聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦

自Awdeh和Leaback等以聚丙烯酰胺凝胶作抗对流支持介质进行薄层等电聚焦以来,又出现过以Sephadex、Agarose、醋酸纤维素等作抗对流介质的报道。当前应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶和Agarose凝胶,现以前者为例介绍方法的原理、操作和应用。     

薄层等电聚焦电泳技术应用于山蛭的分类研究

山蛭属于环节动物门蛭纲的一种嗜吸人畜血液的动物。广泛分布于东南亚的亚热带丛林及我国华东、华南、西南各省。在我国,迄今已发现15种山蛭。对于这些山蛭的形态、分类及生态等生物学方面的研究曾先后有过报道。其中仅盐源山蛭的生化成分被作过初步分析。至于采用较先进的电泳技术分析山蛭种间的蛋白质特征及差     

一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置

薄层等电聚焦分析电泳是近年来发展起来的一种高分辨率的蛋白质分析技术。等电聚焦是利用两性载体电解质,在外加电场的作用下,形成稳定的pH梯度,使得蛋白质、酶及多肽按其各自不同的等电点聚焦在相应的pH位置上,以便达到分离的目的。薄层等电聚焦分析电泳可以在一块薄层胶片上分析多个样品,操作方便、分辨率高,所以被人们广泛地采用。本文介绍一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置,它适用于我们现有的一般实验室条件,勿需进口成套贵重设备,同样能得到满意的分析结果。 1.电泳装置的配备我们自制了简易的电极架(图1)。上架用     

等电聚焦

蛋白质分子是带有电荷的两性生物高分子,其正、负电荷的数量是随分子所在环境的酸碱度而变化的。在电场存在下的一定pH缓冲液中,带正电荷的蛋白质分子将向负极移动;带负电荷的蛋白质分子将向正极移动,这就是电泳过程。在某一pH下,蛋白质分子在电场中     

薄层凝胶等电聚焦电泳的快速简便制胶方法

在薄层凝胶等电聚焦电泳技术中,制胶可谓是关键的一步。如果制胶失败,将造成时间上的浪费和经济上的损失(凝胶中所用的两性电解质载体——安福林的价格较昂贵)。如果制成的凝胶薄厚不匀或无支撑物,将会直接影响实验结果或给实验操作带来麻烦。我们针对这种情况,结合实验教学,摸索出一种快速、简便而效果较好的制胶方法。现简要介绍如下     

简易薄层分析等电聚焦的毛细管灌胶模具制作

使用薄层(0.5mm)聚丙烯酰胺和琼脂糖等电聚焦技术,在制胶时需用一种毛细管灌胶模具。这里介绍一种制作此种毛细管灌胶模具的简易方法。1.裁3mm厚,26×12.5cm的玻璃两块。2.取其中一块在两长边沿边画取0.5cm宽的直线,翻转玻璃板,在0.5cm宽的线区内沿边铺上浓硝基外用清漆;铺漆时注意放平,铺至厚度达3mn即成。在室温晾1-2天。3.当漆边条表面干至不沾手,但用力按仍会扩展     

单克隆抗体的等电聚焦

本文采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦和Phast-system仪等电聚焦测定12份HBsAg McAb IgG的等电点,并对两种方法测定的误差和优缺点进行了讨论。     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦

等电聚焦也曾称为等电点分离、等电点划分、等电点分析、聚焦电泳等。1966年瑞典学者Vesterberg和Svernsson首先合成了两性载体电解质,并成功地用于肌红蛋白分离,使这方法具有实用价值。等电聚焦的先决条件就是要求有稳定的pH梯度。按照支持pH梯度的介质不同,可     

四种有尾两栖类眼晶状体蛋白薄层凝胶等电聚焦电泳的比较

本文用四种有尾两栖类眼晶状体蛋白质为实验材料,以等电聚焦电泳法在恒定功率和时间内作了分类的比较。材料巴鲵(Liiua shihi)5只,3♂,2♀,1986.4采自四川巫山;无斑山溪鲵(Batrac-hoperus karlschmidti)9只,5♂,4♀,1986.5采自四川康定;北方山溪鲵(B.tibet-anus)8只,6♂,2♀,1986.6采自陕西周至;盐源山溪鲵(B.yenyuanensis)6只,5♂,1♀,1986.6采自四川冕宁。方法薄层凝胶板按蒙义文等(1981)方法,作者根据有尾两栖类眼晶状体蛋白质酸碱度,作部份改动。活取眼晶状体,用滤纸吸净血污,称重,蒸馏水反复冲洗后,匀浆(4℃下),4000r/min,离心5min,…     

北京鸭乳酸脱氢酶同工酶的研究 Ⅰ.薄层等电聚焦电泳分离北京鸭LDH同工酶

采用薄层等电聚焦电泳方法,把北京鸭乳酸脱氧酶同工酶区分为11条电泳区带,发现它们是一组等电点十分邻近的、范围在pH 6.0至8.0的中性蛋白质。     

等电聚焦载体两性电解质的合成

等电聚焦是一种分离和鉴定蛋白质的新技术。它能迅速而准确的测定蛋白质的等电点;并根据蛋白质等电点的不同而把蛋白质混合物中各个成份互相分离开来。此技术要求在正、负极之间有一个从酸到碱连续变化的pH梯度。形成这种梯度的物质称为载体两性电解质(瑞典LKB厂专利商品名为“Ampholine”),它实际上是一系列多氨基多羧酸的混合物。对此载体两性电解质要求:     

等电聚焦法测定2.5S NGF的等电点

采用水平等电聚焦法测定了２５Ｓｍ神经生长因子（ＮＧＦ）的等电点。经测定,纯化的２５ＳｍＮＧＦ的等电聚焦为三条带,这与文献报道相一致,等电点ｐＨ值分别为ｐＨ８７、９０、９３,其主要成分为β亚基ＮＧＦ及其修饰物的混合物,包括在羧基端失去８个氨基酸残基和在氨基端失去１个精氨酸残基,由这三种组分构成的ＮＧＦ统称为２５ＳｍＮＧＦ。     

野生纤毛虫同工酶微量等电聚焦分析探索

微量电泳是用来分离和表征提取于少量生物材料中的核酸和蛋白质的分析技术。作者以缘毛目螅状独缩虫(Carchesium polypinum Linne,1758)为材料,用微量等电聚焦(Microisoelectric focussing)探索了分析野生纤毛虫同工酶的可行性。实验结果表明:(1) 样品量小至两个群体螅状独缩虫(约200个个体)即可进行酯酶同工酶微量等电聚焦分析;(2) 自野外采集材料中立即分离制备的螅状独缩虫匀浆上清液的酯酶同工酶酶谱与实验室内放置10h后分离制备的酶谱几乎一致。因此,野生纤毛虫同工酶可用微量等电聚焦进行分析。     

一种蛋白质等电聚焦银染色方法

等电聚焦是蛋白质分析的一种常用方法。在实际工作中,常因一些生物材料蛋白含量太低,常规的考马斯亮蓝染色不能显示区带,给研究工作带来困难。人们曾考虑聚焦后用超敏感的硝酸银染色法克服之,但因聚焦后凝胶上含有Ampholine而往往不能得到满意的结果。我们经过一段时间的摸索,染色获得成功。现简介如下。 一、固定与浸泡