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1.
湖北地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的分离,克隆和序… 总被引:3,自引:0,他引:3
采用加端聚合链反应技术,从湖北地区一宫颈癌患者癌组织DNA中分离出人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因,并在pUC18载体中克隆,经限生核酸内切酶分析和DNA序列分析,确认了含HPV16E7重组克隆质粒,命名pfHPV16E7-HB。DNA序列分析表明,HPV16E7-HB基因全长294bp(与报道的标准基因长度相同)但其核苷酸顺序中的两处发生了C-(T)突变,即第43位密码子CAA变为TAA 相似文献
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苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用空斑技术,从既能形成多角体又含TK酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒AcMNPV-TK中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株AcMNPV-TKmt513。用EcoRI、PstⅠ、BglⅡ及KpnⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第25位的氨基酸密码子由GGT变为GAT,该位氨基酸由甘氨酸(Gly)变为天冬氨酸(Aspq)还利用PCR技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒pEV55,与不形成多角体的重组病毒TnNPV-HBsD4DNA共转染Sf9细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。 相似文献
3.
鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达 总被引:16,自引:0,他引:16
采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从鲤鱼脑垂体总RNA中扩增出编码鲤鱼生长激素(GH)成熟肽基因序列.定向克隆至质粒pUC18,克隆的鲤鱼GHcDNA不含信号肽序列并以新的起始密码子ATG取代鲤鱼GHcDNA第1个密码子TCA.序列分析表明,与Koren报道的鲤鱼GHcDNA相比有两个碱基差异,但推断的氨基酸序列完全一致.将鲤鱼GHcDNA定向克隆至原核表达载体pBV220,构建成重组鲤鱼GH基因表达载体pBVcGH8.SDS-PAGE和薄层扫描分析表明:经42℃诱导,pBVcGH8在大肠杆菌中可表达一分子量约22000的特异蛋白,表达量占细胞总蛋白的29.2%.该基因重组的鲤鱼GH添加到饲料中投喂罗非鱼,证实有明显的促进生长作用 相似文献
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YY1抑制效应的破坏可促进人乳头瘤病毒16型癌基因的转录 总被引:4,自引:1,他引:3
人乳头瘤病毒16型(HPV16)癌基因的表达受病毒早期启动子P97的控制。位于LCR上YY1蛋白结合位点的破坏可明显提高P97的活性。为了观测YY1位点破坏在全基因组范围内对病毒e6/e7基因转录的影响,将构建的带有LCR特异性突变的重组HPV16全基因组DNA和HPV16野毒株DNA转染至培养细胞,同时组建HPV16E6反向序列RNA体外转录质粒。RNase保护试验证实,突变HPV16DNA在短 相似文献
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牛生长激素基因的人工合成,重组克隆及高效表达 总被引:2,自引:0,他引:2
本文通过设计选择大肠杆菌高频利用密码子代替天然密码子,人工全合成32个寡聚核苷酸片段;连接并克隆获得A(278bp)、B(88bp)、C(224bp)3个较大DNA片段;经重组克隆、定位突变等获得阳性克隆;双向DNA序列测定分析表明获得了两种人工全合成牛生长激素(bGH)编码基因,即编码N-Met-Ala-bGH和N-Met-Phe-bGH的两个基因,而至今尚未见有人工全合成bGH基因的报道。构建了在PLpromoter控制下含上述合成基因的表达质位pBLbGHE7A1和pBLbGHE8,并在大肠杆菌中进行了温敏诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达产物占全菌蛋白的37%以上。Western-blot分析和纯化产物的N端氨基酸序列测定结果都表明上述两种人工全合成bGH基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达量为现今国际文献报道的高限水平。 相似文献
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为了探讨人肥胖基因的生理和病理意义,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从中国汉族成人腹膜后脂肪组织总RNA中扩增出肥胖基因编码区序列(CDNA),定向亚克隆至PUC19质粒,克隆的OBCDNA不含信号肽序列并加入了亲折起始密友子ATG〈序列分析表明,与日本报道的人OBCDNA相比,多出一个谷氨酸密码子CAG,将OBCDNA定向克隆至原功体PBV220,构建了重组OB基因表达质粒PBV 相似文献
8.
传染性法氏囊病病毒CJ-801bkf毒株VP2 cDNA基因结构的分析 总被引:2,自引:0,他引:2
以传染性法氏囊病病毒(IBDN)中国毒株CJ-801bkf的基因组A片段dsRMA为模板,经反向转录和PCR扩增,克隆了保护性抗原VP2cDNA基因。经Sanger法测序,确定了VP2cDNA基因有1484个核苷酸,推测了VP2氨基酸的顺序,与已报导的6株IBDV毒株CuI、PBG98、52/70、002-73、STC和VariantE的VP2区做了比较,证明:克隆的CJ-801bkfVP2cDNA基因是全长的,含有正确的起始密码子ATG;CJ-801bkf与毒株Cul和pBG98同源性最高;CJ-801bkfVP2高可变区内两个亲水区的氨基酸顺序与CuI、PBG98、52/70、002-73和STC完全相同;7肽区内第三个丝氨酸残基则变异为精氨酸。这些结果提示,中国CJ-801bkf毒株应属标准血清I型IBDV弱毒株。 相似文献
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研究了野生型Aγ珠蛋白基因、中国型胎儿血红蛋白持续存在综合症(HPFH)Aγ基因(启动子区─196C→T突变)及希腊型HPFHAγ基因(─117G→A突变)在鼠红白血病(MEL)GM979细胞中的表达。比较每个整合的Aγ基因表达的mRNA量,─196C→T突变Aγ基因未显示比野生型Aγ基因明显增加的表达水平,而─117G→A突变Aγ基因在未分化的及HMBA或丁酸钠诱导分化的MELGM979细胞中的表达水平增加到野生型Aγ基因相应水平的2.3倍至3.1倍。此结果提供了又一个实验证据,说明启动子─117G→A突变是希腊型HPFH中胎儿Aγ基因在成人中持续活跃表达的原因,这也为β地中海贫血和镰刀性贫血的基因治疗提供了新途径,即可以考虑用转移─117G→A突变Aγ基因的方法改善患者的贫血症状。 相似文献
10.
人乳头瘤病毒16型E7基因的体外扩增及其克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
人乳头瘤病毒16型E7基因是转化基因。作者设计了一对PCR引物,在引物的5′端分别引入EcoRI和HindⅢ酶切序列,以HPV16DNA为模板成功地扩增出E7基因。通过EcoRI和HindⅢ双酶切位点将E7基因定向克隆入pUC18载体,经过PCR、酶切分析和Southern印迹杂交鉴定得到E7重组克隆pHSE7、DNA序列分析表明所克隆的E7基因与已发表的HPV16E7基因序列完全一致且读框正确。 相似文献
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通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一. 相似文献
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真菌类遗传学分析的知识结构教学 总被引:3,自引:2,他引:3
本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。
Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching. 相似文献
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目的 针对医疗机构的合理用药水平进行评价研究。方法 根据医疗机构合理用药的具体要求,构建医疗机构合理用药评价指标体系,采用基于模糊群决策的方法和多指标评价分析法构建医疗机构合理用药评价模型。结果 构建了基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型,并通过实例分析证明了评价模型的可行性。结论 建立的基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型能够对医疗机构的合理用药水平进行科学评价,为提高医疗机构合理用药水平奠定基础。 相似文献
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The levels of endogenous phytohormones and respiratory rate in nine sorts of flowers such as Cymbidium faberi Rolfe, Nopalxochia ackermannii Kunth and others were investigated both at full bloom and senescence and meanwhile the effect of exogenous phytohormones on prolonging the blossoms and promoting ethylene production were tested. There is a high content of endogenous ethylene in all the long-lived flowere, about 3–16 folds higer than the short-lived ones. There is a high level of ABA at full blooming flowers of short-lived flowers, in which there is no or only some cytokinins in it, but the ratio of CTK (6BA+zeatin)/ABA is smaller(l.7). The endogenous ABA reached a much higher level at senescence in all nine sorts of flowers, so it is reasonable to consider that it is ABA which plays an important role of regulation in controlling flower's senescence. There is a much higher level of GA3 and zeatin in the long-lived flowers which is not demonstrated in the shortlived ones. The respiratory rate is one of the factors controtling the longevity of flowers, but it does not play a decided role. Application of 6BA and zeatin prolongs distinctly orchid’s longevity, however exogenous IAA through the promotive action on ethylene production, evidently extends the longevity of the flowers of the Nopalxochia ackermannii Kunth. 相似文献
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棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测 总被引:1,自引:0,他引:1
用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。 相似文献
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Seed germination of an aurea mutant of tomato ( Lycopersicon esculentum Mill.) is promoted by continuous irradiation with red, far-red or long-wavelength far-red (758 nm) light as well as by cyclic irradiations (5 min red or 5 min far-red/25 min darkness). Far-red light applied immediately after each red does not change the germination behaviour. Seed germination of the isogenic wild-type, cv. UC-105, is promoted by continuous and cyclic red light while it is inhibited by continuous and cyclic far-red light and by continious 758 nm irradiation. Far-red irradiation reverses almost completely the promoting effect of red light. The promoting effect (in the aurea mutant) and the inhibitory effect (in the wild-type) of continuous far-red light do not show photon fluence rate dependency above 20 nmol m−2 s−1 . It is concluded that phytochrome controls tomato seed germination throgh low energy responses in both the wild type and the au mutant. The promoting effect of continuous and cyclic far-red light in the au mutant can be attributed to a greater sensitivity to Pfr . 相似文献
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龙胆科药用植物化学成分的研究现状 总被引:16,自引:0,他引:16
龙胆科植物在我国的分布范围很广,且多数为药用植物,其多数种属的药用植物,至今其化学成分尚未被系统研究。综述了目前龙胆科药用植物的化学成分的研究现状及一般提取方法,对近年来发现的环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物进行了总结,为本科药用植物的更深入研究提供了参考。 相似文献