生物防治

962195 开发用于防治昆虫的重组杆状病毒[英]/Bonning,B.C.…//Annu.Rev.Entomol.-1996.41.-191～210[译自DBA,1996,15(7),96-03938] 随着重组DNA技术的进步及快反应重组杆状病毒的开发,人们对这些病毒在田间防治昆虫的潜力的兴趣大大增加。本编综述提供了重组杆状病毒目前状况的总体情况,包括:(1)利用遗传工程开发     

杆状病毒侵染的分子基础*

相状病毒是昆虫的专一性寄生病毒,可作为一种有效的生物杀虫剂。杆状病毒侵染寄主表现在其基因的功能上。侵染是一个复杂的过程,包括许多不同基因的表达、调控等,以苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa califormica mucleopolyhedrovirus,AcMNPV）为例,从分子水平上概述了与杆状病毒侵染有关的基因及蛋白质的结构特性与功能,为进一步了解杆状病毒侵染寄主的机制,从而有效的改良杆状病毒,扩大杀虫谱,提高其杀虫效果提供参考。     

杆状病毒增效因子及其增效机理

杆状病毒是一类双链环状DNA病毒,具有宿主特异性强和环境兼容性好等特点。作为微生物杀虫剂,杆状病毒在农业可持续发展中应将发挥更加重要的作用。但是,杆状病毒杀虫剂自身的不足,如杀虫活性低和杀虫速度慢等,严重制约了其推广应用。一些增效因子能够改善杆状病毒的杀虫活性或杀虫速度。本文综述了杆状病毒增效蛋白、昆虫痘病毒纺锤体蛋白和荧光增白剂等7种对杆状病毒具有增效活性的增效因子的特性,并对其增效机理进行了逐个分析,旨在为高效病毒杀虫剂的研发以及病毒杀虫剂的推广应用提供借鉴和帮助。     

茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)多角体蛋白基因的定位及克隆

茶毛虫核型多角体病毒(Euproctis pseudoconspersa Nuclear Polyhedrosis Virus简称EpMPV),属于杆状病毒科核型多角体病毒属,能使茶毛虫染病死亡.EpNPV据报道最初由日本学者于1957年发现[1],随后在其它国家和地区也有相关报道[2];我国在贵州、湖北、广西和云南等地也有发现,并在EpNPV病毒杀虫剂的大田应用方面做了大量的工作,取得了一定的社会、经济和生态效益[3].     

昆虫病毒表达关系的模型建立

昆虫杆状病毒作为生物杀虫剂以及在基因治疗方面的应用有着独特的优越性,而昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)也是当今基因工程领域四大表达系统之一,得到广泛的应用.在我们对部分昆虫杆状病毒分子生物学已有较深入认知的情况下,研究其病毒表达系统及生物过程,将有助于我们有效地利用其优越的性能,开拓新的实用价值.类病毒颗粒(Virus...     

斜纹夜蛾核型多角体病毒分子生物学研究进展

斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera lituramulticapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)属NPV科A亚群。近几年有关该病毒的序列测定、基因结构、功能和表达调控等系统的分子生物学研究工作进展迅速,特别是对一些重要基因的结构分析,有助于筛选毒力较强的杀虫毒株,并为这一病毒杀虫剂的改良和发展以及组建昆虫杆状病毒表达载体奠定基础。综述了与SpltMNPV相关的分子生物学领域的研究进展。     

昆虫保幼激素促进家蚕杆状病毒系统的基因表达

杆状病毒表达载体系统(Baculovirus Expression VecterSvstem,BEVS)的一个最大优点是外源基因的高效表达(Hy-perexpression).但是,不同的外源基因在BEVS系统中的表达水平相差很大,较低的如α-干扰素,表达量为1～5mg/L培养细胞;高的如β-半乳糖苷酶,表达量可达600mg/L培养细胞.外源基因在BEVS系统中表达量受到诸多因素的影响,如细胞的类型与质量,外源基因蛋白的性质,启动子序列的完整性,是否为融合蛋白等[1].如何使外源基因在BEVS系统中高效表达,是近年来该领域中研究最活跃的方向之一.已证实家蚕杆状病毒的表达量受宿主遗传型的影响,最低和最高的遗传型相差达7倍以上[2].林水中等发现家蚕饲料中添食适当浓度的硫酸铜可提高外源基因单位表达量10%左右[3].杆状病毒在复制循环中表现出两种类型:芽生病毒和包涵体病毒,其中芽生病毒引起宿主体内不同组织间的感染,包涵体病毒则引起宿主之间感染[1].杆状病毒基因组中蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(egt)基因影响激素在宿主体内的平衡[4],egt基因通过糖基化作用使蜕皮激素失活,打破宿主体内的激素平衡,延长幼虫期,以利于病毒的增殖[5].家蚕血淋巴中保幼激素(Juvenile hormone,JH)的滴度同样决定着幼虫发育的进程[6],本文通过体表使用保幼激素,以研究保幼激素对家蚕核型多角体病毒和宿主之间的相互关系及对外源基因表达量的影响.     

中国棉铃虫核多角体病毒VHA273毒株多角体蛋白的纯化及某些理化性质的测定

中国棉铃虫核多角体病毒(Heliothis armigera NPV,HaNPV)VHA273毒株,属杆状病毒科杆状病毒属A亚组。1981年通过省级鉴定,该毒株可望发展成商品杀虫剂。本文首次报道VHA273株多角体蛋白的纯化方法及某些理化性质的测定结果,这对该昆虫杆状病毒的分类鉴定及病毒制剂的标准化工作具有实用意义。     

无血清培养昆虫细胞(BTI-Tn-5B1-4)的适应过程

昆虫细胞培养是近年来迅速发展起来的动物细胞培养工程中的一个新领域。人们可以利用杆状病毒在昆虫细胞内的感染、复制,来大量生产昆虫病毒作为生物杀虫剂[1]。而昆虫细胞杆状病毒表达载体系统的建立,则可通过昆虫细胞的体外培养大量表达病毒携带的外源基因。实践证明,这…     

昆虫杆状病毒若干基因的研究进展

昆虫杆状病毒(Insect baculovirus)对鳞翅目、双翅目和膜翅目等昆虫具有病原性,是一 种开发应用较广、高效的生物杀虫剂,具有杀虫专一、效果好、有流行传播作用等优点.为 了更好地利用昆虫杆状病毒为防治农林害虫服务,加快昆虫杆状病毒杀虫剂研究的步伐,本文归纳了近几年来有关昆虫杆状病毒基因研究进展供从事研究的人员参考.     

注意杆状病毒科分类的变化

杆状病毒由于被广泛用作目的基因的表达载体倍受重视。近年来证实某些杆状病毒对虾具有致病性 ,从而成为研究热点之一。目前公认的最重要的对虾致病病毒是对虾白斑综合征病毒 (ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｓｙｎｄｒｏｍｖｉｒｕｓ ,ＷＳＳＶ) ,在我国养殖对虾中广为流行 ,引致重大经济损失。不少文献将ＷＳＳＶ称作对虾白斑病杆状病毒 ,其实并不准确。国际病毒分类委员会 (ＩＣＴＶ)在 1982年出版的第 4次病毒分类报告中将杆状病毒科 (Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ)分 4个亚群 :核多角体病毒亚群、颗粒体病毒亚群、Ｃ亚群及Ｄ亚群[1] 。第 5次病毒分…     

杆状病毒Ac78 C末端保守区域的功能初步分析

杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)的orf78 (即Ac78)是最近被发现的杆状病毒核心基因,在杆状病毒的生活周期中具有重要功能.氨基酸序列分析表明,Ac78的C末端105～108位氨基酸区域在Group I NPVs旁系同源物中高度保守.为研究该保守区域在Ac78功能中的作用,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统成功构建了缺失该保守区域,并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的Ac78截短补回型重组病毒(vAc78:del105-108).荧光显微镜分析和病毒生长曲线测定结果表明,在vAc78:del105-108转染的Sf9细胞中,感染性的芽生型病毒粒子(budded virion,BV)产生量与Ac78全长补回型重组病毒(vAc78:HA)基本一致;电镜观察发现,在vAc78:del105-108转染的细胞中,呈现与vAc78:HA的现象一致的典型的杆状病毒感染特征,多粒包埋型病毒粒子(multiple nucleocapsid enveloped occlusion derived virion,M-ODV)以及包埋有M-ODV的包涵体均能正常形成;免疫荧光实验表明,在vAc78:del105-108感染的Sf9细胞中,从病毒感染细胞24 h时开始,Ac78专一定位于感染细胞的内核膜附近,与vAc78:HA的现象一致.上述结果表明,Ac78的C末端105～108位氨基酸保守区域对于BV和M-ODV的有效产生以及Ac78的亚细胞定位非必需.     

茶毛虫核型多角体病毒（EpNPV）多角体蛋白基因的定位及克隆

茶毛虫核型多角体病毒 (Ｅｕｐｒｏｃｔｉｓｐｓｅｕｄｏｃｏｎｓｐｅｒ ｓａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＥｐＭＰＶ) ,属于杆状病毒科核型多角体病毒属 ,能使茶毛虫染病死亡。ＥｐＮＰＶ据报道最初由日本学者于 195 7年发现[1] ,随后在其它国家和地区也有相关报道[2 ] ;我国在贵州、湖北、广西和云南等地也有发现 ,并在ＥｐＮＰＶ病毒杀虫剂的大田应用方面做了大量的工作 ,取得了一定的社会、经济和生态效益[3] 。本文以苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋核型多角体病毒(ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＭＮＰＶ…     

HaSNPV几丁质酶基因在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达及其产物对Bt杀虫剂的增效作用

为了探索杆状病毒几丁质酶对微生物杀虫剂的增效作用及其利用途径 ,分别在大肠杆菌和昆虫细胞中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)几丁质酶 .用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的几丁质酶基因片段 ,并分别克隆至原核表达载体pET2 8a和重组到杆状病毒BactoBac表达系统 ,在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1和粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞系Tn 5B1 4中分别进行了表达 .在大肠杆菌中表达量约占细菌总蛋白 15 % ,在昆虫细胞中表达量约占细胞总蛋白10 % .将含有几丁质酶的大肠杆菌和昆虫细胞表达产物添加到苏云金杆菌 (Bt)菌液中一起喂食 2龄家蚕 .结果显示 ,HaSNPV几丁质酶基因的 2种表达产物和Bt杀虫剂的混合物使处理的家蚕的致死时间较对照处理均明显缩短 .昆虫细胞和大肠杆菌表达产物与Bt混合物处理的LT50 分别从 93 5h和 95 1h缩短到 5 6 2h及 6 7 2h ,并且供试家蚕的生长速度明显缓慢 .研究结果表明 ,重组的HaSNPV几丁质酶有望作为Bt杀虫剂的增效剂     

乌桕金带蛾核型多角体病毒的理化性质和内切酶分析

1985年我们从自然罹死的乌桕金带蛾(Eupterote sapivora yang)幼虫分离到一株核型多角体病毒,经电镜观察认为是杆状病毒属(Baculovirus)中的一种病毒(简称EsNPV)。研究昆虫病毒的分子遗传学及基因重组和表达,制备安全有效的昆虫病毒杀虫剂等,首先都要纯化病毒,对其理化性质需要有较全面的了解。为此,本文对该病毒的理化性质和限制性     

生物防治

922568 开发表达昆虫专性神经毒素的杆状病毒用作生防剂的潜力[英]/McCutchen,B.F.…∥Bio/Technology.-1991,9(9).-848～852E译自DBA,1991,10(25),91-14753] 将编码蝎子Androctonus australis昆虫专性毒素(AaIT)的DNA片段插入苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核多角体病毒(AcNPV)转移载体质粒pAcUW2 p10启动子下游和核多角体基因上游处。用该质粒DNA和核多     

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株某些理化性质的研究

杆状病毒由于其专一致死宿主昆虫、对人畜无害、无环境残留、害虫不易产生抗性等优点,广泛用于农林有害昆虫的防治,但杆状病毒杀虫剂也具有杀虫谱窄、杀虫速度慢等缺点.后来科学家先后发现了广谱毒株——苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus AcNPV)、芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha falcifera nuclear polyhedrosis virus SfaNPV),可感染磷翅目三十多种昆虫,前者对已产生农药抗性的常见农业害虫小菜蛾、棉铃虫不敏感,而后者对它们有较高毒力[1～3].我们实验室通过空斑纯化技术得到 Sfa- D 克隆株,此毒株对多种农业害虫具有很强的毒力.本文对该毒株的理化性质做了较为详细的研究,以期为该株病毒的利用提供理论依据.     

生物防治

930965防虫生物技术[会,英]/Anantbakrihsnan,T.N.,Curr.Sci.一1092,62(12)f.一766~-768[译自DBA,1992,11(17),92—09745]'| 在印度玛德拉斯召开的“生j物:技术防虫”会议,讨论了t (1)与噬植物昆虫营养有关的各种酚类和挥发物, (2)苏云金:杆菌(:Bt)生产的杀虫蛋白的评价l (3)原生质体融合技术和DNA限静J图谱分析I(4)杆状病毒的效价,(5)寄生性及捕食性昆虫的大量生产技术。论文着重干Bt和核多角体病毒(NPVs),它们经过遗传工程操作可产生更强的毒性,持久性和更广泛的寄主范围。甩遗传工程杆状病毒在害虫体内产生神经肽,最终能破坏害虫…     

具有生物安全性的杆状病毒杀虫剂基因工程技术的发展与前景

杆状病毒作为杀虫剂在世界各地已被广范应用．但与化学农药相比,杆状病毒具有杀虫速度慢,对高龄害虫需用量大,杀虫谱窄等缺点．随行基因工程技术的发展,从80年代末期起,科学家开始尝试对杆状病毒的遗传性状进行各种分子生物学改造,以获得更优良的病毒虫剂。近年来这方面的研究已取得了可喜进展,同时重组病毒的安全性也引起了世界范围的广泛关注。因此．研制既有优良杀虫性能,又有生物安全性的重组病毒．已成为当今病毒杀虫剂的发展方向。本文及时地总结了重组杆状病毒杀虫剂研究的历史,从提高病毒杀虫速度、增强病毒杀虫毒性、以及病毒宿主特异性等三个方面进行了系统归纳,并对重组病毒的安全性进行科学地分析。重点阐述了新时期研制具有生物安全性的重组病毒的各项基因工程策略,如对重组病毒进行混合包装、前包装：或生产缺陷型的重组病毒（p10基因,p74基因．egt基因,pp34基因的缺失）等。这些措施将把重组病毒对环境可能造成的危害控制在最小范围。理想的重组病毒杀虫剂应具有杀虫快、杀虫谱广、不危害其它生物、在环境中滞留时间短等特点。     

杆状病毒的分子生物学研究进展

杆状病毒科(Baculoviridae)是昆虫病毒中最大的一科,数百种病毒多为鳞翅目、双翅目及膜翅目昆虫的致病原。这一科病毒共分三个亚组:A亚组,具有巨大包含体的核多角体病毒(Nuclear Polyhedrosis Virus,NPV);B亚组,颗粒体病毒(Gtallulin Virus,GV);C亚组,无包含体的独角仙杆状病毒(Oryctes)。昆虫病毒中,杆状病毒是发现最