅｎｃｅＮｅｗｓ 2 0 0 1年 16 0卷 14期 2 12页报道 :目前对炭疽杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ)毒素的防范主要依靠抗生素和疫苗。但抗生素虽可杀死炭疽杆菌 ,而对症状出现时已存在于体内的毒素则无能为力。疫苗虽有一定的预防效果 ,但有副作用。近据ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｌｏｇｙ 10月 2日披露 ,美国波士顿市ＨｏｗａｒｄＨｕｇｈｅｓ医学研究所和哈佛医学院的ＷｉｌｌｉａｍＦ .Ｄｉｅｔｒｉｃｈ及其同事宣称 ,现已发现了一种称为Ｋｉｆ1Ｃ的基因。此种基因可编码细胞内蛋白 ,其某些变体可使小鼠免于遭受炭疽杆菌毒素…     

日本首次正式试栽细胞融合蔬菜

植物工程研究所和协和种苗公司共同开发、用细胞融合育成的胡萝卜终于达到商品化。在植物工程研究所内的试验田结束了3年时间试验栽培,协和种苗公司从4月开始在产地正式栽培。如顺利的话,明年商品化F_1胡萝卜,这种胡萝卜是利用非对称细胞融合导入细胞性雄性不育(CMS)基因的亲株而育成的。实用化利用细胞融合育成的蔬菜这是日本第一次,大概也是世界第一次。