质粒研究与载体构建

922017含诱变白喉毒素A一链编码序列质一粒的构建和农达〔英」/F isher,K.S。…了Infeet.Immun一x991,69(20)一3562~3565〔译自DBA,1991,10(23),91一13322〕 用编码白喉棒杆菌(Co,鱿,e乙acte,￡“仍‘￡-尹hth。川““)白喉毒素一A链片段(DT一A)转染可杀死细胞。构建了含3种突变DT一A编码序列(用Asp、Ser或Gln置换Glu一145)的表达载体。突变毒素的体外ADP核糖基化活性降低到1/100~1/300。在用含虫荧光素酶报道基因质粒的HeLa和293细胞进行的共转染实验中测定了这些构建物的毒性。比较了3种新的DT一A突变质粒和含野生型DT一A的…     

质粒研究与载体构建

9忍1137xyIE谷因的反义转录[英〕/Danneber‘G.…I口iotee五Forum Eur一2902一。(7~8)一473~474[译自DBA,1992,1一(20),92一11145〕 质粒pFM27w是一个15kb的穿梭载体,它含有反义于la。启动子的恶臭假单胞菌DSM549的xy1E基因,并能在大肠杆菌和假单胞菌类中复制。由xv1E表达儿茶酚一2,3一二氧酶,是由laePO驱动的反义mRNA调控的。la。抑制蛋白结合到lac操纵基因上时,只有xy1E有义InRNA存在,可获转译,在儿茶酚存在时,可产生黄色物质(2-经基钻多褚酸半醛)。活性la。抑制蛋白不存在时,由1;IcPO驱动的反义转录阻止了xy1E mRNA的转译,…     

质粒研究与载体构建

920814蟀传染的脑炎病毒cONA克隆片段的分子杂交〔英〕/Pogodina,V。V。…/Aeta Virol一1901,35(i)一71~80〔_译自DBA,1991,10 (15),91一08440〕 以重组D NA质粒做探针,在潜伏期、急病期和持续感染叙利亚仓鼠时检测脾传染的脑炎(TB-E)病毒RNA。通过克隆TBE病毒RNA(大于染色体RNA的50%)的非交叠的RNA拷贝构建探针。构建T质粒pBR一TBEVi、pBR一TBEV7、pBR-TBEVio和pBR一TBEVis,“ZP放射标记后用于dot一blot杂交。在感染后的最初三周内,脑中直接的病毒分离率和RNA检测率为100%,病毒滴度在1.9,至10.5.LDs0/口1范围内,…     

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950784一套有潮霉素抗性的逆转录病毒载体的构建[英]/Gaken,J.…,BioTechniques.-1992,13(1).-32,--'34[译自DBA,1992,11(17),92-09536] 构建了髓细胞增生性肉瘤病毒(MPSV)的4种载体,利用潮霉素一B可选择被感染的细胞。将新霉素一磷酸转移酶neo编码序列从质粒pTKmos一3中去除,再将含潮霉素抗性(HmR)基因的钝端HindⅢ一XhoI片段(1332bp)连到胸腺嘧啶激酶TK启动子的HindIII 3,位点上,构建出质粒pTK—Hygro。分别从载体MPSV sup28和MsPneo—sup取掉一个1.9kb的XhoI片段(含neo基因),再将一个1712bp的SalI/XhoI片段(含SV40启动…     

质粒研究与载体构建

930006由嗜酸乳酸杆菌TK8912的质粒产生的细■素麓其免疫性[英3/Kanatani,K.…/Biosci.Bio—teChnol Biochem.一1992,56(4).-648"-'651[译自DBA,1992,11(13),92-07238] 本文提供的一些数据表明质粒pLAl03与嗜酸乳酸杆菌(L口clD6口ci ZZ”8 acidopliilus)TK8912产生细菌素有关,与该菌免疫性也有关。该菌产生一种抗菌物质,acidocin.8912,可抑制一些乳杆菌或乳球菌。在MRS肉汤中,acidocin一8912的形成量在30℃最高。该物质对热处理(120℃,20分钟)稳定,但易被蛋白酶钝化。消除pLAl03后,菌体就不产生acidocin一8912(Acd‘)和寄主免疫性…     

质粒研究与载体构建

930388稠用失控复舒誓质粒使豳曹中的克隆基因大量生产誓白C英~/NordStrom,K.…/Bio/Techno.10gy.-1992,10 t(6).-661"-'666[译自DBA,1992,11(15),92-08370] 对失控复制(RR)型载体作了如下综述。(1)质粒复f-lf的控嗣(一般情况,质粒R1的拷贝数控制系统,提高repA转录的效应), (2)RR系统(集中转录,失控复制,RR载体); (3)RR竞窿系统的利用(有正常蛋白合成时质粒DNA的扩增,蛋白的增加,由克隆在RR载体中的基因产生蛋白,联合系统,采用RR质粒的遗传筛选方法,用RR载俸作生理学研究,RR复制子在细胞周期研究中的应用),(4)对今后工作的预测j…     

质粒研究与载体构建

923513培并于限甲硫氮酸化学稳态条件下的大肠杆菌NF161(reIA+)和NF162(reIA)中质粒PBR322的稳定性〔英〕/Hofmann,K.H.…了Aeta Bio-teehnol一1091,11(4)一403~406一〔译自DBA,1992,11(7),92一03607〕 在限甲硫氨酸化学稳态条件(1。。ml体积、通气101/hr、30℃、pH7.0),测定了标题所述两菌株中质粒pBR322的稳定性。只有在低稀释率(0 .13/hr)下,而且接种静止期的菌,菌株NF162才发生明显的质粒遗失。最初,质粒含量逐步上升,经6。体积变化后达到最大量。刀一内酸胺酶活性亦达到顶点。这一行为源于pBR322在NF162接种菌中的扩增。如…     

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922365 甲基营养细菌中新质粒的鉴别[英]/Brenner,V.…∥Antonie Leeuwenhoek J.Microbiol.-1991,60(1).-43～48[译自DBA,1991,10(25),91-14504] 从50种甲基营养菌菌株(其中30种来自土壤)中筛选质粒DNA。用碱性清除溶菌物法从专性甲基营养型甲基单胞菌属(Methylomonas sp.)菌株R103a中分离出36kb质粒pIH36,并构建了其限制性图谱。检测了甲基杆菌属(Methylobacterium)桃红色色素的兼性甲基营养菌中的4种质粒;菌株R15d中的质粒plB200(200kb)和pIB14(14kb),菌株M17中的pWU14(14kb)和     

质粒研究与载体构建

924281 嵌合质粒RSFIO10衍生物由大肠杆菌向枯草芽抱杆 菌的接合迁移[俄」/Doroshenko,V.G.…I B iotekhnologiya一1992,z一23一25〔译自DBA, 1992,11(11),92一06026〕 构建了穿梭载体质粒pERsF,它含有RSF 1010的复制子和迁移系统(来自质粒pAYC32)及 温敏复制子pE194(来自质粒pTVI)。质粒 pERSF可被枯草芽抱杆菌细胞稳定遗传,且在非选 择条件下经重复继代培养也不会遗失。通过接合只 能将pERSF由大肠杆菌C600转人大肠杆菌W335。 和枯草芽抱杆菌168。菌株168的所有氯霉素抗性转 接合体都是热敏型的。缺少将质粒由大肠杆菌转入…     

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920410可在蓝燕株系PCC7120中分析启动子的载体〔英〕/Tang,J.D.…了J.Baeteriol一1901,i了3 (s)一2729~2731〔译自DBA,1991,10(12),91一06654〕 构建了启动子探测载体pJL3,它含有一个多克隆位点、cat基因(不带启动子)以及转录终止子。经接合将其从大肠杆菌转移至Aoaba‘。a“P.PCC7iZo中。新质粒的成分来源于:质粒pRL25C (含大肠杆菌和兰藻复制子)、新霉素杭性标记、bom接合转移区、质粒pDUI(从丝态兰细菌分离到)以及pBR322的序列。描述了该载体质粒的详细构建过程。Aoaba。:a psbB基因编码光合系统n中的一种分子量47000的叶绿…     

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920009构睡能在AmyeolatoPsis mediterranei中盆御的杂交质较〔英〕/Lal,R.…/ApPI.Environ.Mierobiol一2991,57(3)一665~671[译自DBA,1991,10(9),91一94832〕 从A.仍e“‘e,,“。e‘DSM43387中分离到质粒pA387(29.6kb)。经原生质体化、澳乙咤或热处理可低频消除该质粒。该质粒属游离型,不整合到染色体中。将一个5.Ikb的pA38了片段擂人大肠杆菌载体质粒pDM10中,构建成杂交质粒pRLI。该质粒可被电激转化至A.仍。J“e,,a。。云及A。o,亏e:‘a乙妞s中。对前者,用i2.skV/em、10。6也sec条件,转化频率为22。。/拼9 DNA;对后者,用7.s…     

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92引47抗杀稻疽菌素一S的大肠杆菌TK121的杀稻瘟菌素一S一脱氨酶N末端氨基酸序列以及bsr基因的核普酸序列〔英〕/Kobayashi,K.…了Agrie.Biol.Chem一1991,55(12)。一3155~3157〔译自DBA,1992,11(5),92一02402〕 分离到抗杀稻瘟菌素一S(BS)的蜡状芽抱杆菌K55一51菌株,并分离到BS脱氢酶(BSD)。构建了含有BSD基因(bsr)的质粒pBSRs(10.5kb)。将其再克隆到枯草杆菌及大肠杆菌TK121中,已将bsr基因定位于pTK17中的一个1。5 kbEcoRI一BamHI片段上(内含一个单一的Bglll位点)。用M13链终止法测定DNA序列,在测定的Nde工一Hincn片段中…     

质粒研究与载体构建

922767用于抗体筛选的农面表达载体〔英〕/Breitling,F.…/Gene。一1901,104(2),一i‘7~153仁译自DBA,1092,11(3),92一012凌03 构建了一种新载体(质粒噬菌体pSEX),它表达与大肠杆菌噬菌体基因一皿蛋白融合的单链抗体(Ab)。通过此载体可用少量抗原从大基因库中筛选出专性Abs。在无1 PTG存在下通过野生型一21一噬菌体在大肠杆菌JM101里诱导产生了抗溶菌酶Ab一plll融合蛋白。利用针对重链和轻链间衔接序列的表位的单克隆Ab,以及N一末端序列的抗血清 鉴定了这种融合蛋白。此融合蛋白能与上述抗原结 合,组合到侵染性质粒噬菌体粒子里(能…     

质粒研究与载体构建

921607应用乳酸乳球菌的lacG基因构建乳酸菌的启动子探测毅体〔会,英〕/SimonS,G.“·,Dev.Ind.Mierobiol一i。。o,31一31一39〔译自DBA,1991,10(21),91一12056〕 用乳酸乳球菌(Laetococe。。laet名s)NCDO712的6一磷谓一D一半乳糖昔酶(lacG)的无启动子基因,构建了启动子探测载体pNZ336。将一个含多个限制位点及3个读码框终止密码子的DNA片段插入laeG基因的Shine一Dalgarno序列上游。作为选择标记,该载体含有金黄色葡萄球菌质粒pC194和pUBllo的氯霉素抗性及卡那霉素抗性基一23一因,二者在革兰氏阳性、阴性菌中均有功能。该载体还…     

质粒研究与载体构建

95。1530导致嗜热链球菌中重组质粒不稳定的DNA结构[英]/Solaiman,D.K.Y.…,Biotechn01.Lett..1992,14(9).一753～758[译自DBA,1992,11(23),92—12859] 通过电转化法把双功能载体质粒p BN 183导人嗜热链球菌STl281]寸,检测到各种缺失型质粒。用这些质粒转化大肠杆菌H B101。24个克隆的小质粒筛选可鉴定5个主要的质粒缺失种。把这些质粒重新导入嗜热链球菌STl28后表明,它们的结构是稳定的。用重组质粒pDC02和pDC03(包括链露菌胆固醇氧化酶基因)获得类似结果。缺失质粒的限制性图谱分析确定出转化DNA中的缺失pro。ne区。序列测定显…     

质粒研究与载体构建

923899通过消质粒研究与载体构建~~     

Livin shRNA质粒载体的构建及评价

目的:构建有效的Livin shRNA重组质粒.方法:设计、合成Livin shRNA,与pGenesil-1质粒载体链接构建重组质粒,通过酶切电泳、基因测序证实是否正确构建,通过转染高表达Livin的大肠癌HT-29细胞检测Livin mRNA下降水平,筛选出最佳的shRNA.结果:重组质粒pGenesil-shRNA经酶切电泳、基因测序证明寡核苷酸片段成功插入预计位点,且序列与我们设计合成的完全一致;重组质粒载体转染HT-29细胞后,肿瘤细胞Livin mRNA含量较转染前及对照组均有明显的下降(p＜0.01),其中尤以Livin1抑制作用明显,抑制率达到66%.结论:我们正确构建了Livin ShRNA重组质粒,且制备的shRNA能有效抑制Livin基因的表达,为探讨针对Livin基因的RNAi对肿瘤的治疗奠实验基础.     

链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体的构建

本文报道了链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体pSE-3的构建;把具有双启动子的大肠杆菌的质粒pGEM-3与新霉素抗性基因启动子缺失的链霉菌的探针质粒pIJ486分别用BamHI和BglⅡ酶切,T4 DNA连接酶连接后转化到E.coli HB101(Amp(?),Neo(?)),所得重组质粒能强启动pIJ486质粒上的氨基糖苷磷酸转移酶基因(aph),并使新霉素抗性基因在大肠杆菌中得到强表达。此重组质粒被命名为pSE-3,当其转化到变青链霉菌TK54(Tsr(?),Neo(?))的原生质体前,新霉素抗性基因亦能得到强表达。酶切结果表明,构建的具有两个启动子的穿梭质粒载体pSE-3上有HindⅢ和EcoRI的单酶位点,拷贝数约为39。经再转化和传代50代等研究表明,穿梭质粒载体pSE-3在链霉菌和大肠杆菌中均是稳定的。为某些有应用价值的目的基因在大肠杆菌和链霉菌中的克隆与表达提供了一个有价值的穿梭质粒载体。