烟草花叶病毒的普通株和油菜株RNA的体外翻译比较

对烟草花叶病毒普通株(TMVc)及另一毒株,油菜花叶病毒株(YMV15)的RNA,在麦胚无细胞提取液和兔网织红细胞裂解液中的体外翻译产物,利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,放射自显影,荧光放射自显影以及放射免疫沉淀法进行了分析。结果证明,在YMV15-RNA的体外翻译产物中检测出有与天然的YMVIr外壳蛋白分子量(16 5K)一致的,并被TMV。抗血清和金黄葡萄球菌(Staphylococus aureus)细胞悬浮液所沉淀的多肽。V8蛋白酶酶解图谱也证明该产物与天然外壳蛋白相同。而TMVc-RNA的体外翻译产物中则完全不产生其外壳蛋白(M．W．17．5K),在TMV。抗血清沉淀反应中也未见任何沉淀带产生。属于同一分类组的同一病毒的不同毒株,其翻译策略很可能不一样,对此本文进行了讨论。     

广东烟草花叶病毒株系研究

烟草花叶病毒（TMV）引起的烟草花叶病在广东不同的烟草主产区存在着症状的差异。从广东梅州和南雄烟区采集的138个TMV标样中,选取6个不同症状的分离物作为研究对象,发现它们在不同种属寄主和不同烟草品种上表现明显的TMV普通株特征症状,虽然在某些寄主上其症状也有一些差异,但未能反映株系间的差异。这6个分离物具有几乎相同的病毒粒体形态、电泳迁移率、钝化温度以及紫外吸收特征。经琼脂双扩散法和间接ELISA法的血清学反应,表明它们具较强的血清学关系。因而它们有很强的同源性。经病毒粒体外壳蛋白的氨基酸分析,在氨基酸总数上,分离物GD1和GD3各有156个氨基酸．GD2和GD4各有159个,GD5和GD6分别有158和157个氨基酸。上述分析试验结果初步表明,在广东不同烟草主产区引起的症状有所差异的6个分离物均属IMV普通株。     

用互补DNA杂交技术研究中国分离的几个烟草花叶病毒组RNA序列的同源性

用互补DNA分子杂交技术研究了烟草花叶病毒组的几个中国分离物RNA序列的同源性。结果表明,杨树丛顶病毒(PV)、地黄退化病毒(DDV)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)、番茄株(TMVts)及其突变体(TMVN_(N_(14)))可归于TMV-U_1株所代表的亚组。油菜花叶病毒15(YMV_(15))与TMV-U_1株无关,在所比较的病毒中是一独特的成员。     

辣椒的烟草蚀纹病毒(TEV)鉴定初报

近年来辣椒病毒病在辽宁省各地发生较为普遍。为了弄清毒原种群,几年来,在我组鉴定出主要毒原为烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMY)的同时,又在从沈阳地区采集的21份标样中,鉴定出分离物6号,系烟草蚀纹病毒(TEV),这是在辣椒花叶病中检测出的一个新的毒原。辣椒分离物6号在以下的指示植物上,经摩擦接种后,叶面表现为:在辣椒上叶片呈黄化斑驳,心叶稍细长,有时叶肉并有微细蚀纹斑,植株略矮。在心叶烟上表现斑驳花叶,在普通烟(黄苗榆)叶上现蚀纹。在昆诺藜叶上生局部枯斑。在曼陀萝叶上生明脉和花叶。在百日草上生花叶症。在千日红和马铃薯上无症。采用其他原抗血清反证的方法,进行血清学反应测定,它对TMV、CMV、PVX、PVY的抗血清均无沉淀反应。采用辣椒6号分离物病叶,以叶浸蘸法,作电镜观察,病毒粒体为线状,长约730nm。病毒汁液体外三常规测定,其钝化温度约为55℃(10分钟);稀释限点为10~(-4);体外存活期5—6日(20℃)。因此初步认为它是侵染辣椒的烟草蚀纹病毒(TEV)。     

应用单克隆抗体对烟草花叶毒病抗原决定簇及其抗原型的分析研究

收集国内9省、市、自治区14个烟草花叶病毒(TMV)分离物,在隔离条件下繁殖毒源,以同一方法,相同条件提纯并定量。以20μg/ml 为起始浓度,作10~(-1),10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)……10~(-9)9个稀释度(设健康寄主对照),分别与适宜浓度(通过逐一测定滴度而选定的)10个 TMV 单克隆抗体(McAb)〔设多克隆抗体、正常细胞腹水(SP2/0)对照〕进行 ELISA 试验,结果从14株分离 TMV 分离物中识别到8种抗原决定簇,并将这些 TMV 分离物划分为六个抗原型。这揭示了应用 McAb 区分 TMV 株系是一个很有希望的方法     

广东省烟草花叶病病原病毒的鉴定

烟草花叶病是广东省产烟区的主要病害之一。我们在南雄等八个县进行调查,1983年至1984年的一般发病率为2～20％。根据血清学反应、病毒粒体形态、鉴别寄主反应及寄主范围、媒介昆虫种类、物理性质、交互保护反应等各项检验结果,鉴定广东省烟草花叶病病原是:三个黄瓜花叶病毒可能株系(普通株系CMV-C,烟草坏死株系CMV-TN,烟草黄色坏死株系(CMV-TYN),烟草花叶病毒(TMV),马铃薯病毒Y(PVY),烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和烟草褪绿斑驳病毒(TCMV)(暂定)。     

齿兰环斑病毒的鉴定及其抗血清的制备与应用

根据病毒生物学特性、粒体形态和血清学性质等初步确定从在厦门地区种植的表现为褪绿、褐色坏死斑症状的卡特兰(Cattleya)病株上分离的一个病毒分离物为齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV).通过摩擦接种6科27种(或品种)指示植物,结果其中4科8种(或品种)表现症状,与烟草花叶病毒不同;理化性质试验表明稀释限点为5×10-5,致死温度为92℃～94℃,体外存活期超过3个月.提纯病毒为长约300nm,宽约18nm杆状粒体.SDS-PAGE电泳分析表明其外壳蛋白分子量约为17kDa.该分离物与ORSV抗血清具有强阳性反应、而与TMV抗血清反应微弱,认为该病毒为ORSV分离物.用纯化病毒免疫家兔,成功地制备出特异性抗血清,并通过Dot-ELISA法对厦门地区种植的兰花病株进行了检测研究.     

用互补DNA杂交技术研究中国分离的几个烟草花叶病毒组RNA序列的同源性

用互补DNA分子杂交技术研究了烟草花叶病毒组的几个中国分离物RNA序列的同源性。结果表明,杨树丛顶病毒(PV)、地黄退化病毒(DDV)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)、番茄株(TMVts)及其突变体(TMV_(N_(14))可归于TMV-U_1株所代表的亚组。油菜花叶病毒15(YMV_(15))与TMV-U_1株无关,在所比较的病毒中是一独特的成员。     

系统侵染寄主中黄瓜花叶病毒及其卫星RNA的动态变化

以³²P标记的黄瓜花叶病毒（CMV）RNA3 cDNA片段和卫星RNA全长cDNA作为探针,定量测定CMV基因组RNA和卫星RNA的含量变化,结果显示：二者均具有明显的寄主效应和时间效应.在16～20℃条件下,接种不携带卫星RNA的分离物CMV-R3,15天、30天和75天时,CMV基因组RNA负荷量呈显著下降的趋势.在第15天,RNA3的负荷量以烟草>心叶烟>克里夫兰烟>番茄的顺序表现为不同寄主的显著性差异.相同条件下接种携带高拷贝卫星RNA的分离物CMV-RS,在5天和15天之间基因组RNA和卫星RNA负荷量均呈现上升的趋势,同时测得其基因组RNA和卫星的负荷量具有相似的寄主效应和时间效应,但程度不同.第15天时,二者负荷量以烟草＞心叶烟＞番茄的顺序表现寄主效应的显著性差异.在18～21℃条件下,接种携带坏死卫星RNA的CMV强毒株HC4,第5天、第10天和第15天时,基因组RNA和卫星RNA的负荷量均以番茄＞心叶烟＞烟草的顺序表现出显著性差异,并表现出明显的时间效应.不同来源CMV分离物还存在寄主选择性差异.     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV 引起的烟草病毒病发病率达50%以上。GMV 在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步研究与肯定CMV 引起的烟草病毒病,有必要由病株分离病毒和进行电子显微镜观察鉴定。     

烟草花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用TMV免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得10株能稳定传代並分泌抗烟草花叶病毒(TMV)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中T73McAb滴度最高,ELISA滴度高达1/655,360,能被TMV兔免疫血清所阻断,能中和TMV的感染性。但与其它植物病毒无交叉反应,与TMV不同毒株均有反应。     

浙江油菜花叶病毒类型研究

浙江各地引起油菜花叶病的病毒类型有芜菁花叶病毒(TpMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、菸花叶病毒(TMV)及芜菁花叶病毒和黄瓜花叶病毒的复合病(TpMV+cMV)。芜菁花叶病毒有TpMV98。和TpMV98 两个毒株,主要区别： TpMV98不侵染心叶菸,TpMV58 侵染心叶菸引起的系统性枯斑和系统性环斑能随环境的影响相互转变。黄瓜花叶病毒有CMV69和CMV72 两个毒株,主要区别：CMV69,回接不上本地油菜,CMV72 能回接上本地油菜。菸花叶病毒毒株(TMV45)侵染多种十字花科植物,在胜利油菜上引起系统花叶,在苋桥红萝卜上是无病状带毒,在农特400号菸上引起局部枯斑。TPMV98和CMV69 或CMV72 形成复合病,可以汁液接种分离,再混合再分离。根据采集样品按类型和毒株来看,浙江大田油菜花叶病,绝大多数是芜菁花叶病毒类型中的TpMV98毒株,复合病和黄瓜花叶病毒分布也相当广。辣根(Cochlearia armoracia L.)上所采的四个样品均属芜菩花叶病毒中侵染心叶菸的TpMV58毒株,辣根的宿根可以保存病毒,可能是这一毒株的越夏寄主之一。     

长叶车前花叶病毒上海分离株单克隆抗体的制备及其免疫学特性——Ⅱ单克隆抗体免疫反应方法及在株系鉴别上的应用

采用两种不同的ELISA方法比较了长叶车前花叶病毒上海分离株(RMVsh)7种单克隆抗体对完整病毒及其外壳蛋白的反应。结果表明不同的单克隆抗体在两种ELISA方法中的反应特性各异。这可能由于ELISA方法对抗原结构的影响而导致抗原抗体结合的不同。比较烟草花叶病毒群的7个分离株对RMVsh单克隆抗体和兔多克隆抗体的反应。结果表明单克隆抗体能与属于RMV的3个分离株起反应,并能将它们区分开来,与属于TMV的4个分离株均无反应。而兔多克隆抗体与这7个分离株均有较强的反应,但难以区分各株系。表明单克隆抗体在株系鉴别上具有高度的特异性。     

油菜花叶病毒(YMV_(15))的大小、形状、结构及其蛋白亚基的化学特征

在前此的工作中我们对于国内分离的四种烟草花叶病毒(TMV)毒株进行了比较研究,结果发现油菜花叶病毒YMV_(15)的性质最为特殊。在物化性质方面,YMV_(15)的分子很容易聚集成束,等电点较高。在化学结构方面,它的氨基酸组成中有组氨酸和甲硫氨     

从烟草上分离的黄瓜花叶病毒

黄瓜花叶病毒(CMV)危害烟草已成为烟区严重病害之一,如山东烟区CMV引起的烟草病毒病发病率达50%以上。CMV在福建烟区的发病率也达15～30%。上述调查系根据烟草田间症状表现以及温室内不同鉴别寄主的反应和抗性测定得到。为了进一步     

杆状病毒p35基因诱导烟草产生广谱抗病机理分析

来源于昆虫病毒和动物的抗细胞凋亡基因能够诱导植物对生物或者非生物胁迫产生抗性.但其抗性机理有不同甚至相反的报道.本研究将来源于苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒的p35基因转化烟草,T1代转化烟草Western blotting检测P35蛋白的表达,转化烟草接种烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)抗病效果增强.进一步的抗病机理研究表明,转化和野生型烟草感染TMV后诱导过氧化氢积累无明显区别,野生型烟草感染24 h后出现DNA Laddering而转化烟草则没有;Western blotting结果显示PR-1蛋白表达没有显著差异.但接种另外一种病原真菌核盘茵(Sclerotiniasclerotiorum)后的RT-PCR分析结果表明,表达P35蛋白的烟草可增强感染核盘菌后PR-1基因的转录.而且表达时间提前.以上结果说明p35基因介导的广谱抗病反应的机理与接种的不同病原有关,对不同病原物的抗病机理存在差异,除抑制细胞凋亡外,还可能通过激活PR基因的表达提高对病原物的抗病能力.     

豆科植物上分离的黄瓜花叶病毒（CMV）五个分离物的比较研究

从豌豆、扁豆、菜豆和赤豆分离到五个ＣＭＶ分离物,除寄主反应及核酸组分外,５个分离物在体外抗性、蚜虫传毒、提纯病毒粒体形态和稳定性、衣壳蛋白分子过和病毒粒体迁移率等方面无明显差异．在琼脂糖双扩散试验中五个分离物与ＣＭＶ抗血清形成的沉淀线相互融合,在Ａ蛋白双抗体夹心ＥＬＢＡ测定中,也无明显差异。根据在四种豆科植物上的症状反应,五个分离物可归为两个型：Ⅰ型在豌豆、蚕豆、菜豆和豇豆上产生局部枯斑症状;Ⅱ型在这四种植物上产生系统症状。五个分离物中,ＣＭＶＰ＿２含有五个枝酸组分,其它分离物为四个组分,即ＣＭＶＰ＿２可能含有卫星ＲＮＡ．     

抗鸡新城疫病毒单克隆抗体及所测定的毒株的抗原差异

作者以3种不同毒力型的新城疫病毒(NDV)为免疫抗原,获得21株特异单克隆抗体(以下简称单抗),按其血凝抑制、溶血抑制和病毒中和能力的不同,将它们分成3组。21株单抗中有15株与所有被试的35个国内外分离的参考毒株起反应,另外6株单抗仅与部份毒株起反应。根据与上述单抗的不同反应谱,将这些NDV毒株分成7个群,同一群内的毒株在重要的流行病学和生物学特征方面一致。单抗LD_2、LC10-5只与疫苗毒株B1、La Sota及其克隆化毒株N79及1株生物学特性不明的野外分离物起反应。     

银胶菊(Parthenium hysterophorus)中抗TMV活性成分的分离及活性测定

采用活性跟踪法从银胶菊中分离获得抗病毒活性物质,经质谱和核磁共振分析,确定该物质为小白菊内酯.采用半叶枯斑法和叶圆盘法测定了其对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制效果,结果表明:0.2 mg/mL的小白菊内酯在混合接种和药液浸泡两种处理中均表现出较好的体外抑制TMV活性,其抑制率分别为69.0%和72.1%;在离体条件下对烟草叶圆盘中的烟草花叶病毒复制也具有良好的抑制效果,抑制率为72.3%.     

侵染西番莲属(Passiflora)植物的五个黄瓜花叶病毒分离物的特性比较

从紫果西番莲(Passiflora edulis)、杂交种西番莲(P. edulis X P.edulis var. flavicarpa)、黄果西番莲(P.edulis var. flavicarpa)、转心莲(P.caerulea)及龙珠果(P.foetida)分离到的5个黄瓜花叶病毒(CMV)分离物(PE、PE2、PEf、PC、PF)所作的生物学性质、理化特性和血清学关系的比较研究结果表明,5个分离物在寄主反应及血清学性质上存在不同,而在病毒粒体形态、体外抗性、蚜虫传毒和病毒外壳蛋白分子量方面无明显差异.根据5个分离物的寄主反应和血清学关系,可将其区分为CMV的两个亚组,其中PE、PE2、PC和PF属CMV亚组I,PEf属CMV亚组II.