抗EHFV的独特型抗体在大鼠体内诱导免疫应答的研究

本文介绍用流行性出血热（EHF）病毒J10株制备单克隆抗体（McAb),以及用7个McAb免疫家兔,使其产生抗EHF病毒McAb的抗体即独特型抗体（Ab2）。Ab2能在体外同出血热病人恢复期血清和EHF病毒免疫的兔血清发生特异性结合。再经EHF－McAb亲和层析法分离提纯Ab2,免疫BALb/c小鼠,将所获得的免疫血清（Ab3）用荧光和ELISA分别加以测定,结果表明,抗－抗独特型抗体可在体外识别EHF病毒,而不能同病病人恢复期血清发生结合,从而支持免疫网络学说,可能为我们提供一种新型的抗原来源途径。     

抗肺炎支原体卵黄抗体的制备及其免疫特性

目的制备抗肺炎支原体卵黄抗体,并研究其免疫特异性。方法以超声粉碎法制备肺炎支原体抗原;以ELISA法测定卵黄抗体的效价及免疫特异性;以水稀释法联合疏水层析的方法分离纯化卵黄抗体;应用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度;改良Lowry法测定蛋白含量。结果低、高剂量组均诱导母鸡产生有效免疫应答,高剂量组免疫效价高于低剂量组。高剂量组于初免疫后约50d抗体效价达高峰,持续约2个月;而低剂量组在初免疫后约60d抗体效价达高峰,持续约1个月。之后效价逐渐下降,在免疫约120d,高剂量组由13log2下降到10log2;而低剂量组则由11log2下降到7log2。以水稀释法联合疏水层析法制备了电泳纯抗肺炎支原体IgY,分子量约178KD,平均每1ml卵黄液可获得较纯抗体6.4mg。制备的IgY与肺炎支原体具有较高特异性,与解脲支原体和人型支原体无明显交叉反应,与生殖支原体有轻度的交叉反应。结论本研究初步制备了抗肺炎支原体卵黄抗体,为肺炎支原体的防治与检测提供新的途径。     

抗EHFV的独特型抗体在小鼠体内诱导免疫应答的研究

本文介绍用流行性出血热（EHF）病毒J10株制备单克隆抗体（McAb）,以及用7个McAb免疫家兔,使其产生抗EHF病毒McAb的抗体即抗独特型 抗体（Ab2).Ab2能在体外同出血热病人恢复期血清和EHF病毒免疫的兔血清发生特异性结合。再经EHF－McAb亲和层析法分离提纯Ab2,免疫BALb/c小鼠,将所获得的免疫血清（Ab3）用荧光和ELISA分别加以测定。结果表明,抗－抗独特型抗体可在体外识别EHF病毒,而不能同病病人恢复期血清发生结合,从而支持免疫网络学说,可能为我们提供一种新型的抗原来源途径。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的 纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测.方法 采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG( Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体( rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA).结果 金黄地鼠血清IgG纯度达95％;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1(:)64;兔抗金黄地鼠IgG -HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1:2000.结论 高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件.     

艰难梭菌毒素B羧基端的表达与卵黄抗体制备

目的:在大肠杆菌中可溶性表达艰难梭菌毒素B羧基端(TcdB-c),免疫产蛋鸡,获得针对TcdB-c的卵黄抗体(IgY)。方法:人工合成TcdB-c的基因,将其克隆至pET32b(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达产物经金属螯合层析纯化,凝血酶酶切后得到目的蛋白TcdB-c;利用兔红细胞凝集和兔肠袢实验检测目的蛋白活性,用TcdB-c免疫产蛋鸡制备鸡卵黄抗体,分离纯化卵黄抗体并经ELISA测定抗体效价,用兔肠袢实验检测抗体的中和活性。结果:构建了TcdB-c的重组表达载体,诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为79 000,经凝血酶酶切后的相对分子质量约65 000;目的蛋白免疫产蛋鸡后获得效价为1∶20 000的抗TcdB-c卵黄抗体,且该抗体可以中和TcdB-c对兔小肠的毒性作用。结论:获得了具有生物学活性的TcdB-c,并制备了针对TcdB-c的鸡卵黄抗体,为利用基因工程方法防治艰难梭菌感染打下了基础。     

人绒毛膜促性腺激素抗独特型抗体在小鼠中的免疫反应

我室制备了人绒毛膜促性腺激素(hCG)的抗独特型抗体,它们与hCG有相似的抗体和受体结合位点,因而认为它们可能具有hCG内镜像结构。如果这些抗独特型抗体也具有与hCG类似的免疫原性,可望利用它们来配合或代替hCG制备更好的免疫避孕疫苗。我们用一种hCG抗独特型抗体(Anti-BAH_1)免疫小鼠可得到抗hCG抗体,这些抗体占所产生的Anti-Anti-BAH_1抗体的1—2％,最高滴度可达1:2万左右。这个滴度可保持2个月左右,以后逐步下降,在停止免疫半年后抗体滴度降到最高滴度的15.6％。用Anti-BAH_1与hCG同时免疫,对hCG的免疫反应有一定抑制作用,但先用Anti-BAH_1免疫对随后的hCG免疫反应有一定增强作用。表明利用抗独特型抗体可能调控对hCG的免疫反应。这种调控作用与所采用的免疫方式及抗原剂量有关。     

人生长分化因子15单克隆抗体制备、鉴定及药用价值初探

目的:制备稳定分泌抗人生长分化因子15(GDF15)单克隆抗体(m Ab)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的m Ab进行鉴定。方法:根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的m Ab,用间接ELISA检测m Ab腹水效价。结果:获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水m Ab效价可达1×104~1×109。结论:获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性m Ab,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。     

鼠单克隆抗-HBs的单克隆抗独特型抗体的制备及其免疫原性的研究 Ⅱ.Ab_2—1的免疫原性研究

用一株单克隆抗独特型抗体细胞株,Ab_2-1免疫4只BALB/c小鼠和2只家兔。每只小鼠每次经腹腔接种100#gAb_2-1,共接种4次;每只家兔每次经皮下注射1mgAb_2-1,共注射4次。经免疫的小鼠和家兔都产生了抗-HBs,经两种竞争性抑制试验证实,这些抗-HBs是特异性的。小鼠抗-HBs滴度为2~(-6)至2~(-9);家兔抗-HBs滴度从2~(-10)至2~(-12)。这些资料提示:单克隆抗独特型抗体能模拟HBsAg,具有类似HBsAg的免疫原性。     

重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备

本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了4株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素(rHuEPO)单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系:BⅡ1B5、DⅡ6B9、MⅡ1H4、GⅠ3E7,用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定,其分泌的McAb的类型分别是:IgM、IgM、IgG1和IgG2a。间接ELISA法测定细胞上清的效价为1×10~(-2)～1.25×10~(-1),腹水效价为1×10~(?)～1×10~(?)。培养上清经ELISA鉴定,与IL-2、GM-CSF、IFN-α等细胞因子均无交叉反应。只与rHuEPO特异性结合。     

猪肺炎支原体Mhp366-N蛋白多克隆抗体的制备及应用

【背景】猪肺炎支原体是猪的一种重要的病原。该菌的研究工具较少,特别是缺少开展其致病机制研究需要的抗体。【目的】制备猪肺炎支原体Mhp366-N蛋白抗体并确定其应用范围和使用时的最佳稀释倍数。【方法】Escherichia coli BL21(DE3)-pET28a(+)-mhp366-N重组菌诱导表达Mhp366-N蛋白并纯化。纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。用免疫印迹和免疫荧光方法检测猪肺炎支原体AH株感染3D4/21细胞后的Mhp366蛋白,确定2种方法中Mhp366-N多克隆抗体的最佳稀释倍数;之后检测临床采集的猪肺泡巨噬细胞中的猪肺炎支原体;最后以免疫组化试验检测猪肺炎支原体感染的肺细胞。【结果】纯化的Mhp366-N蛋白纯度超过85%,免疫小鼠制备的抗血清效价在1:128 000-1:512 000之间。在免疫印迹试验中Mhp366-N多克隆抗体的最佳工作浓度为1:100 000稀释,免疫荧光试验中Mhp366-N多克隆抗体的工作浓度范围在1:1 000-1:10 000 000,其可用于临床采集的猪肺泡巨噬细胞和细胞系中猪肺炎支原体的检测。免疫组化试验结果显示猪肺炎支原体能够进入猪肺泡巨噬细胞、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞。【结论】制备的Mhp366-N多克隆抗体为猪肺炎支原体致病机制研究提供了良好的研究工具。