高效液相色谱法测定不同产地及品种灵芝三萜类成分的含量

【目的】建立同时测定灵芝子实体中灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸A、灵芝酮三醇、灵芝酸DM、灵芝酸T、灵芝醇B、灵芝酸S、灵芝酸G、灵芝酸F、灵芝酸D、灵芝稀酸B12种三萜成分的高效液相色谱法。【方法】选用Aglient ZORBAX SB-Aq(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-醋酸(0.01%)水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,分析波长252 nm,柱温30°C,对不同产地及品种的灵芝样品进行测定分析。【结果】同一产地不同品种间三萜类成分含量具有显著差异,不同产地的灵芝样品三萜成分含量也有显著差异,所建方法精密度高,稳定性和重复性好。【结论】所建方法适用于12种三萜成分的同时测定。     

栽培条件对灵芝子实体中四种重金属含量的影响

以不同灵芝品种、不同栽培基质、不同栽培方式、不同生长时期获得的菌草灵芝和木屑灵芝为原料,对栽培基质及灵芝子实体中铅、砷、汞、镉4种重金属的含量参照国际标准进行检测,结果表明虽然菌草栽培基质中重金属含量高于木屑栽培基质,但菌草灵芝对重金属富集率远低于木屑灵芝,成熟期的菌草灵芝与木屑灵芝中的重金属含量均低于农业行业标准和国家标准。因此菌草可以替代木屑用作灵芝栽培的营养来源。     

HPLC法测定灵芝孢子粉中三萜含量

为准确测定灵芝孢子粉中三萜的含量,运用高效液相建立适合孢子粉的分析测定方法。通过对前处理条件的优化,确定40%乙醇为孢子粉中等极性三萜酸类的最佳提取溶剂,浓缩倍数是子实体提取条件的50倍。通过色谱柱和洗脱条件的优化,建立了包括灵芝酸I、灵芝烯酸C、灵芝酸C2等13种标准品测定方法,方法学考察显示该分析方法精密度、重复性、稳定性的RSD值均小于5%,可以用于灵芝孢子粉中三萜类成分的定量检测。通过5组样品的分析发现,灵芝酸C6、灵芝酸G、灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝酸F是灵芝孢子粉中的主要三萜类成分,其中灵芝酸A含量最高,平均占样品三萜总量的比例达19.71%;三萜类成分的溶出量与是否破壁没有相关性。三萜类成分在灵芝孢子粉和灵芝孢子油产品中的含量非常低,孢子粉的三萜含量为14.24-99.70μg/g,仅为子实体的1/100,灵芝孢子油中三萜含量也均低于50μg/g,因此三萜类成分不适合作为灵芝孢子粉及其相关产品的定量检测指标。     

灵芝子实体中三萜类物质抗肿瘤活性的谱效关系

通过HPLC指纹图谱结合多元线性回归分析对不同产地灵芝子实体的功效性特征进行评价,为寻找灵芝中活性三萜提供理论依据。利用高效液相分析方法,结合样品对肿瘤细胞L1210的增殖抑制率,运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件和多元线性回归分析11批不同品种灵芝子实体中的三萜活性成分。样品与标准指纹图谱的相似度均在0.9以上,共标定了12个共有物质峰,其中与抗L1210肿瘤细胞活性关系密切的三萜物质有灵芝酸C₂、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸K、灵芝酸A、灵芝酸F和灵芝醛A。     

灵芝多糖的生物合成和发酵调控

灵芝多糖是灵芝的关键药效成分之一。从灵芝多糖的结构和构效关系、灵芝多糖的单糖组成,灵芝主要多糖IPS-1-1的基本合成途径,以及灵芝多糖的深层发酵调控策略和方法等方面,综述了灵芝多糖生物合成和发酵调控方面的新进展。并对今后的主要研究方向进行了展望。     

HPLC测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量

灵芝药品大多以灵芝子实体水提物为原料,为快速准确测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量,建立了具有较好分离效果的HPLC分析测定方法。通过优化色谱柱和洗脱条件,优选出Agilent Zorbax SB-Aq C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-乙酸水溶液(0.01%)为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长252 nm,柱温30℃,该条件下灵芝酸A、灵芝酸F等10种灵芝酸得到较好的分离。方法学考察显示该分析方法精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于5%,可以用于灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B等10种灵芝酸的定量检测。通过对灵芝子实体原料、水提物和市售灵芝产品中10种三萜类成分分析发现,灵芝子实体水提物中均含有这10种三萜,含量为2.52%–6.83%,较子实体原料大幅提高,市售的灵芝产品中的三萜含量为0.27%–0.84%。该方法的建立为灵芝水提物及其产品质量标准的建立奠定基础。     

乙烯调控灵芝酸生物合成关键基因的筛选

灵芝是我国著名的药用真菌,灵芝酸是其主要活性成分,具有多种药理活性。乙烯可以促进灵芝酸的生物合成,但其调控机理尚不明确。本实验利用非靶向代谢组研究发现Top 20差异代谢物中含有6种灵芝的活性成分(灵芝酸η、赤芝酸F、赤芝酸N、丹芝酸A、灵芝酸V1和灵芝酸δ),其中有4种灵芝酸(灵芝酸η、赤芝酸F、赤芝酸N和灵芝酸V1)为上调积累,2种灵芝酸(灵芝酸δ和丹芝酸A)为下调积累。通过非靶向代谢组与转录组的关联分析发现基因GL23307、GL25546和GL29595同时与3种灵芝酸积累显著相关,并通过启动子顺式元件预测,发现分别编码泛素蛋白和抑肽酶基因GL25546、GL23307的启动子区域含有响应乙烯信号的顺式作用元件GCC-box,因此,推测这两个基因在乙烯调控灵芝酸生物合成中发挥重要作用。     

中国灵芝科4个新记录种

作者在《中国灵芝科志》的编写过程中,从中国科学院微生物研究所真菌标本室（HMAS）中发现我国尚未报道过的灵芝科4个新记录种,它们是：唐氏灵芝GanodermadonkiiSteyert、亮黑灵芝G．nigrolucidum（Loyd）Reid、壳状灵芝G．ostracodesPat．和具柄灵芝G.stipitatusMurr。以上所有研究标本均保藏在HMAS。     

中国灵芝科4个新记录种(英文)

作者在《中国灵芝科志》的编写过程中,从中国科学院微生物研究所真菌标本室（HMAS）中发现我国尚未报道过的灵芝科4个新记录种,它们是：唐氏灵芝GanodermadonkiiSteyert、亮黑灵芝G．nigrolucidum（Loyd）Reid、壳状灵芝G．ostracodesPat．和具柄灵芝G.stipitatusMurr。以上所有研究标本均保藏在HMAS。     

菌草灵芝与段木灵芝的功效成分的比较研究

测定并比较菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率的差异。结果表明,菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率存在着差异,菌草灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率都高于段木灵芝。     

平疣桑椹石磺精子结构观察

通过电光学显微镜和透射电子显微镜观察了平疣桑椹石磺精子的形态及其超微结构。平疣桑椹石磺成熟精子属于进化型,由头部、中段和末段组成。头部由顶体和精核构成,顶体长约0.7μm,呈细奶嘴状,内含物分布均匀,电子密度稍低于细胞核。顶体基部与精核前端紧密相连,无间隙。精核长约3.8μm,宽约1.0μm,核质高度浓缩,电子密度高,无核泡,纵切似辣椒状,核后端内凹形成核后窝。中段加长,结构复杂,线粒体演化成线粒体鞘,螺旋状包绕轴丝。精子末段由轴丝及包绕轴丝的质膜组成,轴丝为典型的“9＋2”结构。比较了平疣桑椹石磺精子与相关腹足类精子结构的异同,进一步证实了腹足纲贝类精子结构之间的区别主要在于顶体有无及形态,精核的长短与外形、中段线粒体的数目及其排列方式等。     

Characteristics of the membranes of the pellicle of the ciliatePseudomicrothorax dubius

Summary The membranes of the pellicle of the ciliatePseudomicrothorax dubius are investigated using thin section electron microscopy and freeze-fracture replicas. The plasma membrane is covered by a surface coat and is connected to the outer alveolar membrane by short, sometimes branched, bridges. The inner alveolar membrane is coated on both sides. The epiplasm lies in intimate contact with the cytoplasmic surface of this membrane, and there is a corresponding deposit on the other surface. This deposit is regularly striated.The epiplasmic layer and the alveoli are interrupted at sites of cytotic activity,e.g., the attachment sites of trichocysts, the cytoproct, and the parasomal sacs. The striated deposit ends where the epiplasm ends, indicating a direct relationship between these two epimembranous layers.There is a deposit along the sides of the first part of the tip of the trichocysts, and in this region the trichocyst membrane is free of intramembranous particles.The membrane of the parasomal sacs has a coat on both surfaces. That on the extraplasmic surface is similar to the surface coat of the plasma membrane. The origin of the cytoplasmic coat is unknown. The cytotic activity of these sacs is indicated by their highly irregular profiles.     

榉树叶片解剖构造和叶肉细胞超微结构的观察

对取自不同季节的榉树(Zelkova schneideriana hand.-Mazz.)叶的解剖构造和叶肉细胞超微结构进行了观察。榉树叶表面被密集锥状单细胞毛,幼叶则还有头状腺毛。气孔多分布在叶下表面,为不规则型。上表皮细胞外壁具有明显的角质层加厚,局部上表皮由2层细胞组成。叶肉细胞分化为栅栏组织和海绵组织;栅栏组织1—2层细胞;海绵组织发达,常与气孔相连。叶肉有含晶细胞存在。叶脉的维管束鞘明显,是厚壁细胞。成熟叶肉细胞细胞器丰富,有8-9个周壁叶绿体,为巨大的长椭圆形,基粒片层清晰,有淀粉粒,少量脂滴。叶片开始转变颜色时,叶绿体由长椭圆形变得趋于圆形;基粒片层逐渐变得杂乱至模糊不清;脂滴数目增多。秋季叶色不同的榉树叶片解剖构造存在一定差异。     

瘤背石磺的精子结构

用光学显微镜和透射电子显微镜技术研究了瘤背石磺精子的结构特点,分析了其生理生态适应性以及在肺螺亚纲系统演化中的意义。瘤背石磺的精子由头部、中段和末段组成。头部由奶嘴形的顶体和长圆筒状的细胞核构成。顶体包括顶体囊和顶体构架体两部分;两者的内含物都分布均匀,电子密度稍低于细胞核;顶体基部平整,与核前端之间有一空隙,内含物电子密度极低。细胞核由电子密度高的均匀颗粒物质组成,并出现核泡;核的后端有一"杯形"的凹陷,称为核后窝。中段结构复杂,主要包括一对位于核后窝内的中心粒、轴丝、质膜、线粒体及由线粒体衍生的糖原质螺旋体、基质层和类晶体层等。末段由"9 2"结构的轴丝及外包的质膜组成,无糖原质螺旋体和其它线粒体衍生物。比较瘤背石磺精子与肺螺亚纲其它物种的精子结构,我们认为该物种的精子属于"进化型",是一类在进化地位中比基眼目高等的动物。     

铜锈环棱螺肝脏的显微与超微结构观察

应用组织切片、光学显微镜及透射电子显微镜技术,对铜锈环棱螺肝脏进行观察研究。结果表明,铜锈环棱螺肝脏为复管泡状腺,由许多肝小叶组成,每个肝小叶管壁由单层上皮细胞构成,分3种细胞：消化细胞、排泄细胞、钙细胞。光镜显示,肝小叶多球形或近球形,横切面管腔呈星射状裂隙,纵切面可见上皮细胞呈柱状,核靠近基膜,上皮细胞极性明显。消化细胞构成腺上皮的主体,染色较淡。排泄细胞和钙细胞染色较深。肝腺管之间有不规则圆形的网状细胞,结缔组织填充在肝小叶之间及小叶与导管之间。电镜显示,消化细胞和排泄细胞顶端都具微绒毛,消化细胞主要特征为具有溶酶体囊泡系统,参与细胞内消化过程。排泄细胞中粗面内质网、线粒体等细胞器含量丰富,细胞内还散布着大量脂滴。钙细胞锥体形,主要特征为细胞内具钙粒子,也含有大量细胞器。     

贵州疣螈骨骼系统的研究

本文运用硬骨-软骨双染色技术对贵州疣螈（Tylototriton kweichowensis）的骨骼系统做了较全面的观察研究,包括头骨、脊柱和前后肢带骨,并对各骨块的形状、位置以及与邻近骨块的关系都作了详细的描述。最后,将贵州疣螈与东方蝾螈、有斑肥螈的骨骼系统进行了比较,为揭示蝾螈科属间演化关系提供一定的依据。     

陕西秦岭半仓山蝎蛉的生物学观察

2004~2005年,在陕西省南部米仓山黎坪国家森林公园研究了秦岭蝎蛉Panorpa qinlingensisChouetRan的年生活史和生物学习性,通过饲养,成功获得卵、幼虫、蛹等虫态。结果表明,秦岭蝎蛉在米仓山1年发生2代,以预蛹在土室里越冬,5月中旬始见越冬代成虫,5月中旬末~6月上旬为越冬代成虫羽化盛期,7月下旬~8月中旬为第1代成虫羽化盛期,成虫在室内可存活35~60 d。羽化近1周后开始交尾,交尾4~8 d后开始产卵,单雌产卵量35~180粒,卵期5~9 d;幼虫型,共4龄,历期38~50d;蛹为强颚离蛹,蛹期8~18 d。记述了主要生物学习性。     

Analysis of Headspace of Root of Levisticum officinale

The headspace of root of Levistlcum officinale was subjected to adsorb by means of XAD 4. The chemical components of the headspace obtained were analysed by GC/MS and GC/FTIR. 64 compounds have been seperated, of which 20 compounds were identified. The main compounds were monc, terpenoids and sesquiterpenoids, such as β-phellandrens (16.47%), citronellal (12.85%) and ligustilide (20.94%) etc.     

德保苏铁茎的解剖学研究

对德保苏铁茎、叶柄的解剖构造进行观察,结果表明:(1)德保苏铁的茎由周皮、皮层、维管束、髓四部分构成。木栓层的细胞壁完全栓化;皮层大而显著,皮层细胞一般较小,富含淀粉,分布有粘液道;维管束通常较小,主要集中在皮层和髓之间的狭窄区,排列呈环形,具2生长环;少部分稀疏地散生在皮层薄壁细胞之间。(2)叶柄由表皮、绿皮层、下皮层、基本组织、维管束、髓组成。表皮细胞1层,细胞外壁角质化;绿皮细胞2层,有叶绿体;下皮层的厚壁细胞,大小不一,细胞壁强烈增厚;维管束散生,属外韧维管束,排列呈环形,内有零星分布的维管束。     

海南文昌汉族体质特征

在海南文昌市调查了城市汉族315例(男为150例, 女为165例)和乡村汉族407例(男为216例, 女为191例)成人的73项体质指标, 计算了25项体质指数, 统计了指数分型情况, 与我国族群资料进行了比较, 对海南文昌汉族体质特征进行了初步分析。结果显示: 1)文昌汉族有上眼睑皱褶, 蒙古褶欠发达,眼裂窄且多呈眼外角高, 鼻根高度中等, 直鼻梁, 鼻基部上翘, 鼻翼高度中等, 鼻孔最大径斜位, 鼻翼宽, 耳垂多为圆形、三角形, 上唇皮肤部高度中等, 红唇较厚, 发色黑, 肤色、眼色较深。2)文昌汉族男女性均为特圆头型、高头型、中头型、中鼻型。男性还为中面型, 女性还为狭面型。3)文昌汉族男女性均为长躯干型、中胸型、中肩型、中骨盆型, 男性还为中腿型, 女性还为亚短腿型。文昌汉族城市、乡村的男性与女性身高均属于中等身材。4)文昌汉族头面部特征更接近于我国蒙古人种北亚类型族群。从体部指标来看。文昌汉族介于北亚类型族群与南亚类型族群之间, 更接近于北亚类型族群。