氨基酸定性分析技术的一些改进 Ⅰ.快速水解和高温滤纸层析

(1)提供了一种快速水解液,蛋白貭或多肽完全水解仅需20分鉀至2小时,其配制方法是:12NHCl:85%甲酸:水=2∶1∶1。水解温度160—180度。(2)提供了氨基酸高溫层析法及正丁醇:呲啶系統可在4小时內完成单向层析,10小时內完成双向层析,其溶剂系統各成分的比例如下: 酸性溶剂系統:(1)正丁醇:85%甲酸:水=15∶3∶2。(2)正丁醇:冰醋酸:95%乙醇:水=4∶1∶1∶2。溶剂(1)适用于单向层析和双向层析的第一向,溶剂(2)适用于单向层析。硷性溶剂系統:正丁醇:呲啶:60%乙醇:水=5∶1∶1∶1。此溶剂适用于双向层析的第二向。(3)高溫层析的温度有二种:(1)在40—45度进行(2)60度进行一半移室温完成。前者較易操作,重复性也較強。(4)引用了等的吲(口乃木)醌显色法,对氨基酸的分辨极有帮助,并发現一些氨基酸的衍生物或多肽也均显不同顏色。(5)經选择后的新华定性滤紙层析效果頗佳。     

蚕氨基酸代谢之研究 Ⅱ.比较家蚕和野蚕谷氨酰胺酶及天门冬酰胺酶,蓖麻蚕丝腺体中天门冬酰胺酶之提取及其性质之研究

(1)比較家蚕(华九-云瀚)和野蚕(萞麻蚕、柞蚕和樗蚕)之谷氨酰胺酶及天門冬酰胺酶之活力,发現在萞麻蚕絲腺体后部之細胞顆粒部分中,存在有活力甚強之天門冬酰胺酶。(2)自萞麻蚕絲腺体后部提取之天門冬酰胺酶制品中,不含有谷丙轉氨酶、谷天轉氨酶及谷氨酰胺酶。(3)L-天門冬酰胺之酶促水解作用在1小时过程中,活力和作用时間基本土表現直线关系。(4)萞麻蚕絲腺体后部之天門冬酰胺酶和哺乳类动物、植物及微生物之pH影响相同;在pH5以下不稳定,最适pH为8。(5)天門冬酰胺酶对热不稳定,先以不同温度和酶溶液作用10分钟,60℃时,活力丧失80%左右。(6)对氯汞苯甲酸(10~(-4)M)抑制天門冬酰胺酶20%,溴化乙酰胺(10~(-3)M)及DL-环絲氨酸(10~(-3)M)抑制15%。     

聚酰胺薄膜层析及其用于蛋白质化学分析

聚酰胺薄膜层析是1966年后发展起来的一种新层析技术。特别在用于分析氨基酸衍生物——DNS-氨基酸、DNP-氨基酸和PTH-氨基酸时,具有灵敏度高、分辨力强、速度快、操作方便等优点,超过了过去分析这类化合物使用的纸层析、纸电泳、硅胶薄板层析等方法。在蛋白质化学结构分析中,聚酰胺薄膜层析结     

反相高效液相色谱用于几种氨基酸的定量分析

采用高效液相色谱法等浓度的洗脱天门冬氨酸、谷氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺,分析氮代谢中几个主要氨基酸。由邻苯二甲醛(OPT)和β-巯基乙醇柱前衍生反应,在14分钟内可同时测定四种氨基酸。测试样品经预处理。生成荧光性的衍生物1-硫代烃基-2-烃基异吲哚。反应是瞬时的,其荧光量子     

逆相紙上层析分离高級脂肪酸

紙上层析也是属于分配层析方法之一,分配层析是根据有机物在两个互不相溶解的液相內的分配系数的不同而其——分开。紙上层析就是以滤紙及在滤紙上吸附的溶剂做固定相,另一种溶剂系統做移动相将試样展谱分离。其中以滤紙的吸附水和极性溶剂做     

不同产地藏红花游离氨基酸比较分析

目的：研究不同产地藏红花中游离氨基酸含量，为藏红花的研究、产品设计和开发提供理论支持。方法：以云南维西、上海、西藏、伊朗等地藏红花为实验材料，采用氨基酸自动分析仪对藏红花中游离氨基酸进行了测定。结果：（1）供试样品中除上海样品中检出17种游离氨基酸，其余样品均检出18种氨基酸，各样品中氨基酸总量分别为维西3号样品（编号为W3）981.464(mg/100 g)、维西2号样品（编号为W2）882.646 (mg/100 g)、维西1号样品（编号为W1）785.140 (mg/100 g)、西藏样品（编号为XZ）325.106 (mg/100 g)，上海样品（编号为SH）312.369 (mg/100 g)、伊朗样品（编号为YL）310.427 (mg/100 g);(2)在游离氨基酸中，有赖氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸等6种人体必需氨基酸；有谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺和天门冬氨酸等4种鲜味氨基酸；有丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸等3种甜味氨基酸；有冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等9种药效氨基酸；（3）藏红花游离氨基酸中，丙氨酸含量最...     

谷氨酸合酶活力的快速测定

1974年依赖铁氧还蛋白的谷氨酸合酶(Gluta-mate Synthase,EC 1.4.7.1.)的发现证明植物主要通过谷氨酰胺合成酶/谷氨酸合酶途径进行氨的同化。在这个氨同化途径中,谷氨酸合酶是限速酶,它催化一分子谷氨酰胺和一分子α-酮戊二酸形成两分子的谷氨酸。谷氨酸合酶活力测定的关键是如何把产物谷氨酸与反应液中的其它组分,尤其是底物(谷氨酰胺)分开。纸层析、纸电泳、同位素、氨基酸自动分析和高压液相层析     

三化螟与荔枝蝽体液氨基酸和脂肪体转氨酶与谷氨酸脱氢酶的研究

1.用纸层析的方法测定了水稻、三化螟与荔枝蝽体液的氨基酸含量。2.在三化螟幼虫脂肪体中,观察到谷天转氨酶、谷丙转氨酶与鸟氨酸转氨酶的活力。在荔枝蝽的脂肪体中有11种氨基酸(L-天门冬氨酸、L-丙氨酸、L-异白氨酸、L-白氨酸、L-缬氨酸、L-苯丙氨酸、L-鸟氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸、L-β-丙氨酸与DL-γ-氨基丁酸)可与α-酮戊二酸进行转氨作用,以形成谷氨酸。3.在三化螟与荔枝蝽脂肪体中均存在谷氨酸脱氢酶。     

1-氟-2,4-二硝基苯对于核酸降解物的反应和产物性质的研究

(一)本文提出FDNB与核酸降解物的反应条件,并制备了DNP-尿嘧啶,DNP-胸腺嘧啶和DNP-尿嘧啶核苷等新化合物。(二)研究了化合物紫外綫和紅外綫吸收光譜,并与反应前作比較和探討了这些化合物的結构。(三)对化合物在不同推进剂下的层析行为,以及不同酸碱条件下的稳定性进行了研究。DNP-結合物在酸性溶液中較在碱性溶液中稳定。(四)DNP-尿嘧啶核苷在稀碱溶液中可以呈色,5—10微克可借0.1N NaOH溶液噴雾在紙上显影。显色后顏色稳定,能遵守Beer氏定律,在每毫升含量为2—20微克內,光密度与溶液浓度成直綫关系。(五)提出了一个自DNP-結合物中测定DNP-基含量的分光光度方法。     

茭白膨大期间游离氨基酸含量的变化

本试验测定了两熟茭白(Zizania latifolia )品种“广益”茭秋茭膨大期间肉质茎中游离氨基酸含量的动态变化。从“孕茭”始期开始,每4天取20株膨大肉质茎混匀。共测定6次。游离氨基酸用4％磺基水杨酸提取,然后用Waters-244型高压液相色谱仪分析。主要结果如下:1.茭白膨大过程中,所测得的18种游离氨基酸以天门冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸、酪氨酸和组氨酸含量较高,而蛋氨酸和甘氨酸的含量相对较低,其它氨基酸含量中等。天门冬氨酸、苏氨酸(包括天门冬酰胺和谷酰胺)一直呈增加趋势。而丝氨酸谷氨酸甘氨酸丙氨酸缬氨酸酪氨酸和精氢酸在前期提高.后期下降:蛋     

血清苯丙氨酸的纸层析测定法

本文报告一种改进的纸层析法,其原理为先将血清去蛋白质并脱盐,然后进行层析。溶剂系统为正丁醇:甲酸:水(15∶3∶2)。所得结果清晰,斑点也较集中。适用于苯酮尿病的诊断和随访;并可用于筛选,由于先天性代谢缺陷而引起的氨基酸代谢障碍和诊断,由于肾小管功能缺陷(先天性或后天性)所形成的氨基酸尿。     

谷氨酰胺和N-乙酰-L-谷氨酰胺的发酵及其发酵转换机制

<正> 一、前言 1957年木下等发表谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)进行谷氨酸的工业生产以来,日本的氨基酸发酵生产的研究有很大的进展。很多氨基酸已能用发酵法生产。谷氨酰胺和N-乙酰-I-谷氨酰胺(N-AGM)作为胃溃疡、十二指肠溃疡病等的抗溃疡病药物正在大量应用。作者等应用谷氨酸产生菌谷氨酸棒杆菌的野生株,通过控制环境因素使谷氨酸发酵转换成谷氨酰胺和N-AGM发酵,建立了这些氨基酸的工业生产方法。同时也研究了从谷氨酸发酵转换生产脯氨酸的方法。通过改变培养条件,用谷氨酸棒杆菌使发     

氨基酸分析法快速测定梭曼中毒后大鼠脑组织中兴奋性氨基酸的含量

建立一种快速、准确、可靠的脑内兴奋性氨基酸定量检测方法 ,并观察梭曼惊厥后大鼠脑组织中兴奋性氨基酸(EAAs)含量变化。采用 6 30 0黄金系统氨基酸分析仪 ,在锂柱 130min程序生理体液分析方法基础上 ,根据兴奋性氨基酸(EAAs)的特性 ,建立了EAAs的快速测定方法 ,并用此方法对梭曼惊厥后不同时相大鼠的新鲜脑组织进行定位检测。梭曼诱发惊厥后大脑皮质和海马内谷氨酸和天冬门氨酸水平显著下降。惊厥 30min时谷氨酸下降最明显 ,分别是正常组的 5 3.2 %和 5 2 .8%。天门冬氨酸更易受梭曼中毒的影响 ,惊厥后 5、30、90min 3个时相点测定值均显著下降。此方法完成谷氨酸和天门冬氨酸分析的时间是 2 0min ,比原方法缩短了 110min ;且有较好的重现性 (GluCV :日内 1.86 % ,日间 2 .32 % ;AspCV :日内 1.42 ,日间 2 .48% )和回收率 (Glu 97.7% ;Asp97.3% )。兴奋性氨基酸参与了梭曼中毒性惊厥的病理生理过程。本方法定量检测兴奋性氨基酸快速、准确 ,并利于大批量样品的快速测定     

从绿茶中浸提茶氨酸

茶氨酸,学名为N-乙基-γ-L-谷氨酰胺,化学式为C7H14O3N2,属于酰胺类化合物。主要存在于绿茶叶中。纯净的茶氨酸为白色针状晶体;具有焦糖香和类似于味精(谷氨酸钠)的鲜爽味;难溶于无水乙醇、乙醚和汽油等有机溶剂,极易溶于水;常压下,熔点为490～491K(同时发生分解反应)。茶氨酸在水溶液中能够发生弱电解质行为,其水溶液显示弱酸性：在6mol／LHCl溶液中还能够发生水解反应,生成L-谷氨酸[又称左     

L—谷氨酰胺高产菌株的选育

本文着重介绍了以野生型谷氨酸产生菌ATCC14067为亲株,经过亚硝基胍处理,筛选对磺胺胍具有抗性的突变株,再经过生长试验及稳定性试验,最后选育出两株稳定性好、付产物谷氨酸少的L—谷氨酰胺高产菌株。 L—谷氨酰胺(L—2—氨基戊二酸—酰胺)是L-谷氨酸的r-羧基酰胺化,在医药上是一种极有价值的氨基酸。自1952年用X光衍射确定了其分子结构后,对它的应用日益引起人们的关注。目前国外临床上主要用于治疗精神萎靡、酒精中毒及胃和十二指肠溃疡等疾病;它又是合成脑功能改善药N—乙酰谷酰胺的重要中间物。从谷氨酸产生菌的野生型菌株ATCC14067通过改变发酵条件直接发酵生产L-谷氨酰胺,我们以前曾有过报导。我们通过诱变选育到两株对磺胺胍具有抗性的变异株。变异株的谷氨酰胺产量提高,发酵付产品谷氨酸的量也有减少,为以后提取分离提供了方便。     

纤维素板微量氨基酸的分离及几种显色方法的比较

氨基酸分析是研究蛋白质化学的最基本的实验技术之一。现在已经普遍地使用离子交换层析、纸层析、纸电泳、薄层层析等方法分离、分析氨基酸。其中自动化的离子交换层析方法分析具有快速、微量和准确等特点,但需要昂贵的仪器设备,在一般实验室里不易办到。纸层析和薄层层析的方法,设备要求简单,操作方便,操作熟练时也可达到定量的要求。也可以用纤维素薄层层析的方法分离分析氨基酸,并已用于尿和血样品以及其他蛋白质中的氨基酸测定。经我们初步摸索,使用一种小型的纤维素板层析,并将茚三酮试剂直接加入展层溶剂中,蛋白质经酸水解后,可得到完全分开的普通     

L-谷氨酸的综合利用 Ⅰ报:从 L-谷氨酸制取 L-谷氨酰胺

<正> 前言L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是自然界中存在的一种氨基酸,它已广泛用于生化和医药,对神经障碍及癫痫病人的脑机能有改善作用。特别对消化器官溃疡的治疗有卓越的效果。由于它的价格高,应用受到极大限制。其主要原因是不能采用一般制备酰胺的方法来制取。如以L-谷氨酸-r-甲酯为原料。直接在氨溶液中进行酰胺化时。产物     

大肠杆菌可溶性核糖核酸的研究 Ⅲ.可溶性核糖核酸5’-磷酸单酯末端核苷酸的排列

(1)比较了E.coli DNP-S-RNA和S-RNA的紫外光谱,并研究了DNP-S-RNA的RNase I的降解条件,结果表明两者无显著差别。(2)对DNP-S-RNA的RNase I降解产物的双向电泳层析图谱进行了分析,并与S-RNA图谱进行了比较,两者图谱中光吸收点的分布一致,相应点经洗脱后,由光谱分析与核碱组成测定证明均含有相同的核苷酸组成。(3)在DNP-S-RNA和S-RNA于同一条件下得到的图谱中,前者的某些光吸收点中含有不同量的DNP-。根据DNP-可以标记S-RNA末端5′-磷酸单酯,分析了DNP-结合物,说明在E.coli S-RNA分子中,B末端核苷酸除pGp…以外,尚有pAp…,pCp…以及痕量的pUp…。和末端相邻的核苷酸排列形式,随特异S-RNA而有不同,有pGpUp…,pGpCp…,p(GpGpAp)Up…,p(GpAp)Up…+pGpGpUp…,p(GpAp)Cp…,pApUp…和pApCp…。其他四核苷酸以上多核苷酸未分析。由于电泳和层析后原点部分标记了DNP-,估计末端核苷酸排列有五、六核苷酸以上的多嘌呤核苷酸的排列形式,其中以G为主。     

精氨酸纸层析鉴定的理想展开剂

本文通过大量筛选,找到一组溶剂系统,其溶剂组成为正丁醇∶醋酸∶乙醇∶水(8∶2∶2∶5)。该溶剂系统在纸层析中能有效地将精氨酸与赖氨酸和组氨酸分开,经多方面考察,我们认为该溶剂系统适宜于作精氮提取工艺中纸层析组份鉴定的展开剂。